海洋放线菌Streptomyces parvulus OUCMDZ-2554产放线菌素D的发酵条件优化

目的 对海洋放线菌Streptomyces parvulus OUCMDZ-2554产放线菌素D的发酵条件进行优化,提高放线菌素D的产量。方法 对培养基的组成、种龄、接种量、温度、装液量、pH、盐度和发酵时间等条件的研究,通过单因素和正交试验,选择最优发酵条件;并通过波谱分析及其理化性质确定放线菌素D结构。结果 最佳培养基为：K2HPO4 1.5 g、MgSO4 0.5 g、酵母浸膏5 g、可溶性淀粉22.5 g、陈海水1000 mL;最佳发酵条件：装液量150/500 mL（v/v）、种龄4天、接种量5%、盐度3%、起始pH 7.5、发酵温度28℃、摇床（180转每分）发酵12天。结论 以最佳发酵条件发酵,优化后放线菌素D的产量为优化前的3.6倍,达到364 mg/L。     

复方甘草酸苷减轻HepG2细胞凋亡的机制

目的 研究复方甘草酸苷(SNMC)保护人肝母细胞瘤HepG2细胞,减轻细胞凋亡的作用和机制。 方法 肿瘤坏死因子α(TNFα)和放线菌素D(ActD)诱导HepG2细胞凋亡后,分别加入0、2、2 0、100、200、800μg／ml终浓度的SNMC作用12 h。流式细胞仪分析凋亡细胞百分率;电镜观察细胞超微结构的变化;琼脂糖凝胶电泳观察细胞内片段化DNA的形成;Western blot检测此过程中细胞内凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及B细胞淋巴瘤／白血病-2基因(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤／白血病-2基因关联x蛋白(Bax)的表达情况。 结果 不同浓度SNMC处理TNF α等作用的HepG2细胞12 h后,随药物浓度增加,HepG2细胞凋亡率降低,凋亡特有的细胞内片段化DNA形成减少,细胞内Caspase-3相对分子量32×103的酶原表达增加,17×103活性成分表达减少,同时Bcl-2表达增加,Bax表达减少。另外,电镜下可见模型组细胞呈现凋亡后典型核浓缩,而100μg／ml药物保护组未见此现象。 结论 SNMC可抑制TNF α和ActD诱导的HepG2细胞凋亡,其机制可能通过调控凋亡相关蛋白的表达而实现。     

雌激素对豚鼠心室肌细胞的非基因组效应研究

目的研究雌激素对豚鼠心室肌细胞的非基因组作用.方法方法采用全细胞膜片钳技术.结果17β-雌二醇1 μmol/L和3 μmol/L在1～2 min内快速抑制INa峰值,抑制率分别13.25%±4.71%,32.46%±4.82%.1 μmol/L 17β-雌二醇亦可影响INa的电流-电压(I-V)曲线,使INa电流密度值在-30mV～+30 mV膜电位下显著降低.在-20 mV处,INa电流密度值由-120.48±7.05 pA/pF降至-101.91±11.00pA/pF(P＜0.01).在+30 mV处,INa电流密度值由-39.55±10.50pA/pF降至-29.88±6.21pA/pF(P＜0.05).17β-雌二醇的抑制效应被DNA转录抑制剂-放线菌素D所阻断.且抑制效应与豚鼠的性别无关.结论雌激素通过推测的非基因组效应快速抑制豚鼠心室肌细胞钠电流(INa),且该效应不被放线菌素D所阻断.     

放线菌酮和放线菌素D对放射性核素235U诱发细胞凋亡的影响

目的 对放射性核素＾２３５Ｕ内照射诱发细胞凋亡的机理进行探讨。方法 通过ＭＴＴ和ＪＡＭ实验,检测凋亡细胞存活率及ＤＮＡ链断裂量。结果 蛋白质合成抑制剂放线菌酮（ＣＨＸ）及ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ（ＡｃｔＤ）不能抑制＾２３５Ｕ诱导的细胞凋亡,但ＣＨＸ具有部分抑制凋亡细胞ＤＮＡ链断裂的作用。结论 放射性核素＾２３５Ｕ内照射导细胞凋亡途径与外照射不同,不需要蛋白质的合成,但需合成性核酸内切酶参与。