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121.
目的 :研究经冠状动脉内导入重组 β-gal腺病毒后心肌的转染效率 ,证明冠脉内导入途径是否为重组基因导入心脏的有效的可行的途径。方法 :用定向克隆的方法构建重组 β -gal腺病毒载体 ,将 1 .53× 1 0 1 2 pfu重组 β-gal腺病毒经冠状动脉造影导管由左冠状动脉分别导入到 7只雄性Yorkshire猪心脏中 ,于术后 1周、2周、4周及 8周处死动物 ,取左右冠状动脉、3~ 5mm厚的不同部位的心肌及各实质脏器标本 ,经 1 .2 5 %戊二醛固定 2 0min ,用PBS洗涤 3次 ,在室温下用X -gal染液染色 1 6~ 2 4h ,脱水、石蜡包埋、切片及HE复染 ,光镜下计算出表达 β -gal的心肌细胞百分数即为转染效率。结果 :经冠状动脉内导入重组基因后 ,于术后 1周即有 β-gal表达 ,2周达高峰 ,心肌细胞的转染效率高达 45 .57% ,全层左冠状动脉壁、心肌间质中均有 β-gal表达 ,4周 β-gal表达下降 ,8周 β -gal恢复至对照组的基线水平。结论 :经冠状动脉内导入重组腺病毒 ,心肌细胞及冠脉壁重组基因表达效率高 ,说明冠状动脉内导入重组目的基因将是冠心病基因治疗中有效的可行的方法 相似文献
122.
用DNA重组技术构建CT-B表达性质粒pXB1及进一步修饰的pXB2,使CT-B基因在大肠杆菌中得到较高水平的表达(280~350ng/ml),且有71.5%分泌率。表达动力学研究阐明,克隆子培养24h产物收率较高。一定浓度的Mg~(2+)、L-组氨酸和天冬酰胺能刺激CT-B的表达。GM1-ELISA、CHO细胞测毒结合间接免疫荧光检测和家兔肠段结扎试验证实,表达的CT-B能与游离的或活细胞膜上的GM1受体结合,但无细胞和肠段毒性。这种细胞测毒结合免疫荧光序贯试验,为客观证实CT-B的生物学活性开拓了新途径。 相似文献
123.
一种用于基因表达谱分析的基因芯片方法 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:通过研究SLE患者外周血基因表达谱的改变,建立一种新型的基因芯片技术用于分子发病机理的研究。方法:提取总RNA,逆转录合成单链cDNA、双链cDNA,体外转录合成生物标记的cRNA与基因芯片进行杂交,通过抗体的检测标记荧光染料Cy3,基因芯片扫描仪进行图像扫描。结果:该方法有较高的重复性和稳定性,SLE患者与正常对照组相比较,鉴定出94个基因存在表达差异。结论:该方法能在较少起始标本量的情况下,有效地进行SLE致病基因的筛选,更好的理解SLE发生的分子机理,并且可在其它疾病研究中推广应用。 相似文献
124.
人白细胞介素7基因克隆及其真核表达载体的构建 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:构建人白细胞介素7(hIL-7)的真核表达载体。方法:从人脾脏组织的总RNA中,用RT-PCR方法扩增出编码成熟hIL-7的cDNA,将其克隆于pMD18-T质粒中,并进行序列测定。再将hIL-7cDNA以正义及反义插入真核、原核双重表达载体pBK-CMV质粒,转化至大肠杆菌DH5α。最后将表达的lacz-hIL-7重组蛋白行SDS-PAGE电泳,并作考马斯亮蓝染色分析,western blot鉴定。结果:hIL-7序列测定结果与预期一致。pBK-CMV-hIL-7(正义插入)的无隆表达重组蛋白,western blot证实此蛋白为IL-7。结论:成功构建了hIL-7的真核表达载体,为进一步研究hIL-7的抗肿瘤作用创造了条件。 相似文献
125.
126.
目的 制备人胎盘基因表达谱芯片,前用于基因差异表达分析。方法用基因芯片点样仪将胎盘基因文库探针打印在氨基包被的玻片上制备表达谱芯片。分别提取对照组三氧化二砷处理的K562细胞总RNA,纯化mRNA后反转录成cDNA。再以限制性显示技术进行荧光标记,将两组荧光标记的样品混合后与芯片进行杂交。杂交后清洗芯片,干燥后对芯片进行扫描,分析杂交结果。结果 建立了较可靠的制备与检测基基表达芯片的方法,并筛选出45个差异表达基因片段。结论 制备的人胎盘基因表达谱芯片可有效地应用于基因的差异表达分析。 相似文献
127.
