吲哚并吲哒唑类衍生物对人脑胶质瘤U251细胞生长的抑制作用

 目的 研究6-甲基-11-(4-二甲基氨基苄烯-7,8,9,10-四氢-1-氢吲哚［1,2b］吲哒唑三氟甲磺酸盐对人脑胶质瘤U251细胞增殖,凋亡和细胞周期的影响。方法 分别采用噻唑蓝(MTT法检测U251细胞增殖活性、Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡形态、流式细胞仪检测细胞周期、Western blot检测细胞周期蛋白Cyclin D1和Cyclin B1的表达变化。结果 MTT法检测发现6-甲基-11-(4-二甲基氨基苄烯-7,8,9,10-四氢-1-氢吲哚［1,2b］吲哒唑三氟甲磺酸盐能显著抑制U251细胞的生长,且呈浓度及时间依赖性, Hoechst33258荧光染色检测观察到细胞凋亡形态的改变,流式细胞仪检测发现细胞阻滞于G2/M期和S 期,Western blot检测发现细胞周期蛋白Cyclin D1和Cyclin B1表达下调。结论 6-甲基-11-(4-二甲基氨基苄烯-7,8,9,10-四氢-1-氢吲哚［1,2b］吲哒唑三氟甲磺酸盐对人脑胶质瘤U251细胞增殖有明显的抑制作用,并能诱导其发生凋亡。其凋亡作用可能与G2/M期和S期阻滞有关。     

养精胶囊通过LncRNA H19调控StAR促进睾酮合成的实验研究※

目的 研究养精胶囊对LncRNA H19调控StAR作用及促进睾酮合成机制。方法 以体外MLTC-1细胞培养为模型，分别加入2 mL的培养基以及终浓度为0.01 mg/mL、0.1 mg/mL、1 mg/mL的养精胶囊水提物，并将其分别作为对照组和养精胶囊低、中、高剂量组，作用24 h。通过ELISA测定细胞T和FT浓度，通过qRT-PCR、Western Blot分别检测养精胶囊对MLTC-1中LncRNA H19 mRNA、StAR mRNA以及StAR蛋白表达的影响。结果 养精胶囊水提物可以显著提高MLTC-1细胞上清T和FT浓度浓度，同时还可以明显促进LncRNA H19 mRNA以及StAR mRNA和蛋白的表达水平，与对照组比较有统计学差异（P<0.05）。结论 养精胶囊可以通过LncRNA H19调控StAR，进而增加睾酮合成。     

桂皮醛对NIH3T3细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的：观察肉桂主要成分桂皮醛对小鼠成纤维瘤细胞株NIH3T3细胞周期及相关蛋白的影响。方法：采用流式细胞仪检测桂皮醛(5.5 ng ·mL^-1)对NIH3T3细胞周期分布的影响；用免疫细胞化学法检测桂皮醛对NIH3T3细胞的细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和增殖细胞核抗 原(PCNA)蛋白表达的影响。结果：流式细胞仪检测显示,桂皮醛作用24 h后NIH3T3细胞S期比例上升了3%(P<0.05),G₂/M期比 例无明显升高,细胞增殖指数(PrI)增加了3.5%(P<0.01)。经桂皮醛刺激后,NIH3T3细胞Cyclin D1和PCNA蛋白表达量明显增加,与对照组 比较,有极显著差异(P<0.01)。结论：桂皮醛可推动NIH3T3细胞周期向前进展,这种正向调控作用与桂皮醛能促进Cyclin D1和PCNA蛋白 表达有关。     

雷公藤甲素诱导结肠癌细胞凋亡的分子机制研究

目的研究雷公藤甲素对人结肠癌HCT-116细胞周期和凋亡的影响及其分子机制。方法采用MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡;Western blot检测细胞中相关蛋白的表达。结果雷公藤甲素可显著抑制HCT-116细胞的增殖活性;流式细胞仪和Western blot结果显示,雷公藤甲素作用HCT-116细胞后,G_0/G_1期细胞比例增多,随着雷公藤甲素浓度的增加,p21蛋白表达上调,周期蛋白Cyclin D1表达下调;并且,雷公藤甲素呈浓度依赖性诱导HCT-116细胞凋亡,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调。结论雷公藤甲素能抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖,通过促进p21的表达,抑制Cyclin D1使细胞周期阻滞于G_0/G_1期,并可通过线粒体途径诱导HCT-116细胞凋亡。     

