Detection of Amp C genes encoding for beta-lactamases in Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae

Purpose : Amp C beta-lactamase are Ambler class C enzymes that confer resistance to extended spectrum cephalosporins and are not inhibited by beta-lactamase inhibitors. Their detection is crucial, since the phenotypic tests are not standardised leading to ambiguity in interpretation of results. This study was done to detect the types of Amp C prevalent in Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae by multiplex polymerase chain reaction (PCR). Materials and Methods : Seventy-seven consecutive cefoxitin resistant clinical isolates of E. coli (n = 25) and K. pneumoniae (n = 52) were included in the study. Antibiotic susceptibility testing to various classes of antibiotics was performed by disc diffusion using Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI) guidelines. Minimum inhibitory concentration (MIC) to cefoxitin, imipenem and meropenem were determined by broth microdilution method. Isolates were screened for production of Extended Spectrum Beta-Lactamase (ESBL). Multiplex PCR was performed for the detection of Amp C genes after phenotypic testing (Hodge test and inhibitor based test). Results : Cefoxitin Hodge test was positive in 40 isolates which included 20 E. coli and 20 K. pneumoniae. There was zone enhancement with boronic acid in 55 isolates, of which 36 were K. pneumoniae and 19 were E. coli. Multiplex PCR detected Amp C in 11/25 E. coli and 12/52 K. pneumoniae isolates. The Amp C genes detected were CIT (Amp C origin - Citrobacter freundii), DHA (Dhahran Hospital, Saudi Arabia), ACC (Ambler class C), EBC (Amp C origin - Enterobacter cloacae) groups. ESBL was co-produced in 54 isolates. Conclusions : Amp C was detected in 29.87% of the study isolates. Majority of them co-produced ESBL. The most common Amp C was the CIT family. Screen tests for cefoxitin resistance may be falsely positive due to production of carbapenamases.     

产质粒介导Ⅰ型头孢菌素酶细菌的耐药性及基因型研究

目的 了解华南地区产β内酰胺酶中质粒介导的Ⅰ型头孢菌素(AmpC)酶细菌的耐药性及其基因型特征。方法 收集革兰阴性菌临床分离无重复菌株共1187株，采用头孢西丁三维试验检测AmpC酶，Kirby-Bauer琼脂扩散法检测耐药性；质粒结合试验，聚合酶链反应(PCR)通用引物扩增各组基因及测序以确定AmpC酶基因型。结果 革兰阴性菌头孢西丁三维试验阳性率为5．9％(70／1187)，其中质粒介导的AmpC β内酰胺酶的检出率为大肠杆菌4．2％(19／451)，克雷伯菌属4．7％(16／339)，肠杆菌属2．1％(4／190)，产碱杆菌属5．3％(1／19)，不动杆菌属2．2％(1／45)，总检出率为3．5％(41／1187)。药敏显示结合子对头霉素和氨苄西林耐药，对头孢吡肟和亚胺培南敏感。PCR扩增和测序结果证实为blaDHA-1基因和blaACT-1。基因，主要分布于克雷伯菌属和大肠杆菌属。结论 华南地区质粒介导AmpC酶的基因型以DHA-1和ACT-1为主。第四代头孢菌素和碳青霉烯类药物可作为治疗产质粒介导的AmpC酶细菌感染的有效药物。     

医院获得性鲍曼不动杆菌肺炎六例微生物学及临床观察

目的探讨医院获得性鲍曼不动杆菌肺炎患者临床微生物学特点和治疗转归。方法回顾性调查2005年1～8月白求恩国际和平医院经分子生物学方法证实的6例医院获得性产PER-1型超广谱13内酰胺酶（ESBL）鲍曼不动杆菌肺炎患者的临床资料。用脉冲场凝胶电泳检测6株鲍曼不动杆菌的同源性，聚合酶链反应分析相关耐药基因。结果6株鲍曼不动杆菌中5株仅对亚胺培南敏感，4株对美罗培南敏感。脉冲场凝胶电泳将其分为A1型2株，A2～如型各1株，携有β内酰胺酶blaPER-1基因，同时blaTEM-1型基因、耐消毒剂磺胺药物基因（qacEΔ1-sull）和1类整合子酶基因（intll）阳性，其中3株氨基糖苷类修饰酶基因aac（3）-I、aac（6’）-I同时阳性，2株aac（3）-I、ant（3”）-I同时阳性，1株aac（3）-I单独阳性。6例患者均患有严重的基础疾病，使用过呼吸机；检出鲍曼不动杆菌前15d内应用过广谱抗菌药物；经使用碳青霉烯类和（或）头孢哌酮／舒巴坦抗感染治疗，3例临床好转，3例死亡。结论6株产PER-1型ESBL鲍曼不动杆菌具有高度同源性，耐药基因复杂，其所引起的医院获得性肺炎临床预后差。     