人抗HBsAg噬菌体抗体Fab段基因的序列分析及表达 总被引:3,自引:0,他引:3
对已建的噬菌体抗体库分离出来的人抗-HBs克隆进行了序列分析和表达研究,发现4个克隆中3个克隆的重链和轻链完全相同,DNA序列分析表明VH分别属于VH1亚群和Ⅱ亚群,其轻链VL分别属于VλⅡ亚群和VλⅠ亚群。构建了可溶性Fab段表达载体,显示出在细菌中表达的Fab段抗体与HBsAg特异性结合,这说明所筛选出来的噬菌体抗体具有HBdisplay status 相似文献
128.
R. Gagnemo-Persson A. Samuelsson R. Håkanson P. Persson 《Calcified tissue international》1997,61(3):210-215
Treatment with omeprazole, a long-acting proton pump inhibitor of acid secretion, induces hypergastrinemia. In chickens,
omeprazole induces growth not only of the acid-producing mucosa (probably reflecting the trophic action of gastrin), but also
of the parathyroid glands (hypertrophy + hyperplasia), while suppressing bone density and body weight gain without affecting
blood calcium. The first part of the present study was concerned with the effect of omeprazole, ergocalciferol (vitamin D2), and restricted food intake on the gene expression of parathyroid hormone (PTH) in the parathyroid glands of the chicken.
Chickens were treated with omeprazole (400 μmol/kg/day, I.M.), food restriction, omeprazole + food restriction, ergocalciferol
(250 000 IU/kg/day, S.C.), or ergocalciferol + omeprazole for 5 weeks. The weight gain of the chickens was monitored, and
the weights of the parathyroid glands and femurs were determined at sacrifice. PTH mRNA in the parathyroid glands was analyzed
by Northern blot. The second part of the study examined the effect of 3 weeks of continuous gastrin infusion (chicken gastrin
20–36, 5 nmol/kg/hour, S.C.) on the expression of PTH mRNA in the parathyroid glands. Omeprazole reduced the body weight and
femur density (ash weight per volume) while greatly increasing the weight of the parathyroid glands and the PTH gene expression.
Food restriction alone and ergocalciferol alone (at a dose that raised blood Ca2+) were without effect, but food restriction greatly enhanced the omeprazole-evoked increase in parathyroid gland weight and
PTH gene expression. Gastrin increased the weight of the parathyroid glands and reproduced the effect of omeprazole on PTH
gene expression. Hence, it seems likely that the effect of omeprazole reflects the ensuing hypergastrinemia.
Received: 6 August 1996 / Accepted: 23 April 1997 相似文献
129.
Tang Jian汤健 Wang Yu王瑜 Zkang Chenhui张晨晖 E. Costa Institute of Cardiovascular Research Beijing Medical University 《北京大学学报(医学版)》1994,(Z1)
THECLONINGOFNa ̄+/Ca ̄(2+)EXCHANGERGENEANDITSEXPRESSIONINBRAINISCHEMIATangJian汤健,WangYu王瑜,ZkangChenhui张晨晖,E.CostaInstituteofCar... 相似文献
130.
目的 :构建人牙本质涎蛋白 (humandentinsialoprotein ,hDSP)真核表达载体 ,用瞬时系统表达目的基因。方法 :将hDSP全长基因定向克隆入真核表达质粒载体pcDNA3 ,构建pcDNA3 hDSP重组质粒 ,脂质体转染法转染COS 7细胞 ,48~ 72h收集细胞及培养上清 ,Westernblot和免疫组化检测表达产物。结果 :酶切鉴定表明重组表达载体构建成功 ;Westernblot检测显示在 60 0 0 0处出现一条清晰的特异性免疫阳性条带 ;免疫组化染色显示细胞胞质内有大量棕黄色颗粒 ,进一步证明该转染方法可行 ,转染效率较高。结论 :hDSP全长基因可以在COS 7细胞获得瞬时高效表达。 相似文献