蒲公英-丝瓜络提取物对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖与凋亡作用的影响的体外试验研究※

目的 研究蒲公英-丝瓜络（PS）提取物对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖和凋亡作用的影响。方法 将不同浓度的PS提取物作用于乳腺癌4T1细胞,通过CCK8法和集落形成实验检测PS提取物对细胞增殖的影响;通过Hoechst 33258细胞核染色法和Annexin V-FITC/PI染色法观察细胞凋亡情况;通过Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、CDK2、Cyclin A2蛋白表达,评估PS提取物对乳腺癌4T1细胞周期与凋亡相关蛋白表达的影响。结果 CCK8结果显示PS提取物各剂量组作用24、48、72 h后细胞存活率下降;不同浓度PS提取物处理4T1细胞后,细胞集落形成能力减弱;细胞周期检测结果表明PS提取物能阻滞细胞周期于S期;Hoechst 33258染色实验观察到细胞核固缩和出现明显的凋亡小体,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测发现细胞凋亡率增加;Western blot结果显示PS提取物可使Bcl-2、周期蛋白Cyclin A2及CDK2表达降低,Bax、Cleaved caspase-3表达增加。结论 PS提取物具有抑制乳腺癌4T1细胞增殖的作用,该作用可能与诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞有关。     

卷柏总黄酮及穗花杉双黄酮对人脐静脉内皮细胞增殖及VEGF蛋白表达的影响

 目的 观察卷柏总黄酮、穗花杉双黄酮对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖及血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度卷柏总黄酮及穗花杉双黄酮对HUVEC细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot检测VEGF蛋白的表达。结果 不同质量浓度的卷柏总黄酮（1、5、10、15、20 μg·mL-1）和穗花杉双黄酮（0.3,1,2,4,5 μg·mL-1）可以剂量依赖地促进HUVEC细胞增殖,其中卷柏总黄酮10 μg·mL-1、穗花杉双黄酮1 μg·mL-1在36 h时显著促进细胞增殖,提高S期细胞比例,VEGF蛋白表达明显升高。结论 细胞实验结果提示卷柏中黄酮类物质可能具有促血管新生的作用。     

猫眼草中科罗索酸对肝癌SMMC-7721细胞作用的研究＊

目的 研究猫眼草活性单体的体外诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用与机制。方法 以人肝癌SMMC-7721细胞为研究对象，MTT法测定猫眼草的活性单体科罗索酸对细胞的增殖作用的影响并考察不同浓度药物作用下的细胞形态。细胞划痕实验检测细胞迁移能力。流式细胞仪测定细胞凋亡和周期的情况。蛋白质免疫印迹（Western Blot）实验检测凋亡相关蛋白的表达。结果 MTT实验结果显示科罗索酸对人肝癌SMMC-7721细胞抑制作用强于巨大戟醇但弱于盐酸阿霉素。对细胞形态学和细胞划痕、细胞凋亡实验证实了科罗索酸有抑制该细胞生长的作用。细胞周期检测发现低剂量的科罗索酸使人肝癌SMMC-7721细胞周期阻滞在S期，而高剂量的科罗索酸会使人肝癌SMMC-7721细胞阻滞在G0/G1期。Western Blot结果显示上调抑癌蛋白Bax表达、下调Bcl-2基因。结论 猫眼草中的科罗索酸主要通过诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期两个机制发挥抗肿瘤作用，是通过调控Bax/Bcl-2的表达来抑制肿瘤细胞的生长，是一种线粒体膜损伤导致的内源性路径调节。     