产超广谱β-内酰胺酶细菌的耐药性监测

目的研究2001—2003年大肠埃希菌、克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检出率及对常用抗生素的耐药情况。方法对2001—2003年分离的837株大肠埃希菌、216株克雷伯菌用标准纸片扩散确证法(K-B法)检测其ESBLs产生率。采用K-B法进行药敏检测。结果2001、2002、2003年大肠埃希菌产ESBLs分离率分别为12.3%、15.9%、30.9%,克雷伯菌属产ESBLs分离率分别为23.9%、28.8%、30.0%;产ESBLs株对头胞菌素类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类耐药率均高于非产ESBLs菌株,未发现对亚胺培南耐药的菌株。结论大肠埃希菌、克雷伯菌产ESBLs菌株逐年升高,应引起足够的重视。     

AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶在阴沟肠杆菌中的表达及对其耐药性的影响

目的：研究AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBL）在阴沟肠杆菌中的流行情况及对其耐药性的影响。方法：琼脂稀释法测定最低抑菌浓度（MIC）,三维试验、等电聚焦电泳、接合试验及聚合酶链反应分析耐药菌的产酶情况。结果：106株阴沟肠杆菌中,单纯高产AmpC酶者、单纯产ESBL者、高产AmpC酶并产ESBL者分别占16.0％、10.4％、13.2％。CTX-M型和SHV型ESBL的检出率分别为17.0％（18/106）和6.6％（7/106）。碳青霉烯类抗生素对阴沟肠杆菌均有很好的抗菌活性(MIC90≤2цg/ml)。单纯高产AmpC酶菌对头孢吡肟、阿米卡星、庆大霉素和环丙沙星的敏感率均超过70％;单纯产ESBL菌对哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、环丙沙星和阿米卡星的敏感率均超过60％;高产AmpC酶并产ESBL菌对除碳青霉烯类外的其他抗生素的敏感率均低于25％。结论：CTX-M型ESBL已经在阴沟肠杆菌中流行。产ESBL和高产AmpC酶同样是导致阴沟肠杆菌对第3代头孢菌素耐药的重要原因。ESBL在高产AmpC酶菌株中的流行增强了此类菌株的耐药性。     

2000～2002年北京、上海及广州三地儿童携带流感嗜血杆菌抗生素敏感性监测

目的了解当前我国儿童携带流感嗜血杆菌对常用抗生素的敏感性情况,以便有效指导临床合理用药和预防.方法采用E-test最小抑菌浓度 (MIC) 方法及KB纸片扩散法对2000～2002年北京、上海、广州3所儿童医院上呼吸道感染儿童携带流感嗜血杆菌进行10种常用抗生素敏感性检测.结果氨苄青霉素对898株流感嗜血杆菌的MIC50和MIC90分别为0.25 μg/ml和4 μg/ml,敏感性88.0%,10.6%菌株对氨苄青霉素耐药,所有氨苄青霉素中度敏感株和耐药株均产β-内酰胺酶,分离株产β-内酰胺酶率为12%;分离株对阿莫西林/克拉维酸、头孢曲松、头孢呋辛敏感性均为100%;头孢克罗对分离株MIC50和MIC90分别为1.5 μg/ml和3 μg/ml,敏感性略低(96.1%),耐药率1.8%.流感嗜血杆菌对阿奇霉素、环丙沙星敏感率分别为100%和99%,对氯霉素、四环素、磺胺甲(口恶)唑/甲氧苄氨嘧啶(SMZ/TMP)耐药率分别为11%、18%、54.4%.北京和上海分离株对四环素敏感性分别为57%和61%,明显低于广州分离株(81%);广州和上海分离株对SMZ/TMP敏感性分别为47%和54%,明显高于北京株(35%);2000～2002年的3年中,分离株对氨苄青霉素敏感性呈逐年下降趋势,对氨苄青霉素总体耐药率由2000年的7.7%增加至2002年的14.5%.本研究中,34.5%分离株对8种抗生素均敏感,多重耐药株占12.8%, 敏感株的分布有地区差异.58.5%的分离株分布在5个常见耐药表型中,其中单一SMZ/TMP耐药最多(29.8%);其次,SMZ/TMP和四环素交叉耐药(12.5%),单纯四环素耐药居第三位(9.4%).氨苄青霉素不敏感株对头孢克罗、四环素、SMZ/TMP和氯霉素耐药率分别为23.5%、63.3%、74.5%和63.3%,明显高于氨苄青霉素敏感株(1.6%、51.4%、11.1% 和4.9%);氨苄青霉素与头孢克罗对菌株MIC值呈正相关,与SMZ/TMP和氯霉素对菌株抑菌能力呈负相关.结论三地儿童携带流感嗜血杆菌的产酶率正在上升,导致菌株对氨苄青霉素耐药性增加,分离株对部分抗生素的耐药性有明显地域差异,菌株对氨苄青霉素耐药性与其对氯霉素、SMZ/TMP、头孢克罗耐药性有明显相关性.     

鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药分子机制的研究

目的了解鲍曼不动杆菌对亚胺培南产生耐药的分子机制。方法收集对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌(imipenem resistant Acinetobacter baumannii，IRAB)无重复株共9株，采用琼脂稀释法进行药敏检测，协同抑制试验、质粒接合试验、Southern杂交、等电聚焦电泳、PCR扩增blavIM、blaIMP、baooxA-23、blaoA-24相关基因及整合子编码序列及其分子克隆和测序，以阐述其分子耐药机制。结果本组IRAB具有多重耐药性；耐药基因分子克隆、测序并结合等电聚焦分析证实均产OXA-23型碳青霉烯酶，质粒接合试验、Southern杂交显示其编码基因定位在染色体上。9株细菌均检测出Ⅰ型整合子基因结构(大小约1．2～4kb)；3株菌检测出Ⅱ型整合子基因结构(1．8～2kb)，均携带了多种耐药基因。结论产OXA-23型p内酰胺酶是本组鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素产生耐药性的重要原因；IRAB整合子基因携带的多种耐药基因与其多重耐药性相关。     

脑外伤患者并发下呼吸道感染痰细菌培养和药敏分析

目的:了解严重的脑外伤患者合并下呼吸道感染细菌菌谱分布和体外药敏试验状况、耐药机制、合理指导选用抗生素。方法:严重的脑外伤患者合并下呼吸道感染的痰液作细菌培养,按常规方法分离,应用SENSITITER-sams自动细菌分析仪鉴定到种和作药物敏感试验,采用产色头孢菌素法检测β-内酰胺酶(ESBLs)和双纸片协同试验作超广谱β-内酰胺酶初筛。结果:318份痰标本中分离到237例阳性,细菌207株和酵母样真菌47株,合并感染42例。156株G-杆菌中检出产ESBLs的肺炎克雷伯菌11株和产ESBLs的大肠埃希菌5株;12株金黄色葡萄球菌中检出6株耐苯唑青霉素菌(MRSA),在42株凝固酶阴性葡萄球菌检出24株耐苯唑青霉素菌(MRCNS)。结论:脑外伤患者合并下呼吸道感染的细菌种类多、菌谱复杂,菌株呈现多重耐药性。以非发酵菌感染占多数,铜绿假单胞菌感染居首位。二重感染以合并酵母样真菌多见,革兰阳性球中耐苯唑青霉素的菌株占总数的58.5%。     

鲍曼不动杆菌耐药性及β内酰胺酶基因型研究

目的 明确浙江湖州地区临床分离的鲍曼不动杆菌耐药性及β内酰胺酶基因型。方法 采用ATB药敏试验条板微量肉汤法测定临床分离的60株鲍曼不动杆菌对18种抗菌药物的敏感性，采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析β内酰胺酶基因型。结果 鲍曼不动杆菌对亚胺堵南、美洛培南的耐药率为1．7％，哌拉西林／他唑巴坦的耐药率为48．3％，对其他抗菌药物的耐药率均在50％以上。有18株菌株扩增到SHV型β内酰胺酶，17株为ESBLs SHV—12，另1株(HZ01株)扩增序列全长含826个核苷酸，与SHV—1相比，第35、191、238、240位氨基酸有不同，被命名为SHV-48(GenBank登录号：AY259164)。结论 浙江湖州地区临床分离的鲍曼不动杆菌耐药严重，至少存在3种不同类型的β内酰胺酶，基因型分别为SHV-12、SHV-48、TEM-1。     

产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶菌株的药敏试验结果分析

目的 :了解产 CTX- M型超广谱β-内酰胺酶 (ESBL s)分离株的药物敏感性 ,指导临床用药。方法 :用表型确证试验确定临床标本中产 ESBL s的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌 ,分别用 TEM、SHV和 CTX- M通用引物进行聚合酶链反应 (PCR) ,筛选出 CTX- M基因阳性并且 TEM和 SHV基因阴性的 76株细菌 ,用琼脂稀释法测定其最低抑菌浓度(MIC)。结果 :亚胺培南的抗菌活性最强 ,MIC90 为 0 .2 5 μg/ m L,敏感率为 10 0 % ;其次为阿米卡星和哌拉西林 /他唑巴坦 ,MIC90 分别为 8μg/ m L和 16 μg/ m L,敏感率为 92 .1% ;其对头孢噻肟的耐药与中介率高达 88.2 %。结论 :亚胺培南、阿米卡星和哌拉西林 /他唑巴坦对产 CTX- M型 ESBL s菌有强大的抗菌活性。