蛋白质组学技术筛选肝癌恤浆/血清中的差异蛋白质

目的:建立分析肝癌患者血浆/血清中低丰度差异表达蛋白质的双向凝胶电泳(2-DE)方法.方法:以10例肝癌患者血浆、8例肝癌患者血清及8例正常志愿者血浆和血清为研究对象,选用安捷伦免疫亲和色谱Agilent MARS Spin Cartridge去除血浆中6种主要高丰度蛋白,2-DE分离血浆/血清低丰度蛋白质,差异蛋白质斑点经酶解后,MALDI-TOF/MS检测的肽指纹谱(Peptide mass fingerprinting,PMF)在NCBInr数据库中进行搜索.结果:10例肝癌患者血浆样品中共鉴定出有20种差异蛋白,其中18种表达上调,2种表达.8例肝癌患者血清样品中共鉴定出23种差异蛋白,其中17种蛋白表达上调,6种蛋白表达下调.在肝癌患者血清和血浆组中共同识别到2种差异蛋向质.结论:血浆组中识别到的指环蛋白34(RING finger protein34),威尔姆肿瘤1-关联蛋白(Wilms'tumor 1-associating),CD147抗原,卵泡前体FS(Follistatin precursor,FS)蛋白和血清组中识别到的蛋白激酶NYD-SP9(Protein kinase NYD-SP9),肿瘤坏死因子受体超家族成员19前体(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 19precursor),组蛋白键合蛋白RBBP4(Histone-binding protein RBBP4),FADD蛋白,26S蛋白酶调控亚基P28(26S proteasome regulatory subunit p28),CD82抗原,自体吞噬蛋白5(Autophagy protein 5)等蛋白有望成为(Hepato celluar careinoma,HCC)的特异蛋白.     

蛋白质组学技术在骨关节炎研究中的应用

蛋白质组学技术的迅速发展使疾病特异性生物标记物的快速筛选成为可能,为疾病发病机制研究及新治疗方法探索提供了新途径。骨关节炎相关研究中双向电泳及质谱分析技术等蛋白质组学技术的应用较多,研究中探索了不同标本的预处理流程,并通过与网上数据库的比对可迅速确定蛋白质相关信息。目前已发现几个与骨关节炎相关的蛋白质,但研究均处于初级阶段,所发现的差异蛋白质尚需进一步研究。蛋白质组学技术研究对于深入揭示骨关节炎的病因和病理有重要作用。     

蛋白质组学技术鉴定吉兰-巴雷综合征患者血清急性期反应蛋白的表达

背景：吉兰-巴雷综合征患者血液中存在与发病有关的抗体、补体和细胞因子,以蛋白质组学技术分离鉴定这些标志蛋白,可为寻找新的药物靶标提供依据。 目的：以蛋白质组技术比较吉兰-巴雷综合征患者与正常对照组血清的差异表达蛋白。 方法：采集确诊的吉兰-巴雷综合征患者和正常者血清各30例,提取血清蛋白质以固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行双向电泳,图象分析软件Imagemaster 2D分析电泳图谱,MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定差异表达蛋白。 结果与结论：在吉兰-巴雷综合征患者与正常者中24种蛋白质的表达量显著不同,其中α-2-巨球蛋白,血浆铜蓝蛋白,血清淀粉样P物质,丛生蛋白,抗糜蛋白酶,触珠蛋白,血红素蛋白,α-1-抗胰蛋白酶,血清转铁蛋白等9种蛋白质被鉴定为急性期反应蛋白。结果说明吉兰-巴雷综合征患者血清中急性期反应蛋白表达量发生了明显变化,加深了对吉兰-巴雷综合征发病分子机制的理解。     