斑蝥酸钠维生素B6诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及周期阻滞

目的: 研究斑蝥酸钠维生素B6（艾易舒）注射液对人肝癌HepG2细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响,探讨其分子机制。 方法: 将不同浓度的斑蝥酸钠维生素B6注射液（0,1,5,10 mg·L^-1）作用于人肝癌HepG2细胞12,24,48 h,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞学技术检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,Western blot检测蛋白激酶B（Akt）,磷酸化蛋白激酶B（pAkt）,B细胞淋巴瘤-2基因相关X蛋白（Bax）,B细胞淋巴瘤-2基因（Bcl-2）及细胞周期依赖性激酶抑制因子p21蛋白表达变化,RT-PCR检测Bax,Bcl-2及p21 mRNA表达变化。 结果: 斑蝥酸钠维生素B6可显著抑制HepG2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,具有显著的时间和浓度效应（P<0.05）;同时G₀/G₁期细胞比例显著升高,S期细胞比例显著降低（P<0.05）。Western blot结果显示斑蝥酸钠维生素B6可下调HepG2细胞中pAkt和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax和p21蛋白的表达（P<0.05）。RT-PCR结果显示Bax,p21 mRNA的表达水平明显升高,而Bcl-2 mRNA的表达水平下降（P<0.05）。 结论: 斑蝥酸钠维生素B6可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,诱导其凋亡并引发G₀/G₁期阻滞,其机制可能与斑蝥酸钠维生素B6参与调控磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路有关。     

独活寄生汤水提物对软骨细胞G1期调控因子mRNA表达的影响

目的: 探讨独活寄生汤水提物对软骨细胞G₁期的影响。 方法: 取4周龄雄性SD大鼠,建立软骨细胞体外培养体系,第3代软骨细胞进行干预,采用MTT法检测不同浓度的独活寄生汤水提物对软骨细胞活性的影响;RT-PCR检测空白组、独活寄生汤水提物低、中、高剂量组(100,200,400 mg·L^-1)软骨细胞Cyclin D1,CDK4,CDK6及P21 mRNA的表达。 结果: MTT法检测显示,在一定的药物质量浓度范围内(50~800 mg·L^-1),软骨细胞活性显著上升(P<0.01);干预24 h后,Cyclin D1,CDK4及CDK6 mRNA表达量各剂量组明显增加(P<0.05),200 mg·L^-1表达量最大(P<0.01);P21 mRNA表达量降低,且200 mg·L^-1抑制作用最明显(P<0.01)。 结论: 独活寄生汤水提物通过影响软骨细胞G₁期调控因子mRNA的表达,促进软骨细胞的增殖。     

人参皂甙对不同代龄人胚肺成纤维细胞的增殖及Cyclin D1基因表达的影响

目的 :探讨人参皂甙对衰老的人胚肺成纤维细胞增殖及CyclinD1基因表达的调节作用 ,以进一步研究人参皂甙抗细胞衰老的机制。方法 :用体外培养的人胚肺成纤维细胞为细胞衰老模型 ,通过细胞流式分析、免疫组化及RT PCR方法 ,观察了人参皂甙对成纤维细胞的增殖周期、DNA合成 ,CyclinD1mRNA和蛋白质表达情况。结果 :衰老的成纤维细胞用人参皂甙连续处理 4代后 ,处于G1期的细胞数明显减少 ,进入S期的细胞由 16 7%增加到 33% (P <0 0 5 ) ;CyclinD1mR NA表达比对照组下降 ,CyclinD1蛋白质表达由原来的 77 1± 2 9明显下降为 5 2± 6 3(P <0 0 0 1) ,DNA合成增加 17% (P <0 0 5 )。人参皂甙对低代龄细胞的CyclinD1RNA合成有所增加 ,对CyclinD1蛋白质、DNA的作用影响不大。结论 :人参皂甙对人胚肺成纤维细胞具有双向作用 ,对高代龄细胞具有促进细胞增殖 ,调节CyclinD1基因表达的作用     

Lithocarpus polystachyus (Sweet Tea) water extract promotes human hepatocytes HL7702 proliferation through activation of HGF/AKT/ERK signaling pathway

Objective: Sweet Tea (ST), derived from the leaves of Lithocarpus polystachyus, is a Chinese folk medicine with wide pharmacological activities. However, the promotive effects of ST water extract on hepatocytes proliferation and its underlying mechanism remains still unknown. In the present study, the beneficial effects of ST water extract on human hepatocytes and its possible mechanism were investigated. Methods: MTT assay was used to detect the safety range of ST; HL7702 cells were divided into four groups: control group, ST low- (50 μg/mL), medium- (200 μg/mL) and high-concentration (800 μg/mL) groups; BrdU ELISA and EDU staining were used to observe DNA content and cell proliferation; Moreover, flow cytometry was applied to analyze the distribution of cell cycle. Furthermore, the expression of cyclin D1, CDK4, HGF/c-Met, Akt, Erk1/2 were detected by Western blot. Results: It was found that ST water extract concentration-dependent promoted human hepatocytes HL7702 cell proliferation within 72 h through accumulating the cells in S phase and G2/M phase. Furthermore, ST water extract up-regulated expression of Cyclin D1 and CDK4 proteins. Moreover, ST water extract not only increased HGF expression and phosphorylation of c-Met level, but also activated the phosphorylation levels of AKT, ERK1/2. Interestingly, both of AKT inhibitor A6730 and ERK1/2 inhibitor U0126 reversed the promotive effects of ST water extract, which further confirmed that activation of AKT and ERK1/2 were involved. Conclusion: The findings reveal that ST water extract promoted HL7702 cells proliferation through the stimulation of cell cycle mediated by activating the AKT- and ERK1/2-related pathway.     

