福氏志贺菌4c亚型深圳分离株的生物学和分子特性分析

[目的]对深圳市首次分离的福氏志贺菌4c亚型菌株进行生物学和分子特性分析,了解该类新菌型生物学特征及分子特征。[方法]采用生化反应、血清学分型、刚果红侵袭试验、药敏分析等方法对患者、厨工肛拭及物体表面的17株福氏志贺菌分离株进行病原学分析,采用质粒图谱和毒力基因分析方法进行分子特性分析。[结果]所得到的福氏志贺菌4c亚型分离菌均分解葡萄糖产酸不产气,甘露醇阳性,血清学鉴定为福氏志贺菌IV型,7群菌株;刚果红侵袭试验均阳性;对氨卞西林、四环素、甲氧苄啶、阿莫西林耐药,而对阿米卡星、环丙沙星、庆大霉素、头孢噻肟、头孢噻吩和诺氟沙星敏感;所有菌株的质粒电泳图谱相同,但与F4a、F4b质粒电泳图谱差异较大;所有菌株均携带ipaH和set1基因,而仅有23.5%(4/17)的菌株携带ial和sen基因。[结论]该福氏志贺菌4c亚型深圳分离株的的生化、血清学鉴定结果与现有报道基本相符,该菌具备一定毒力。所有菌株均为同一来源,但4c亚型并非变异于F4a和F4b。ipaH和set1毒力基因携带情况与相关报道相符,ial和sen基因携带情况低于现有报道。     

武汉市2010年志贺氏菌菌株情况分析

目的 掌握武汉市2010年细菌性痢疾监测中分离的志贺氏菌的生化血清学分型、药物敏感状况及毒力基因携带情况.方法 按<全国细菌性痢疾监测方案>提供的方法进行病原菌分离鉴定和药敏试验;利用PCR方法分别对志贺氏菌分离株7对毒力相关基因进行检测.结果 2010年分离志贺氏菌15株,宋内氏菌12株,福氏志贺氏菌3株.志贺氏菌敏...     

甘肃省2006-2009年细菌性痢疾耐药谱及脉冲场凝胶电泳分析

目的 对中国甘肃省2006-2009年细菌性痢疾监测点分离到的志贺菌进行耐药谱和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型研究,探讨甘肃省细菌性痢疾的分子流行病学特征.方法 对2006-2009年甘肃省细菌性痢疾监测点分离到的473株志贺菌进行血清型及耐药性分析;采用限制性内切酶对2009年分离的166株志贺菌进行PFGE分型...     

A Contribution of MdfA to Resistance to Fluoroquinolones in Shigella flexneri

In this study, we measured the drug resistance conferred by mdfA mutations in two Shigella flexneri strains. A mutant in mdfA genes was constructed by polymerase chain reaction–based, one-step inactivation of chromosomal genes. The antimicrobial susceptibility of parent and mutant strains to fluoroquinolones was determined by minimal inhibitory concentration (MICs). The △mdfA mutants were somewhat more susceptible to fluoroquinolones than the parent strains. The low level changes in MICs of the △mdfA mutants suggest that mdfA contributed the fluoroquinolone resistance in S flexneri. This finding found that the increased expression level of an MdfA efflux pump mediated fluoroquinolone resistance, but it is not likely a major effecter of higher resistance levels.     

志贺菌主动外排泵调控基因marOR突变与泵表达水平的关系

目的 了解临床分离志贺菌调控基因marOR的突变情况,并探讨其与主动外排泵表达水平的关系.方法 对100株临床分离志贺菌和本实验室筛选的敏感菌及标准株的marOR基因进行聚合酶链反应(PCR),对扩增产物进行限制性内切酶酶切与单链构象多态性(SSCP)分析,对marOR基因突变株进行测序,利用RT-PCR测定其泵基因acrA、acrB和tolC的表达水平,并对其进行四环素、氯霉素、氨苄青霉素、庆大霉素、诺氟沙星、复方新诺明等6种药物的药敏试验.结果 100株临床分离志贺菌、敏感株及标准株均扩增出marOR基因,未发现该基因缺失株;SSCP分析发现marOR基因的突变率为23%;随机选择11株marOR基因突变株和1株敏感株及标准株进行测序,其中有9株存在4个碱基的缺失和3个位点的碱基突变,RT-PeR分析表明11株marOR基因突变株的acrAB-tolC主动外排泵表达水平高于敏感株和标准株,且该11株均为多蕈耐药株.结论 在该实验中志贺菌marOR基因突变率较高,其突变株的acrAB-tolC主动外排泵基因高表达,可能增加耐多药性.     

