丙氨酰谷氨酰胺二肽对人脐静脉内皮细胞ECV304缺氧缺糖损伤的保护作用

目的观察丙氨酰谷氨酰胺二肽（丙谷二肽）对人脐静脉内皮细胞ECV304缺氧缺糖损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法在以低氧低糖培养人脐静脉内皮细胞ECV304为细胞损伤模型的基础上,以噻唑蓝（MTT）比色法优化丙谷二肽的最佳作用浓度,显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测线粒体膜电位。自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶（LDH）活性,比色法检测谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）的浓度,RT-PCR方法检测细胞内肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、热休克蛋白70（HSP70）、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA的表达。结果丙谷二肽能够使细胞在缺氧缺糖应激下存活率增加,线粒体损伤减轻,LDH分泌降低,GSH产生增加,HSP70和HIF-1α mRNA的表达增加。结论丙谷二肽对细胞缺氧缺糖损伤有明显的保护作用,这种保护作用可能与保护线粒体、维持细胞膜结构完整、上调细胞中应激基因HSP70和HIF-1α的表达有关。     

抗体库的构建与特异性抗体的筛选

噬菌体抗体库技术的出现标志着抗体技术从多克隆抗体、单克隆抗体进入了基因工程抗体的时代。这一技术具有省时、省力,筛选容量大,可直接得到抗体基因,便于构建各种基因工程抗体及在原核系统中进行表达的特点。尤其是可以不经免疫而获得针对任何抗原的抗体以及人源抗体的获得,具有划时代的意义。获得预期的特异性抗体的关键是构建的库具有足够大的容量和多样性以及强有力的筛选手段。目前从方法上仍需不断改进和完善,本文就目前抗体库构建中如何增加库容量和多样性,以及筛选方法做一综述。     

黏附分子在血小板诱导肿瘤转移中的作用

恶性肿瘤是目前威胁人类生命和健康的主要疾病之一,它的浸润和转移是其恶性化的特征和标志,也是目前临床上大多数肿瘤患者治疗失败和死亡的主要因素.肿瘤的血行转移是肿瘤远处散播的主要途径,能够造成多器官组织的广泛转移.血小板在肿瘤血行转移中起关键作用,它能够与肿瘤细胞形成癌栓(cancer embolus),从而介导肿瘤细胞与内皮细胞的黏附,形成转移.因此抑制血小板与肿瘤细胞的黏附将有助于减少肿瘤转移.我们对介导血小板与肿瘤细胞黏附的相关黏附分子进行了总结,并针对这些粘附分子在抗肿瘤转移方面的研究进行了综述.     

胡椒碱减轻兔原代左心房肌细胞氧化应激损伤的作用

目的:利用低浓度过氧化氢（H2O2）建立兔原代左心房肌细胞氧化损伤模型,探讨胡椒碱减轻氧化应激损伤的保护作用。方法: 将18只新西兰白兔随机分为3组,每组6只:即正常对照(NC)组、H2O2组和胡椒碱组,均分别进行左心房肌细胞的原代培养。NC组对培养的心房细胞直接进行检测,H2O2组直接在培养的原代心房肌细胞中加入终浓度为100 μmol/L的H2O2培养2 h,胡椒碱组以7×10-6 mol/L浓度的胡椒碱处理细胞1 h之后,加入终浓度为100 μmol/L的H2O2共同培养2 h。检测氧化和抗氧化指标的变化。MTT法检测三组原代细胞活力,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（SOD）活力、比色法检测丙二醛（MDA）含量及还原型谷胱甘肽（GSH）含量,Fura-2 AM检测细胞内钙离子浓度,RT-PCR对线粒体mRNA进行定量分析。结果: 与NC组相比较,H2O2组细胞的活力、SOD的活力及GSH的含量明显下降（P<0.05）; MDA的含量、钙离子浓度和线粒体mRNA的表达均明显增加（P<0.05）。胡椒碱组和H2O2组比较,上述指标均有显著改善（P<0.05）。结论: 胡椒碱能够在氧自由基的产生清除等环节,减轻兔原代左心房肌细胞的氧化应激损伤。     

高渗氯化钠右旋糖酐70注射液的血管刺激性溶血性和过敏性研究

目的 研究高渗氯化钠右旋糖酐70注射液(Hypertonic saline dextran70 injection,HSD)是否具有血管刺激性、溶血性和过敏性作用.方法 对中试产品进行了血管刺激性实验、全身过敏实验和溶血实验.结果 HSD对血管没有明显的刺激作用;不引起豚鼠的过敏反应;不引起溶血和红细胞凝集作用.结论 制剂的安全性得到确证.     

