衡阳市某矿区儿童铅中毒现状的调查

目的:检测衡阳某矿区653名儿童的血铅含量,评价该地儿童对外环境中铅污染的暴露情况,为保护当地居民的健康和相关部门的科学决策提供科学依据。方法:按《血铅临床检验技术规范》和WS/T20-1996《血中铅的石墨炉原子吸收光谱测定方法》的要求,采样检测该矿区儿童的血铅含量。结果:矿区儿童的血铅含量在11.2~225μg/L之间,平均值为90.3±33.3μg/L。值得关注的是,有234名儿童的血铅含量超过了100μg/L,铅中毒率高达35.8%。结论:矿区的儿童已经对外环境中的铅污染产生了暴露,值得引起相关部门高度重视。     

生物技术省级特色专业建设的探索与实践

结合南华大学的实际,生物技术专业经过积极的探索与实践,提出了培养具有"医药"特色的应用型生物技术创新人才的目标与思路,围绕培养方案、课程建设、教学改革、实践教学等环节阐述了生物技术省级特色专业建设的实践过程.     

二苯乙烯苷上调Bcl-2抑制内皮细胞凋亡

目的研究二苯乙烯苷（TSG）对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的作用,以及对抗凋亡基因Bcl-2表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,筛选造模内皮细胞凋亡的H2O2浓度,以不同浓度二苯乙烯苷作用24 h。采用MTT法检测细胞生长活力,Hoechst33258染色观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western-blot检测Bcl-2蛋白的含量。结果过氧化氢能引起内皮细胞损伤,抑制细胞增殖,并且随着浓度增加,细胞生存率逐渐降低。其中300μmol/L H2O2作用后细胞增殖明显受到抑制,Hoechst33258染色可见大量凋亡细胞,流式细胞仪检测出明显的凋亡峰,Bcl-2蛋白的表达量显著减少;加入二苯乙烯苷作用后,随着TSG浓度增加,细胞生存率增加,凋亡率逐渐降低;与H2O2造模组比较,10μmol/L的二苯乙烯苷预处理能够显著提高细胞生存率,抑制细胞的凋亡,并且使Bcl-2表达增加（P〈0.05）。结论二苯乙烯苷能抑制过氧化氢诱导的内皮细胞凋亡,该作用与上调Bcl-2表达有关。     

肥胖者高密度脂蛋白亚类组成与脂蛋白酯酶基因多态性的关系

目的探讨肥胖者高密度脂蛋白亚类组成与脂蛋白酯酶基因内含子8 HindⅢ酶切位点多态性的关系。方法采用聚合酶链反应限制性片长多态性和双向电泳免疫印迹检测法,分析95例肥胖者和144例体质指数正常者的脂蛋白酯酶基因内含子8 HindⅢ多态性、高密度脂蛋白亚类组成及相对百分含量。结果肥胖组和对照组均以H H 基因型为主。肥胖组血浆甘油三酯、载脂蛋白B100、CⅡ、CⅢ、E、前β1高密度脂蛋白水平及甘油三酯/高密度脂蛋白胆固醇较对照组增加,而高密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白AI、高密度脂蛋白2b水平及载脂蛋白E/CⅢ明显降低(P<0.05)。肥胖组H H 基因型者与H-H-者比较,血清甘油三酯、载脂蛋白B100、前β1-高密度脂蛋白、高密度脂蛋白3b含量显著升高,而载脂蛋白E/载脂蛋白CⅢ、高密度脂蛋白2a和高密度脂蛋白2b显著降低;肥胖组H H-基因型者与H-H-者比较,载脂蛋白B100、前β1高密度脂蛋白和高密度脂蛋白3b含量显著升高,而载脂蛋白E/CⅢ和高密度脂蛋白2a显著降低(P<0.05)。对照组H H 及H H-基因型者血清载脂蛋白CⅡ、载脂蛋白CⅢ和高密度脂蛋白3a含量均较H-H-者显著升高,而载脂蛋白E/载脂蛋白CⅢ、高密度脂蛋白2a、高密度脂蛋白2b显著降低(P<0.05)。结论脂蛋白酯酶基因H H 基因型与肥胖者增高的甘油三酯水平有关。中国人脂蛋白酯酶基因HindⅢ酶切位点多态性与高密度脂蛋白亚类的组成和分布相关,H 等位基因携带者高密度脂蛋白颗粒有变小的趋势,且肥胖者更为明显,表明H 等位基因携带者高密度脂蛋白成熟代谢障碍。     

血浆载脂蛋白A5水平与HDL亚类分布的关系

目的：探讨载脂蛋白A5（apolipoprotein A5,apoA5）水平对HDL亚类分布的影响。方法：采用酶联免疫吸附法（enzyme-1inked immunosorbent assay,ELISA）和双向电泳免疫印迹检测法分别检测310例受试者的血浆apoA5浓度和HDL亚类相对含量。受试者按apoA5浓度均值加或减去一个标准差作为分割点,分为高apoA5组（apoA5≥286．83mg／L）,中apoA5组（139．99mg／L≤apoA5〈286．83mg／L）和低apoA5组（apoA5〈139．99mg／L）。结果：与高apoA5组相比,apoA5低浓度组preβl-HDL和HDL3a含量显著升高（P〈0．01）,HDL2a和HDL2b显著降低（p〈0．01）。结论：随着血浆apoA5浓度降低,HDL亚类有变小的趋势,apoA5浓度降低可能阻碍了HDL亚类的成熟。     