糖尿病性视网膜病变的蛋白质组学研究进展

糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病微血管病变在眼部的表现,是<75岁成年人的首要致盲眼病。定期随访检查糖尿病患者的眼底及控制血糖、血压、血脂都有助于降低因视网膜病变而致失明的发生率,但其机制仍不明确。蛋白质组学及其相关技术的发展为蛋白质水平上研究DR的病理生理机制提供了强有力手段,该技术可以一次性研究大量蛋白质。比较蛋白质组学研究结果表明DR并不是由单一蛋白质启动的疾病,而是多种蛋白质共同参与的病理过程。目前,绝大多数鉴定出的差异性蛋白质其功能都不太明确,而且各蛋白质之间存在着复杂的网络调节关系。我们就其在DR蛋白质组学方面的研究进展作一综述。     

代谢综合征患者白细胞介素6水平与HDL亚类分布的相关性分析

目的探究代谢综合征(MS)患者血浆白细胞介素6(IL-6)水平与高密度脂蛋白(HDL)亚类分布及其相关性。方法收集MS组患者135例和对照组健康体检人群77例的血样,酶联免疫吸附法(ELISA)测定IL-6含量,按IL-6浓度将MS患者分为低IL-6组(IL-6≤66.76 ng/L)、中IL-6组(66.76 ng/LIL-6113.84 ng/L)、高IL-6组(IL-6≥113.84 ng/L)。双向电泳-免疫印迹法测定血浆HDL亚类的相对含量,全自动生化分析仪测定血脂浓度及载脂蛋白含量。分析不同性别对IL-6、血脂、载脂蛋白及HDL亚类分布的影响,及IL-6水平与HDL亚类分布的相关性。结果与对照组比较,MS组IL-6、preβ1-HDL、HDL3b、HDL3c、TC、TG、LDLC含量以及LDLC/HDLC和Apo B100/Apo AI均显著增高(P0.05或P0.01),而HDL2a、HDL2b、preβ2-HDL、Apo AI和HDLC含量显著降低(P0.05或P0.01)。与对照组同性别比较,MS组男性或女性HDL亚类的相对含量有差异(P0.05或P0.01);与同组男性比较,对照组和MS组女性血脂、血浆载脂蛋白水平差异均无统计学意义(P0.05)。MS患者血浆IL-6含量的升高与HDL亚类分布异常存在相关性,即IL-6的含量与小颗粒的preβ1-HDL、HDL3b水平呈正相关,与大颗粒HDL2b水平呈负相关。结论 MS患者血浆IL-6水平升高,且HDL颗粒呈变小趋势,高水平的IL-6可能与HDL亚类分布异常和血脂紊乱有关。     

代谢综合征患者血浆网膜素1水平与HDL亚类分布的相关性分析

目的探讨代谢综合征(MS)患者血浆网膜素1(Omentin-1)水平对高密度脂蛋白(HDL)亚类分布的影响。方法收集在南华大学附属医院就诊的MS患者102例和对照组81例的血样,采用全自动生化分析仪测定血脂浓度及载脂蛋白含量,酶联免疫吸附法测定Omentin-1的含量,双向电泳-免疫印迹法测定人血浆HDL亚类的相对含量。按Omentin-1浓度均值加减去一个标准差作为分割点,将MS患者分为3组:低Omentin-1组(Omentin-1≤9.10μg/L)、中Omentin-1组(9.10μg/LOmentin-126.68μg/L)、高Omentin-1组(Omentin-1≥26.68μg/L)。结果随着Omentin-1浓度的降低,MS患者血浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及ApoB100/AⅠ和LDLC/HDLC比值均显著性增高(P0.05或P0.01),高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、ApoAⅠ含量显著降低(P0.05或P0.01)。与低Omentin-1组相比,高Omentin-1组中小颗粒的preβ1-HDL和HDL3b含量显著下降(P0.05或P0.01),而大颗粒的HDL2a含量显著上升(P0.05)。结论 MS患者血浆Omentin-1水平降低,且HDL颗粒呈变小趋势,低水平的Omentin-1可能与HDL亚类分布异常和血脂紊乱有关。     

