神经节细胞胶质瘤恶变及其差异表达基因分析

目的探讨神经节细胞胶质瘤恶性进展的分子变化,为进一步研究分子病因奠定基础。方法取同一患者不断恶化的3次手术标本,行cDNA微阵列检测,分析在不同阶段持续存在的差异表达基因。结果初发(WHO II级)、复发(WHO III级)和再发(WHO IV级)的标本与正常脑组织相比,差异表达基因共19条,其中下调者16条,上调者3条。在下调的基因中,功能明确者有抑制RAF1/MEK/ERKs激酶通路激活的磷酸酰乙醇胺结合蛋白,抑制肿瘤血管增生、侵袭,调控细胞凋亡的碳酰还原酶;抑制c-myc基因表达的肺库否样因子;参与人DNA切除修复的多聚酶ε。结论神经节细胞胶质瘤恶变过程中持续存在的分子变化,以抑制肿瘤增殖基因表达下调为主,其中RAF激酶抑制蛋白、DNA多聚酶ε和碳酰还原酶是参与细胞信号传导和DNA损伤修复等具重要功能的基因,值得进一步研究。     

sFGFR1基因的克隆与在RTS系统中的高效表达

目的：克隆sFGFRl(soluble fibroblast growth factors receptor-1)基因，并在RTS(rapid translation system)系统中高效表达相应蛋白．方法：培养Swiss rat 3T3 fibroblast细胞株，提取总RNA，用RT—PCR方法获取鼠sFGFR1 cDNA片段，酶切后克隆到pIVEX2．3d载体并进行序列分析；采用Roche RTS ProteinMaster500系统，高效表达sFGFR1蛋白并用Western Blot鉴定表达的蛋白．结果：克隆了sFGFR1基因，测序证实序列正确；Western Blot证实sFGFR1蛋白在RTS系统中高效表达．结论：克隆了sFGFR1基因并在RTS系统获得高效表达．     

流感病毒RNA聚合酶PB1-1亚基片段的克隆及表达

目的 将流感病毒RNA聚合酶PB1-1亚基进行亚克隆、表达，获得重组的亚克隆多肽，为进一步研究PBl亚基功能奠定基础。方法 以FB1亚基cDNA为模板，用PCR方法扩增出PB1-1片段，应用定向克隆策略将扩增后片段与高效表达载体pQE30重组，阳性克隆重组质粒经酶切及测序鉴定，IPTG诱导各亚克隆系高效表达；优化表达条件。结果 PCR法扩增出487bp的片段，酶切及测序鉴定获得正确的重组质粒，在E．coli M15中表达得到相对分子量约为20KD的重组蛋白，获得蚕组多肽。结论 成功地亚克降及表达了流感病毒RNA聚合酶PB1-1亚基。     

结核分枝杆菌Rv1009基因蛋白的克隆和表达

目的 克隆表达结核分枝杆菌促Rv1009基因,序列测定正确后进行融合、表达.方法 采用热启动聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Rv1009编码基因,用限制性内切酶消化后插入pGEX 4T-2载体中,将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,目的基因经IPTG诱导,表达Rv1009基因蛋白.结果 经PCR扩增在1300bp处发现一条目的片段,获得了结核分枝杆菌H37Rv株Rv1009基因蛋白,经诱导后高效表达分子量为64KD的外源蛋白,与预期分子量大小一致,凝胶自动扫描分析,在A600值为0.6,IPTG终浓度为0.3 mmol/L,诱导表达3 h时融合蛋白表达量即达峰值,占菌体总蛋白的22.8%.结论 构建了结核分枝杆菌Rv1009基因重组表达载体,获得了RPF样融合蛋白的高效表达,为今后深入研究奠定了基础.     

小儿骨髓增生异常综合征28例临床分析

骨髓增生异常综合征 (myelodysplasticsyndrome ,MDS)是一组异质性克隆性造血干或祖细胞疾病 ,一般认为本病多见于 4 0岁以上的成人 ,儿童较少见。现将我院 1989年 2月～ 2 0 0 2年 2月收治 2 8例MDS患儿的临床资料及特点分析报道如下。1　临床资料1.1　一般资料　 2 8例患儿中男 18例 ,女 10例 ,男∶女 =1.8∶1;年龄 4个月～ 12岁 ,<1岁 6例 ,～ 3岁10例 ,～ 6岁 8例 ,>6岁 4例 ;农村病例 2 4例 ,城市病例 4例。就诊时病程 6天～ 8个月不等。初诊时全部病例都有不同程度的贫血 ,发热 16例(5 7 1% ) ,皮肤黏膜出血 15例 (5 3.5 % ) ,淋巴…     

人细胞色素p450IA1基因cDNA的克隆和鉴定

在用３－甲基胆蒽诱导培养人羊膜ＦＬ细胞２４ｈ后，抽提细胞总ＲＮＡ并直接合成ｃＤＮＡ第一链。利用人工合成的一对寡核苷酸引物，采用ＰＣＲ技术特异性地扩增Ｃｙｔ ｐ５０ＩＡ１ ｃＤＮＡ。３０个循环后琼脂糖凝胶电泳显示１．５Ｋｂ大小片段，长度与预计相符。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果证实此片段确为Ｃｙｔ ｐ４５０ＩＡ１ ｃＤＮＡ。将此片段克隆至质粒ｐＧＥＭ－３Ｚ并进行部份序列分析。结果显示克隆片段包含Ｃｙｔ ｐ     

分子杂交法鉴定人睾丸cDNA重组片段

鉴定ｃＤＮＡ表达文库构建是否成功的一个重要指标是ｃＤＮＡ片段与噬菌体载体的重组率，为能精确地反映出我们所构建的人睾丸ｃＤＮＡ表达文库的重组率，我们在运用遗传显色法检测的同时，进一步运用分子杂交法进行了测定。结果显示，运用遗传显色法测定的重组率为６６％，分子杂交法测定的重组率为５１％。表明所构建文库具有较高的重组率，并提示遗传显色法测出的重组率中有部分是因为基因休克导致的假阳性。运用分子杂交法虽然方     

黑色素瘤特异性单克隆抗体HB8760可变区基因的克隆和序列…

克隆黑色素瘤特异性单克隆抗体ＨＢ８７６０可变区基因。方法：从培养的可分泌人黑色素瘤特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞ＨＢ８７６０提取总ＲＮＡ，后转录成ｃＤＮＡ，用合成的一对寡核苷酸引物从中扩增了抗体可变区基因，并克隆入ｐＵＣ１９，挑选出阳性克隆后进行了核苷酸序列分析。