姜黄素对人食管癌细胞Eca-109增殖及细胞周期的影响

目的研究姜黄素对人食管癌细胞Eca-109细胞周期的影响及其作用机制。方法采用MTT法分析不同浓度姜黄素对Eca-109细胞增殖的影响,采用流式细胞术分析姜黄素对Eca-109细胞周期的影响,采用RT-PCR技术检测姜黄素对Eca-109细胞Cyc linB1mRNA表达的影响,采用W estern-b lotting方法检测姜黄素对Eca-109细胞Cyc lin B1蛋白表达的影响。结果 20,40,60μmol/L姜黄素均可明显抑制Eca-109细胞的增殖(P均<0.05),特别是姜黄素作用24 h后,随姜黄素浓度增加,Eca-109细胞的G0/G1期细胞比例明显下降而G2/M期细胞比例明显提高,Cyc lin B1蛋白与mRNA表达水平均降低,与对照组比较均有显著性差异(P均<0.01)。结论姜黄素可抑制Eca-109细胞增殖,使细胞周期阻滞,该作用可能与下调细胞Cyc lin B1表达有关。     

大蒜素逆转人乳腺癌MCF-7细胞顺铂耐药性的研究

[目的]探索大蒜素对人乳腺癌MCF-7细胞顺铂耐药性的逆转作用及调控机制。[方法]以对数生长期人乳腺癌耐顺铂MCF-7/DDP细胞为受试细胞,设空白对照组(DMSO)、大蒜素(20μg/mL)单药组、顺铂(6μg/mL)单药组、联合组(大蒜素20μg/mL+顺铂6μg/mL)。药物干预48 h后,噻唑蓝(MTT)染色法检测MCF-7/DDP细胞增殖抑制率,应用Annexin V-FITC染色、碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡和分析细胞周期分布,Western blot法检测细胞凋亡相关调控蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]和细胞周期相关调控蛋白[特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1),周期蛋白依赖激酶2、4、6(CDK2、CDK4、CDK6)]的表达。[结果]与顺铂单药组比较,联合组MCF-7/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率升高,G0/G1期MCF-7/DDP细胞比例升高,Bax表达量升高而Bcl-2表达量降低、Bax/bcl-2值升高,Cyclin D1、CDK2、CDK4、CDK6表达量降低,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与空白对照组比较,大蒜素单药组MCF-7/DDP细胞G0/G1期比例升高,Bax表达量升高且Bcl-2表达量降低、Bax/bcl-2值升高,Cyclin D1、CDK2、CDK4、CDK6表达量降低,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。[结论]大蒜素具有逆转人乳腺癌MCF-7细胞顺铂耐药性的药理学作用,可能与调节细胞凋亡、周期相关蛋白表达进而诱导MCF-7/DDP细胞凋亡、阻滞其细胞周期进程有关。     

黄芪总黄酮和毛蕊异黄酮对K562细胞的抑制作用及其机制研究

目的:探讨黄芪总黄酮(total flavonoids of Astragali Radix,TFA)和毛蕊异黄酮在体外实验条件下对人红白血病K562细胞凋亡及细胞周期的影响.方法:以K562细胞为实验对象,运用MTT方法测定不同浓度TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞的增殖抑制作用,PI单染法检测药物对K562细胞周期的作用,Annexin V/PI双染法检测药物对K562胞诱导凋亡的影响,并且应用RT-PCR技术检测药物作用下K562细胞中Cyclin D1 mRNA水平表达的变化.结果:与阴性对照组相比,TFA及毛蕊异黄酮处理24h后,TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞有明显的抑制作用,其IC5o分别为98.63,130.32 mg·L-1;TFA在100 mg·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为7.8％,毛蕊异黄酮在130 mg·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为5.8％;药物对K562细胞持续作用24h后,可以使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少;经IC50剂量的药物处理后,K562细胞内的Cyclin D1 mRNA水平明显降低.结论:TFA和毛蕊异黄酮具有抑制K562细胞增殖作用;将细胞生长周期阻滞在G0/G1期以及降低细胞内Cyclin D1 mRNA水平可能是它们抑制K562细胞生长的主要作用机制.     