PC12细胞蛋白质组学研究技术及二维电泳图谱的建立

目的：建立PC12细胞的蛋白质组学研究的技术体系,全面展示PC12细胞的蛋白质表达谱。方法：提取PC12细胞的蛋白质,建立固相pH梯度双向电泳图谱,应用图像扫描仪及ImageMaster 2D Evolution分析软件获得蛋白质点的数字化和匹配性信息,挑选匹配良好的高峰度蛋白点,进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）的鉴定。结果：成功构建出PC12细胞的双向电泳图谱,并用MALDI-TOF-MS成功鉴定出19种PC12细胞的蛋白质,分属于以下6类：分子伴侣及相关功能蛋白、细胞结构/骨架蛋白、代谢相关蛋白、凋亡相关蛋白、激素结合相关蛋白和神经内分泌相关蛋白。结论：PC12细胞样品的蛋白质样品双向电泳图谱重复性良好,初步建立了PC12细胞的蛋白质组学研究技术,证明以PC12细胞为模型的神经系统疾病蛋白质组学研究的可行性。     

双向电泳-质谱技术筛选克山病血清差异蛋白

目的比较克山病患者与健康者血清蛋白表达谱,探讨克山病发病机制,寻找与克山病发生相关差异蛋白。方法从克山病病区选择8例慢型克山病,病区对照以及非病区对照各8例,应用双向凝胶电泳技术分离克山病患者同健康者的差异蛋白点,基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱鉴定差异蛋白。结果凝胶图像分析显示9个差异蛋白质点,经质谱鉴定确定8种蛋白。3种蛋白在克山病组较非病区健康组上调,其功能主要与脂类代谢,免疫调节,凋亡抑制有关。3种蛋白下调,主要与细胞内铁离子平衡密切相关。克山病组较病区健康组2种蛋白表达上调,主要与蛋白酶抑制等功能有关。结论该研究发现触珠蛋白、血清白蛋白和α1-抗胰蛋白酶、转铁蛋白、α2-HS糖蛋白可作为克山病的诊断与预后的候选生物学指标,具有重要意义。     

人急性胰腺炎各证型血清双向电泳图谱比较

目的 探讨急性胰腺炎不同证型患者血清的蛋白质组双向电泳图谱变化,为研究这些变化在辨证中的意义提供实验依据.方法 检测32例急性胰腺炎患者血清蛋白质组的变化,与正常对照组的蛋白质表达对比分析.结果 通过血清样本2-DE电泳分离蛋白,得到的蛋白质点数分别为：正常对照组（320±15）个,蛔虫上扰组（329±26）个,脾胃实热组（363±24）个,脾胃湿热组（388±35）个,肝郁气滞组（403±36）个.CD8在脾胃湿热和脾胃实热证型中,比正常对照组表达量降低,且差异显著.脾胃湿热证型和肝郁气滞证型中,白介素6（IL-6）蛋白变化较对照组差异显著.结论 不同证型患者与对照组血清蛋白表达存在明显差异,其与疾病的发展和转归相互影响、相互作用,在急性胰腺炎证型的治疗中应重视免疫功能的变化.差异点的发现为今后进一步深入研究急性胰腺炎不同证型的准确辨证提供了研究依据.     

葵瓜子仁蛋白实验室提取条件探讨

目的：探讨葵瓜子仁蛋白的实验室提取条件。方法：选取8种不同条件（P1,P2,P3,P4,P5,P6,P7,P8）提取葵瓜子仁蛋白,采用Bradford法测定蛋白质纯度,应用双向电泳对提取条件进行分析,通过二维电泳图谱确定最佳提取条件。结果：8种条件下提取的葵瓜子仁蛋白干粉质量57.43~63.59 mg,差异无统计学意义,但P3,P4,P7,P8提取的蛋白质纯度显著高于其他4种条件,双向电泳结果显示P4,P8条件下蛋白点最多,分别为（196±11）,（194±20）个,但P4条件下得到的蛋白点更清晰。最佳提取条件为提取温度50 ℃,提取溶剂为去离子水,超声提取时间20 min。结论：P4条件下得到的蛋白质总量和种类最多,为植物蛋白的蛋白组学研究提供参考。