放线菌素D抑制沙尔威辛诱导K562细胞凋亡但不减弱其细胞毒性

目的：研究放线菌素D对沙尔威辛诱导K562细胞凋亡和细胞毒性的影响．方法：采用四氮唑盐(MTT)还原法测定药物对K562细胞的生长抑制作用;凋亡诱导作用采用荧光显微镜术、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术进行评价．结果：药物处理K562细胞24h后检测发现,放线菌素D能在一定程度上增强沙尔威辛6．25μmol/L的细胞毒性作用,平均生长抑制率由沙尔威辛单独应用时8％上升到联合应用放线菌素D0．04、0．4和4 μmol/L时的69％、71％和70％．在沙尔威辛浓度大于6．25μmol/L时,未见同样的增强作用,却也不减弱其抑制细胞生长的作用．这显示放线菌素D可以增强或至少不减弱沙尔威辛的细胞毒性作用．但荧光显微镜术、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术却表明,在同等条件下,放线菌素D抑制沙尔威辛诱导K562细胞凋亡．结论：放线菌素D可增强沙尔威辛适当浓度范围内的细胞毒性作用,但却抑制其诱导的白血病细胞凋亡,提示该过程中存在着除凋亡以外的其它细胞死亡方式。     

热休克基因表达对抗过氧化氢所致肺内皮细胞损伤的保护作用

本研究探讨热休克反应（ｈｅａｔｓｈｏｃｋｒｅｓｐｏｎｓｅ，ＨｓＲ）对抗过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）所致牛肺动脉内皮细胞（ＢＰＡＥＣｓ）损伤的保护作用及机制。实验发现，预先热休克处理（４２℃，２ｈ）可使ＢＰＡＥＣｓ中热休克蛋白７０ｋＤａ（ＨＳＰ７０）及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ明显增多，同时显著减轻Ｈ２Ｏ２所致的ＢＰＡＥＣｓ中乳酸脱氢酶释放和硫代巴比妥酸反应物含量增加及过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性的降低等变化。进一步实验证明放线菌酮和放线菌素Ｄ能分别抑制热休克诱导的Ｈ８Ｐ７０和ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的增多，同时均能取消ＨＳＲ对抗Ｈ２Ｏ２所致ＢＰＡＥＣｓ损伤的保护作用。结果提示，ＨＳＲ具有对抗Ｈ２Ｏ２所致ＢＰＡＥＣｓ损伤的保护作用；此种保护作用与细胞经热休克处理后细胞中热休克基因在转录和翻译两个水平的表达增强及抗氧化能力增加有关。     

甲氨蝶呤、放线菌素D与环磷酰胺联合化疗治疗宫颈妊娠3例

目的:观察及探讨甲氨蝶呤、放线菌素D与环磷酰胺联合化疗治疗宫颈妊娠的疗效及价值。方法:采用甲氨蝶呤、放线菌素D与环磷酰胺联合化疗方案,结合米非司酮口服治疗3例宫颈妊娠患者。治疗后监测血清β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)及B超,观察其治疗效果。结果:3例患者化疗后血清β-HCG值下降明显,保守治疗均获得成功。结论:宫颈妊娠的治疗已趋向于保守治疗。对于血β-HCG值>104mIU/mL或甲氨蝶呤治疗失败的患者,采用甲氨蝶呤、放线菌素D与环磷酰胺联合化疗方案联合米非司酮进行治疗,可获得保守治疗成功,此方法安全有效。     

不同固定液对肿瘤细胞形态及细胞膜通透性的影响

目的 观察不同固定液对人胰腺腺泡上皮癌（HPAC）细胞及人宫颈癌HeLa细胞形态及细胞膜通透性的影响。 方法 采用2种固定液对HPAC细胞及人宫颈癌HeLa细胞进行固定：新鲜配制0.25%和4%多聚甲醛溶液;75%和90%乙醇溶液;固定时间均为30 min。以只加完全培养基的细胞作为对照组。光学显微镜下观察各组细胞形态,采用7-氨基放线菌素（7-AAD）荧光染色法观察细胞膜通透性的变化。 结果 与完全培养基组相比,0.25%多聚甲醛溶液组细胞形态最典型,且7-AAD荧光染色较弱;4%多聚甲醛溶液组细胞形态典型,但7-AAD荧光染色较强;90%乙醇溶液组细胞发生肿胀,较正常细胞体积增大,且7-AAD荧光染色强;而75%乙醇溶液组细胞肿胀不如90%乙醇溶液组明显,7-AAD荧光染色强;完全培养基组细胞形态规则,7-AAD荧光染色最弱。 结论 0.25%多聚甲醛溶液对肿瘤细胞不但能够起到固定作用,且能够较好地维持细胞膜的完整性,是较为理想的细胞固定剂。     