芒果苷对白血病K562细胞周期分布及细胞周期素A、细胞周期素B1表达的影响

目的：观察芒果苷对白血病K562细胞周期分布及细胞周期素A（CyclinA）、细胞周期素B（CyclinB1）表达的影响,以进一步探讨芒果苷抗白血病的分子作用机制。方法：应用流式细胞仪检测细胞周期的分布,用RT-PCR方法检测Cyclin A及Cyclin B1 mRNA表达水平。结果：芒果苷作用24 h后,K562细胞G2/M期细胞增多,出现G2/M期阻滞,并呈现剂量依赖性;Cyclin A mRNA和Cyclin B1 mRNA的表达随作用浓度的增加而逐渐增强,呈显著的剂量依赖性。结论：芒果苷阻滞白血病K562细胞周期于G2/M期,明显上调K562细胞Cyclin A和Cyclin B1 mRNA表达水平,芒果苷诱导K562细胞G2/M期阻滞可能是其抗白血病作用的分子机制之一。     

健骨颗粒含药血清对大鼠成骨细胞G_1期调节蛋白的影响

目的探讨健骨颗粒含药血清对成骨细胞G_1期调节蛋白的影响。方法采用酶消化法培养SD大鼠成骨细胞,健骨颗粒含药血清干预,以生理盐水大鼠血清为对照,运用流式细胞术检测成骨细胞增殖周期,免疫细胞化学法、RT-PCR法检测成骨细胞G_1期调节蛋白细胞周期蛋白(Cyclin)D1、CDK4、P21表达。结果 20%健骨颗粒含药血清能推进成骨细胞增殖周期进程,促进其增殖;成骨细胞核中存在Cyclin D1、CDK4、P21等蛋白表达;与生理盐水血清比较,健骨颗粒含药血清干预24、48、72 h均能提高成骨细胞CyclinD1、CDK4蛋白及mRNA表达(P0.05或P0.01),而降低P21表达(P0.05,P0.01)。结论健骨颗粒含药血清能从mRNA及蛋白层面上提高体外培养成骨细胞Cyclin D1、CDK4表达,抑制负性调节因子p21的表达,调节G_1期调节蛋白,促进成骨细胞增殖。     

二乙酰二脱水卫矛醇抑制鸟氨酸脱羧酶活性及机制初探

 目的研究二乙酰二脱水卫矛醇(DADAG)对鸟氨酸脱羧酶(ODC)活性的影响及其对人前列腺癌PC-3M细胞增殖的作用,并初步探讨其可能的分子机制。方法采用酶促反应法测定DADAG对PC-3M细胞中ODC活性的影响,用SRB法观察DADAG对PC-3M细胞增殖的抑制作用,流式细胞术分析DADAG对PC-3M细胞周期的改变,Western blot方法检测DADAG对PC-3M细胞周期相关蛋白Cdc2,CyclinB1,p-Cdc2(Tyr15),Cdc25C和Wee1表达的影响。结果5和10mg·L^-1 DADAG作用PC-3M细胞24h后,ODC活性的抑制率分别为39.3%和31.1%。SRB结果显示,40mg·L^-1DADAG作用PC-3M细胞48和72h后,细胞增殖抑制率分别为34.6%和47.8%,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。细胞周期分析表明,5,10和20mg·L^-1DADAG作用48h后,G₂/M期细胞百分数为47.4%,62.9%和69.1%。DADAG作用细胞后,Cdc25C的表达下调,而Cyclin B1,p-Cdc2(Tyr15)和Wee1表达上调,Cdc2变化不明显。结论DADAG可降低PC-3M细胞中ODC的活性,并抑制细胞的增殖,使阻滞细胞周期于G₂/M期,DADAG的抗肿瘤机制与降低ODC活性,改变p-Cdc2(Tyr15),Cdc25C和Wee1蛋白表达有关。