知母皂苷B对缺氧/复氧损伤星形胶质细胞的保护作用及其机制研究

目的:探讨知母皂苷B对缺氧/复氧损伤星形胶质细胞的保护作用及其可能机制。方法:原代新生SD大鼠星形胶质细胞经培养、鉴定后,随机分为正常组、模型组、阳性对照组(尼莫地平,10μmol/L)以及知母皂苷B低、中、高剂量组(1、10、100μmol/L)。正常组和模型组均给予完全培养基1 000μL,给药组给予含相应药物的完全培养基1 000μL。除正常组外,其余各组细胞均采用氧糖剥夺/再灌注法复制缺氧/复氧损伤模型。复氧后,采用比色法检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)的相对释放率;采用四甲基偶氮唑盐法检测细胞相对活力;采用酶联免疫吸附测定法检测细胞中水通道蛋白4(AQP-4)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果:与正常组比较,模型组细胞中LDH相对释放率以及AQP-4、IL-6、IL-1β、TNF-α的含量均显著升高,细胞相对活力显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各给药组细胞中LDH相对释放率以及AQP-4、IL-6、IL-1β、TNF-α的含量均显著下降,细胞相对活力均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:知母皂苷B可明显降低细胞损伤程度、增强细胞活力,对缺氧/复氧损伤星形胶质细胞具有一定的保护作用,且这种作用可能与其下调AQP-4和IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌有关。     

岗梅根和茎超临界CO_2萃取物中低极性挥发性成分比较及其对IEC-6细胞增殖活性的影响

目的:比较岗梅根和茎的超临界CO_2萃取物中的低极性挥发性化学成分及其体外对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6增殖活性的影响,为充分利用岗梅野生资源和扩大其药用部位提供参考。方法:采用超临界CO_2萃取法提取岗梅根和茎中的低极性挥发性化学成分,通过气质联用法(GC-MS)分析其化学成分组成。以IEC-6细胞为对象,采用不同质量浓度的岗梅根或茎超临界CO_2萃取物(0、1、5、10、20、40、60、80、100μg/mL)处理细胞,以MTT法检测细胞相对活力,绘制细胞增殖曲线图并计算各萃取物的半数有效浓度(EC_(50))。结果:通过GC-MS分析技术从岗梅根和茎超临界CO2萃取物中分别鉴定出62、46个低极性挥发性化学成分,其中共有成分24个,主要为壬酸(根、茎中分别含14.18%、6.14%)、辛酸(根、茎中分别含10.59%、4.35%)、己酸(根、茎中分别含8.63%、10.86%)、丹皮酚(根、茎中分别含7.79%、6.00%)、2-甲基-3-苯基-丙醇(根、茎中分别含6.30%、0.58%)、乙酸(根、茎中分别含1.72%、33.77%)等。细胞体外试验结果显示,岗梅根和茎超临界CO_2萃取物质量浓度较低(≤60μg/mL)时,能显著促进IEC-6细胞增殖,EC_(50)分别为16.35、20.20μg/mL;而当质量浓度较高(≥80μg/mL)时,则表现出细胞毒活性,对IEC-6细胞增殖呈抑制作用。结论:岗梅根和茎中的低极性挥发性化学成分种类相似,其萃取物对IEC-6细胞的体外生物活性也相似;短链脂肪酸很可能是其促进细胞增殖的活性成分,而丹皮酚则可能是其细胞毒活性成分。     

Wnt/β-catenin信号通路在骨肉瘤防治中的研究进展

Wnt/β-catenin信号通路是调节细胞发育和生长的一个关键途径[1]。在正常情况下对胚胎发育和器官的形成和功能起着重要的调节作用,此通路的失调参与人类多种肿瘤的发病过程[2]。骨肉瘤是儿童和青少年长骨干骺端常见的原发性恶性骨肿瘤,以产生骨样基质为病理特征,具有高度异质性、高复发率、多药耐药性、早期易肺转移等特点[3]。以外科手术联合甲氨蝶呤、顺铂等新辅助化疗的应用,使骨肉瘤患者的5年生存率提高到75%左右[4],但却不能有效地降低总病死率和改善整体预后,出现转移或复发的患者5年生存率<20%[5]。研究表明Wnt/β-catenin信号通路参与骨肉瘤细胞的生长、侵袭和转移,并有效诱导骨肉瘤的耐药和再生,是介导骨肉瘤发生和发展的一个重要因素[6]。     