抗鼠IgD特异性单克隆抗体414/DF可变区基因的克隆和cDNA序列测定

目的 克隆鼠抗原Ｄ型免疫球菌蛋白特异性单克隆抗体４１４／ＤＦ可变区基因,方法 从培养的可分泌高亲和力抗鼠ＩｇＤ特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞４１４／ＤＦ提取总ＲＮＡ,反转录成ｃＤＮＡ,用合成的一对寡核苷酸引物从中扩增了抗体可变区基因经克隆入ｐＵＣ１９质粒,进行核苷酸序列分析,结果 所克隆基因分别长３５７ｂｐ和３２７ｂｐ编码１１９和１０９个氨基酸,均含３个抗原互补决定区和４个框架区,并含有维持抗体结构     

血小板、基质金属蛋白酶与肿瘤转移

血小板除参与正常的止血过程外还具有很多病理和生理作用。血小板活化后可以分泌基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)。MMPs属于Zn2 和Ca2 依赖的内肽酶家族,能特异性与细胞外基质成分相结合并降解细胞外基质。MMPs降解基底膜中的主要成分Ⅳ型胶原,是肿瘤转移发生必不可少的关键步骤。血小板能够与肿瘤细胞结合并促进肿瘤转移,而MMPs在血小板促进肿瘤转移过程中发挥了重要的作用。     

GST-GP302融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗血清的制备

目的 :在大肠杆菌中表达血小板糖蛋白GPIbα之vWF结合区(GP30 2 )与谷胱甘肽S 转移酶GST的融合蛋白并制备其抗血清。方法 :将GP30 2片断插入GST融合表达载体 pGEX 4T 1,重组载体酶切鉴定后 ,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST GP30 2融合蛋白 ,SDS PAGE分析表达产物。包涵体经变性复性后免疫新西兰白兔 ,制备抗血清 ,ELISA、Westernblot检测重组抗原的免疫活性。结果 :重组质粒酶切鉴定表明 ,GP30 2基因已正确插入到 pGEX 4T 1中 ,经IPTG诱导后 ,表达出相对分子质量 (Mr)约为 5 90 0 0的融合蛋白 ,获得了ELISA效价为 1× 10 -5的多克隆抗体。Westernblot证明所制备的多抗可以与血小板糖蛋白特异性结合。结论 :GP30 2片断在大肠杆菌中的成功表达及制备得到的多克隆抗体 ,为检测血小板糖蛋白GPIbα及其在其他体系中的表达提供了一种检测途径     

猪血小板膜糖蛋白的纯化与鉴定

目的：分离纯化猪血小板膜糖蛋白并对其进行鉴定。方法：差速离心法分离猪血小板，1％TritonX-100溶解膜糖蛋白，麦胚凝集索亲和层析纯化糖蛋白(0．3mol／L N-乙酰葡萄糖胺洗脱)，用鼠抗人GPⅠb单抗PHN89作点印迹，聚丙烯酰胺凝胶电泳，考马斯亮蓝(Coomassie blue，CB)和过碘酸-Schiff(PAS)染色鉴定糖蛋白，腺苷二磷酸钠盐(ADP)和瑞斯托菌素(ristocetin)诱导的人血小板聚集测定其体外活性。结果：用GPⅠb单抗PHN89为一抗的点印迹表明0．3mol／L N-乙酰葡萄糖胺能充分洗脱结合到凝集素上的GPⅠb。PAS法糖定性有2条显色条带，SDS-PAGE纯化后有2条蛋白区带。ADP阳性对照血小板聚集率为74％，纯化前后的样品血小板聚集率分别为42％和4％，ristocetin阳性对照血小板聚集率为100％，纯化前后的样品血小板聚集率分别为25％和3％，表明制备的血小板糖蛋白具有生物学活性。结论：得到了较纯的血小板膜糖蛋白，为血小板膜糖蛋白的进一步研究及应用奠定基础。     

黑色素瘤特异性单克隆抗体HB8760可变区基因的克隆和序列…

克隆黑色素瘤特异性单克隆抗体ＨＢ８７６０可变区基因。方法：从培养的可分泌人黑色素瘤特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞ＨＢ８７６０提取总ＲＮＡ，后转录成ｃＤＮＡ，用合成的一对寡核苷酸引物从中扩增了抗体可变区基因，并克隆入ｐＵＣ１９，挑选出阳性克隆后进行了核苷酸序列分析。