高效液相色谱法测定发酵液中放线菌素D的含量

采用高效液相色谱法测定发酵液中放线菌素Ｄ的含量。色谱条件为：ＹＷＧ－Ｃ１８柱，甲醇水（体积比为７２１８）为流动相，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长２５４ｎｍ，方法的精密度、线性关系和回收率均良好，本法简便、快速、经济     

不同固定液对肿瘤细胞形态及细胞膜通透性的影响

目的 观察不同固定液对人胰腺腺泡上皮癌（HPAC）细胞及人宫颈癌HeLa细胞形态及细胞膜通透性的影响。 方法 采用2种固定液对HPAC细胞及人宫颈癌HeLa细胞进行固定：新鲜配制0.25%和4%多聚甲醛溶液;75%和90%乙醇溶液;固定时间均为30 min。以只加完全培养基的细胞作为对照组。光学显微镜下观察各组细胞形态,采用7-氨基放线菌素（7-AAD）荧光染色法观察细胞膜通透性的变化。 结果 与完全培养基组相比,0.25%多聚甲醛溶液组细胞形态最典型,且7-AAD荧光染色较弱;4%多聚甲醛溶液组细胞形态典型,但7-AAD荧光染色较强;90%乙醇溶液组细胞发生肿胀,较正常细胞体积增大,且7-AAD荧光染色强;而75%乙醇溶液组细胞肿胀不如90%乙醇溶液组明显,7-AAD荧光染色强;完全培养基组细胞形态规则,7-AAD荧光染色最弱。 结论 0.25%多聚甲醛溶液对肿瘤细胞不但能够起到固定作用,且能够较好地维持细胞膜的完整性,是较为理想的细胞固定剂。     

甲氨蝶呤、放线菌素D与环磷酰胺联合化疗治疗宫颈妊娠3例

目的:观察及探讨甲氨蝶呤、放线菌素D与环磷酰胺联合化疗治疗宫颈妊娠的疗效及价值。方法:采用甲氨蝶呤、放线菌素D与环磷酰胺联合化疗方案,结合米非司酮口服治疗3例宫颈妊娠患者。治疗后监测血清β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)及B超,观察其治疗效果。结果:3例患者化疗后血清β-HCG值下降明显,保守治疗均获得成功。结论:宫颈妊娠的治疗已趋向于保守治疗。对于血β-HCG值>104mIU/mL或甲氨蝶呤治疗失败的患者,采用甲氨蝶呤、放线菌素D与环磷酰胺联合化疗方案联合米非司酮进行治疗,可获得保守治疗成功,此方法安全有效。     

放线菌素D和沉默COPB2基因对肝癌细胞的增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探究放线菌素D(Act-D)与沉默外被体包被蛋白β2亚基(COPB2)对肝癌细胞的影响及其作用机制。方法将人肝癌HepG2细胞分为对照组、实验组、si-NC组、si-COPB2组、si-COPB2+NaCl组和si-COPB2+Act-D组。实验组加入200 ng·mL^(-1)Act-D;对照组加入等体积生理盐水;si-NC组和si-COPB2组分别转染阴性对照寡核苷酸和COPB2小干扰RNA,转染成功后,si-COPB2+Act-D组加入200 ng·mL^(-1)Act-D,si-COPB2+NaCl组加入等体积生理盐水。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖;用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞的凋亡情况;用蛋白质印迹法(Western blot)检测COPB2蛋白的表达。结果对照组、实验组、si-NC组、si-COPB2组、si-COPB2+NaCl组和si-COPB2+Act-D组HepG2细胞72h的增殖抑制率分别为0,(78.48±8.11)%,0,(17.42±1.75)%,(17.61±1.76)%和(79.87±7.99)%;这6组的HepG2细胞凋亡率分别为(7.89±0.96)%,(43.63±4.37)%,(7.91±0.82)%,(11.24±0.12)%,(10.87±1.09)%和(52.34±5.25)%;对照组和实验组COPB2蛋白的表达分别为(1.05±0.11)和(0.24±0.03)。实验组与对照组比较,si-COPB2组与si-NC组比较,si-COPB2+Act-D组与si-COPB2+NaCl组比较,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.001,P<0.05)。结论放线菌素D联合沉默COPB2基因的表达,能够抑制肝癌细胞的增殖,促进细胞的凋亡。     

国家基本药物用药指导（十六）抗肿瘤药物（二）——抗肿瘤抗生素

1放线菌素D 1．1其他名称更生霉素。 1．2适应证对肾母细胞瘤、横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤、霍奇金病及绒毛膜癌有效，对睾丸肿瘤也有一定疗效。 1．3注意事项用药期间应严格检查血象；注射时，要防止药液漏出血管外。     