PI3K抑制剂ZSTK-474对结直肠癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨PI3K抑制剂ZSTK-474对结直肠癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用不同浓度（0、1、2、4、6、8和10 μmol/L）ZSTK-474处理结直肠癌HT-29和HCT-116细胞24 h和48 h，CCK8法检测细胞增殖活性并计算出ZSTK-474在两株结直肠癌细胞中的半数抑制浓度（IC50）。根据IC50的值选用浓度为4 μmol/L的ZSTK-474作用HT-29和HCT-116细胞24 h，同时设置加入等量的0.1%DMSO为对照。采用平板克隆形成实验检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡，qRT-PCR检测细胞PI3K、Akt的mRNA水平，Western blot 检测细胞PI3K、Akt的蛋白水平。结果:ZSTK-474可明显抑制HT-29和HCT-116细胞的增殖，且呈时间和剂量依赖性。ZSTK-474可抑制HT-29和HCT-116细胞的侵袭能力，但不影响其凋亡。ZSTK-474处理HT-29和HCT-116细胞24 h后，PI3K和Akt的mRNA和蛋白表达水平均显著下降。结论:ZSTK-474能够抑制结直肠癌细胞增殖，并且能抑制其侵袭。     

miR-21对视网膜母细胞瘤细胞增殖的影响及作用机制

目的　探讨MicroRNA-21（miR-21）对视网膜母细胞瘤(RB)细胞增殖的影响及作用机制。方法　采用Real-time PCR技术检测miR-21在正常视网膜组织和确诊RB组织中的表达情况；然后在转染的基础上运用MTT检查RB细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡率。Western blot法检测与细胞凋亡相关蛋白PDCD4、Bax、Bcl-2的表达。结果　与正常视网膜组织miR-21表达 （0.703±0.071）相比，RB组织miR-21为高表达（2.214±0.162），差异有统计学意义（P<0.01）。在Weri-Rb-1细胞中，与NC组(2.245±0.213)相比，miR-21抑制剂转染后明显降低了miR-21的表达水平，miR-21 inhibitor组为0.683±0.075,差异有统计学意义 （P<0.01）。两组细胞转染后24 h、48 h、72 h、96 h，MTT测定法检测细胞活力结果显示:两组24 h的A值比较，差异无统计学意义 （P>0.05），miR-21 inhibitor 组在 48 h、72 h、 96 h的A值均低于 NC 组，差异均有统计学意义 （均为P<0.01）。流式细胞术检测结果显示:NC组凋亡细胞在总细胞中百分比为（3.045±0.301）%和（4.832±0.493）%，miR-21 inhibitor组凋亡细胞在总细胞中百分比为（2.593±0.257）%和（40.167±4.014）%，miR-21 inhibitor组Weri-Rb-1细胞的凋亡率明显高于miR-21 NC组(P<0.01)。Western blot检测结果显示:NC组PDCD4表达（0.192±0.045）相比miR-21 inhibitor组（0.683±0.091）表达明显减少，NC组Bax的蛋白表达水平（0.143±0.036）相比miR-21 inhibitor组（1.192±0.054）也明显减少，差异均有统计学意义（P<0.01)，NC组Bcl-2蛋白表达（0.864±0.038）相比miR-21 inhibitor组（0.257±0.026）明显增多，差异有统计学意义（P<0.05)。结论　miR-21是RB的促癌基因，miR-21抑制剂可以通过降低miR-21表达抑制肿瘤细胞的增殖、促进细胞凋亡，这一过程与PDCD4、Bax、Bcl-2等凋亡相关蛋白有关。     