ApoAⅠ促进THP-1源性泡沫细胞ApoE分泌的研究

目的 通过建立动脉粥样硬化损伤部位细胞模型,观察ApoAⅠ对THP-1源性泡沫细胞 ApoE分泌的影响,探讨ApoAⅠ与ApoE之间是否存在相互关系以及这种关系对动脉粥样硬化的影响.方法 采用聚乙二醇-6000(PEG-6000)沉淀法制备人血浆HDL,再利用凝胶过滤柱层析法分离ApoAⅠ;佛波酯(PMA)诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)使分化后THP-1细胞荷脂,建立动脉粥样硬化细胞模型;ELISA检测不同浓度ApoAⅠ(0,5,10,15,25 μg/ml)及不同孵育时间(0,3,6,12,24 h),THP-1源性泡沫细胞ApoE的分泌;RT-PCR检测细胞ApoE mRNA的表达情况.结果 ApoAⅠ增加THP-1源性泡沫细胞ApoE的分泌量;且ApoE蛋白质的分泌随着ApoAⅠ孵育时间增加而增加,在24 h ApoE的分泌量达最大;在剂量试验中,ApoE的分泌量随着ApoAⅠ剂量的增加有增加趋势,ApoAⅠ浓度为25 μmol/L时,ApoE分泌量最大;而ApoE基因的表达不受ApoAⅠ的影响.结论 一定浓度的ApoAⅠ促进THP-1源性泡沫细胞ApoE的分泌,且具有时间及剂量依赖性.而在基因水平上,ApoAⅠ对ApoE mRNA表达没有影响.     

去甲肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞SR-A1和转化生长因子-β1表达的影响

目的:探讨去甲肾上腺素对人THP-1源性巨噬细胞SR-A1和转化生长因子(TGF)-β1表达的影响.方法:不同浓度的去甲肾上腺素(10 pmol/L～10 μmol/L)作用THP-1源性巨噬细胞24 h,运用逆转录多聚酶链反应检测SR-A1和TGF-β1 mRNA的表达,Western-Blot检测SR-A1蛋白的表达,酶联免疫吸附试验检测TGF-β1蛋白的表达.结果:1 μmol/L及10 μmol/L的去甲肾上腺素作用THP-1源性巨噬细胞后,SR-A1 mRNA和蛋白表达上调,100 nmol/L 、1 μmol/L及10 μmol/L的去甲肾上腺素引起巨噬细胞中 TGF-β1 mRNA和蛋白水平均下降(均P＜0.05).结论:应激浓度的去甲肾上腺素能增加THP-1源性巨噬细胞SR-A1的表达,降低TGF-β1的表达.     

二苯乙烯苷对H2O2诱导的血管内皮细胞P选择素和E选择素表达的影响

目的研究二苯乙烯苷(TSG)对H2O2诱导损伤的人脐静脉内皮细胞P选择素和E选择素表达的影响。方法运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测P选择素和E选择素的mRNA和蛋白表达。结果 200μmol/L的H2O2作用人脐静脉内皮细胞24 h,P选择素和E选择素的mRNA和蛋白表达水平均明显上调,与空白对照组比较,差异具有显著性(P<0.01),但TSG预处理人脐静脉内皮细胞4 h后再加200μmol/L H2O2作用24 h,H2O2诱导的内皮细胞P选择素和E选择素的mRNA和蛋白表达水平降低,与H2O2处理组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论 TSG通过降低黏附分子P选择素和E选择素的表达可保护内皮细胞免受氧化应激损伤,影响动脉粥样硬化进程。     

姜黄素下调IDOL水平促进肝细胞摄取血浆LDLC

目的明确姜黄素可通过下调低密度脂蛋白受体诱导降解蛋白(IDOL)来升高低密度脂蛋白受体(LDLR)的表达水平,从而促进肝细胞摄取低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)。方法利用过表达IDOL和干扰IDOL慢病毒(OE/RNAi-IDOL)感染HepG2和LO2两种体外培养的肝细胞,倒置荧光显微镜观察病毒感染情况;Western blot检测IDOL及LDLR蛋白表达;油红O染色观察细胞中脂质情况;酶法检测细胞内胆固醇含量;DiI-LDL摄取实验检测肝细胞对LDLC的摄取能力;流式细胞术检测肝细胞膜LDLR分布丰度。结果与明场比较,暗场下可见胞内呈绿色荧光;与对照组比较,三种不同干扰IDOL慢病毒感染的HepG2和LO2细胞中,仅RNAi-IDOL-2的IDOL蛋白表达显著降低,且相应组的LDLR蛋白表达显著增强(P0.01),选择为后续RNAi-IDOL组所用;相反,OE-IDOL慢病毒感染的HepG2和LO2细胞中,IDOL表达显著增高,相应组内LDLR表达减弱;以上结果表明已获得RNAi-IDOL-2及OE-IDOL慢病毒感染的HepG2和LO2细胞模型。与无药物处理的Control组相比,RNAi-IDOL-2及OE-IDOL慢病毒感染的肝细胞内经25μmol/L姜黄素处理24 h后,油红O染色及胆固醇含量测定结果显示:细胞内脂滴含量和相对胆固醇含量均显著增加(P0.01);且DiI-LDL摄取及免疫流式细胞结果显示:肝细胞摄取LDLC的能力增强(P0.01);肝细胞膜表面LDLR分布丰度增多(P0.01);以上结果与阳性药物对照组的结果趋势一致。结论姜黄素可以下调肝细胞内IDOL水平,提高细胞膜LDLR分布丰度,从而促进肝细胞摄取LDLC。     

建设我校生物技术专业校外实习基地的探索与实践

校外实习基地是高校实践教学的重要场所,是培养学生动手能力和创新意识,提高教育教学质量的重要条件.从加强建设生物技术专业校外实习基地着手,结合实际情况,提出了完善制度确保校外实习基地的长效运行,建立校企双赢模式,规范实习大纲和考核制度,构建"五点一线"管理模式和"二对一"指导模式的对策和建议.