Zn2+、放线菌酮、放线菌素D对喜树碱诱导鼻咽癌细胞凋亡的影响

细胞凋亡的机理和过程是相当复杂的,目前比较公认的看法是, 不论什么因素诱导何种细胞凋亡,最终都要通过不同途径激活细胞内的内源性核酸内切酶, 从而引起染色体DNA的断裂,形成DNA片段,凝胶电泳时出现典型的梯形带(ladders).我们的实验证实,拓扑异构酶Ⅰ抑制剂CPT能诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡.本研究拟在CPT体外诱导CNE-2Z细胞凋亡时观察Zn2+、放线菌酮(CHX)及放线菌素D对其凋亡的影响,为更加深入地揭示CPT诱导CNE-2Z细胞凋亡机制提供实验依据.     

放线菌素D引起HEPG2细胞的核仁蛋白移位

目的：观察放线菌素D作用下HEPG2细胞中与增殖相关的核仁蛋白B23（nucleophosmin or NPM，numatrin，NO38）定位和表达水平的改变，并探讨其可能机制和意义。方法：应用低浓度的放线菌素D处理HEPG2细胞，采用流式细胞仪技术、免疫印迹、免疫荧光、双向电泳及免疫共沉淀等实验方法检测HEPG2生长周期、B23蛋白表达水平及其定位、B23的等电点及磷酸化状态变化。结果：放线菌素D处理后，HEPG2细胞出现生长抑制，细胞周期阻滞于S／G2期；B23蛋白表达量没有变化，但定位改变，即从核仁移位到核浆，撤药后，B23又从核浆回到核仁上；B23在加药前后未检测到等电点和磷酸化状态改变。结论：低浓度放线菌素D抑制HEPG2细胞生长、阻滞细胞在S／G2期并引起可逆性的B23蛋白移位，而B23蛋白的表达量及磷酸化水平没有改变，这些实验结果对肿瘤药物治疗及分子肿瘤学研究可提供参考的研究模型。     

放线菌素D不能抑制α-双炔失碳酯诱导的白血病K562细胞凋亡

目的：研究放线菌素Ｄ（ＡｃｔＤ）对α－双炔失碳酯（α－ａｎｏｒｄｒｉｎ，ＡＮＯ）诱导的人白血病Ｋ５６２细胞凋亡的影响。方法：用光学显微镜观察细胞形态学变化；用流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳分别检测ＤＮＡ含量和ＤＮＡ断裂。结果：ＡＮＯ５０μｍｏｌ·Ｌ－１处理人白血病Ｋ５６２细胞２４ｈ引起大约１０％Ｋ５６２细胞产生凋亡。同时加入ＲＮＡ合成抑制剂ＡｃｔＤ０．００５μｍｏｌ·Ｌ－１不能抑制ＡＮＯ诱导的凋亡，相反地，ＡｃｔＤ加强ＡＮＯ的这一作用，使凋亡细胞从１０％上升到２０％。ＡｃｔＤ０．５μｍｏｌ·Ｌ－１本身可诱导约３２％的Ｋ５６２细胞凋亡。Ｓ期细胞对ＡＮＯ诱导的凋亡较敏感，而ＡｃｔＤ则较易诱导Ｓ期和Ｇ２－Ｍ期细胞凋亡。结论：ＡＮＯ诱导的Ｋ５６２细胞凋亡不依赖于新的ＲＮＡ合成。     

放线菌素23-21的抗癌药理研究

采用裸鼠人鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)和人胃癌细胞系(MGC-803)移植模型观察放线菌素23-21(Act 23-21)的抗癌作用。50μ/kg对CNE-2Z移植瘤和MGHC-803移植瘤的抑瘤率分别为58％和68.7％。肿瘤生长曲线显示,治疗组肿瘤生长缓慢。电镜观察治疗组瘤细胞可见核仁分离和微球体形成。提示Act 23-21可能有抑制核仁rRNA合成的作用。在有效剂量下未见重要脏器病理改变。     

放线菌素D对肿瘤转移性能的调节作用

本文初步研究了肿瘤细胞NK敏感性与转移之间的关系。实验发现,用放线菌素D(2.5μg/ml)预处理B16-黑色素可显著增高NK敏感性;且在体内易被清除;在肺中形成血源转移瘤灶数也显著减少。结果提示,肿瘤细胞NK敏感性的改变可能影响其血源转移能力。