a-1, 2岩藻糖基转移酶II在肺鳞癌组织中的表达及对肺鳞癌细胞增殖的影响

目的：探讨a-1，2岩藻糖基转移酶II（FUT2）在肺鳞癌中的表达情况及其对肺鳞癌细胞增殖的影响。方法：应用UALCAN数据库分析FUT2在临床肺鳞癌患者组织中的差异表达及其与肺鳞癌患者临床TNM分期、年龄及性别因素的相关性；采用瞬时转染技术，将FUT2的shRNA质粒转染进H226细胞株中构建FUT2低表达的肺鳞癌细胞模型；利用CCK-8、平板克隆及Western blot实验检测FUT2对肺鳞癌细胞的生长、单克隆细胞团形成及PCNA蛋白表达的影响。结果：FUT2在肺鳞癌尤其是肺鳞癌TNM早中期呈现高表达趋势（P＜0.05），而与年龄和性别无关。低表达FUT2可以抑制肺鳞癌细胞的生长速率和单克隆细胞团的形成数，同时，可以抑制肺鳞癌细胞PCNA蛋白的表达水平，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：FUT2在肺鳞癌中高表达且促进肺鳞癌细胞的增殖能力，有望成为肺鳞癌的早期诊断指标。     

Cyclin D1启动子在养精胶囊促进小鼠精原干细胞增殖中的作用※

目的 研究养精胶囊促进小鼠精原干细胞（SSCs）增殖的分子机制。方法 将不同浓度的养精胶囊提取物加入SSCs中培养48 h，CCK-8检测细胞的增殖活性，流式细胞仪检测细胞周期，荧光素酶报告基因检测Cyclin D1启动子的活性，qRT-PCR以及免疫荧光检测Cyclin D1的表达。之后进行阻断实验，在加入养精胶囊前预先加入siRNA-Cyclin D1，同样的方法检测细胞的增殖活性、细胞周期、Cyclin D1启动子的活性以及Cyclin D1的表达情况。结果 低、中、高浓度的养精胶囊可以促进SSCs的增殖，提高S期细胞的比例，增强Cyclin D1启动子的活性，促进Cyclin D1的表达。阻断Cyclin D1后，SSCs的增殖活性降低，S期细胞比例减少，Cyclin D1启动子的活性降低，Cyclin D1的表达减少。结论 养精胶囊通过增强Cyclin D1启动子的活性提高Cyclin D1的转录和翻译水平，进而促进SSCs增殖。     

清热化瘀汤对急性脑出血患者血清hs-CRP、血浆S100β蛋白和NSE的影响

目的:探究清热化瘀汤联合依达拉奉对急性脑出血患者血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血浆S100β蛋白和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的影响。方法:选择2017年5月—2019年5月在我院神经内科就诊符合纳入标准的80例急性脑出血患者,随机分为联合组(40例)和依达拉奉组(40例),两组均给予基础治疗和依达拉奉静脉滴注治疗,联合组则在此基础上加用清热化瘀汤。观察并比较两组的临床疗效、神经功能缺损程度评分(NIHSS)、格拉斯哥昏迷评分(GCS)、hs-CRP、S100β蛋白和NSE水平及脑血肿量。结果:联合组的总有效率为95%(38/40),显著高于依达拉奉组的总有效率75%(30/40)(P<0.05)。治疗后,两组NIHSS评分降低,GCS评分升高,且联合组NIHSS评分明显低于依达拉奉组(P<0.05),GCS评分高于依达拉奉组(P<0.05)。治疗后,两组hs-CRP、S100β蛋白和NSE水平及均脑血肿量均低于治疗前,且联合组hs-CRP、S100β蛋白和NSE水平及脑血肿量明显低于依达拉奉组(P<0.05)。结论:清热化瘀汤联合依达拉奉对急性脑出血患者具有良好的疗效,可显著改善其神经缺损,降低hs-CRP、S100β蛋白和NSE水平及脑血肿量。