以任何方法剪接:Mdm2位于肿瘤监视的十字路口

鼠双微基因2(Mdm2)是p53最重要的调节基因,同时也是对各种类型细胞应激(包DNA损害和致癌损伤)的主要应答者.尽管已有文章描述了Mdm2基因的替代产物的异常拼接产物,但是关于该变异体的起源、功能和影响,现在尚不清楚.最近发现了一种新的mdm2基因的剪接形式.在该剪接体中,108bp的基因内序列合并到成熟的Mdm2 mRNA中.编码框内终止密码子的额外序列可使Mdm2蛋白明显缩短.最有趣的现象是,阿霉素和放线菌素D能诱导产生一种交替剪接形式,即成熟的Mdm2 108,而其他的DNA损伤剂没有这种诱导作用.Mdm2 108基因可诱导p53的大量快速聚集,证明该交替剪接事件的作用是形成p53的肿瘤监视途径,同时抑制细胞的增殖(该细胞为被有效的遗传毒性化合物所破坏的细胞).     

单药甲氨蝶呤和放线菌素D5日方案治疗低危侵袭性葡萄胎的临床对比

目的:比较低危侵袭性葡萄胎治疗中单药甲氨蝶呤(MTX)和放线菌素D(Act-D)5日方案的临床疗效及副作用.方法:回顾分析低危侵袭性葡萄胎患者70例,其中MTX组40例、Act-D组30例,分析单药治疗低危侵袭性葡萄胎的有效性及预后影响因素,并比较两组的治愈率、平均住院日、住院费用、不良反应等情况.结果:MTX/Art...     

放线菌素23-21的抗癌药理研究

采用裸鼠人鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)和人胃癌细胞系(MGC-803)移植模型观察放线菌素23-21(Act 23-21)的抗癌作用。50μ/kg对CNE-2Z移植瘤和MGHC-803移植瘤的抑瘤率分别为58％和68.7％。肿瘤生长曲线显示,治疗组肿瘤生长缓慢。电镜观察治疗组瘤细胞可见核仁分离和微球体形成。提示Act 23-21可能有抑制核仁rRNA合成的作用。在有效剂量下未见重要脏器病理改变。     

AHBA合酶基因的筛选与放线菌素D产生菌的发现

根据3,5-AHBA合酶基因序列的保守性所设计的简并引物,通过PCR的方法,从20株未知产物放线菌菌株中,获得两个AHBA合酶基因阳性菌株(S.violaceusniger 4353和Streptomyces rochei 4088).同源性分析显示,克隆到的3,5-AHBA合酶与已知的3,5-AHBA合酶蛋白序列有一定的同源性(86%～87%).对其中一株阳性菌株4353(S. violaceusniger 4353)的发酵活性产物进行了化学分离纯化和TLC、HPLC-UV、MS、1H.NMR和13C-NMR等分析结构鉴定,表明其发酵产生的一个活性成分为放线菌素D.基因单交换阻断实验结果证明,4353菌株所产生的放线菌素D确实与3,5-AHBA合酶基因相关.本文对获得这一结果的可能原因进行了讨论.     

注射用放线菌素D细菌内毒素检查法的可行性探讨

目的 :建立注射用放线菌素D的细菌内毒素检查法。方法 :参照《中国药典》2 0 0 0年版 (二部 )附录收载的细菌内毒素检查法及指导原则进行试验。结果 :注射用放线菌素D限值定为 0 .0 5EU·μg-1,细菌内毒素法与家兔法检查结果一致。结论 :细菌内毒素法检查结果安全可靠 ,可以替代热原检查