广东省福氏志贺菌F4c的病原学特征分析

目的了解广东省新型福氏志贺菌F4c菌株的流行与病原学特征。方法对2000—2004年广东省痢疾监测收集的227株志贺菌进行血清学分型,并对其中46株福氏志贺菌F4c菌株以及2004、2007年2起痢疾暴发监测收集的5株和2005年散发病例收集的2株F4c菌株（共53株）进行生化、血清学试验、药敏试验和PFGE分型;并用气相色谱仪测定其中6株的脂肪酸成分。结果 2000—2004年广东省痢疾监测发现：227株志贺菌除20株为宋内氏志贺菌外,其余均为福氏志贺菌,其中F2a的菌株数最多,有55株（占菌株总数的24.2%）,其比例从2000年的44.0%下降至2004年8.6%,F4c有46株,占20.3%,从2000年未检出F4c菌株,至2003年F4c占菌株总数的比例上升至71.7%（38/53）。53株F4c的生化结果符合志贺菌特征,血清学均为福氏多价＋,IV型因子＋,7,8群血清＋;53株F4c菌株对头孢曲松、诺氟沙星、头孢噻肟和环丙沙星4种药物敏感,敏感率分别为100.0%、92.9%、92.9%、71.4%,对四环素、复方新诺明、萘啶酸、氯霉素和氨苄西林均产生耐药,除氨苄西林的耐药率为91.7%外,其余均达到100.0%。PFGE对43株F4c进行分子分型,共分为21个不同的型别;6株志贺菌F4c的主要脂肪酸成分为12∶0酸、14∶0酸、Sum In Feature2、Sum In Feature 3、16∶0酸、17∶0 cyclo、Sum In Feature 8和19∶0 cyclo w8c等8种脂肪酸。结论福氏志贺菌4c菌株用PFGE进行分子分型在整体上表现出较大的遗传多样性;福氏志贺菌4c在广东省的流行出现上升趋势,并在部分地区暴发疫情,提示F4c菌型可能逐步演变成为一类稳定的福氏志贺菌菌株。     

食品中志贺菌特异性二重PCR检测方法的研究

目的:建立二重PCR方法快速检测食品中的志贺菌(Shigella spp.)。方法:以侵袭性质粒抗原H基因ipaH和铁载体基因iuc为靶基因,筛选引物,建立二重PCR体系。对3株志贺菌和28株非志贺菌进行特异性检测。梯度稀释志贺菌基因组DNA,以不同稀释度DNA作PCR扩增。在孜然牛肉中以不同菌量人工污染,不同增菌时间培养,提取DNA进行PCR扩增。应用该方法检测实际样品。结果:以ipaH、iuc为靶基因的2对引物对志贺菌的检出有很好的特异性。PCR检测的灵敏度在DNA水平上达到78.73 pg。人工污染样品,当起始污染量为0.56 cfu/g时,37℃增菌培养10 h即可检出。一共检测了18份样品,未检出志贺菌,与传统方法一致。利用该方法检测了一份盲样冻干样品,检出志贺菌,与实际结果相符。结论:建立了适用于食品中志贺菌检测的特异灵敏二重PCR方法。     

马鞍山市志贺菌福氏4c亚型毒力基因检测及分子分型研究

目的了解马鞍山市志贺菌福氏4 c(ShigellaF4c)分离株的毒力基因的流行模式及分子分型的特点,掌握Shi-gellaF4c在该市的流行状况。方法使用常规法进行菌株分离培养、使用全自动微生物鉴定系统进行生化鉴定,鉴定为志贺菌的阳性菌株使用PCR检测ShigellaF4c的ipa H、ial、set、sen四种毒力基因及应用PFGE进行分子分型。结果 ipa H、ial、set、sen四种毒力基因在76株ShigellaF4c的携带率分别为100%、97.4%、96.1%、90.8%,其中67株ShigellaF4c四种毒力基因全为阳性,占88.2%;本地区ShigellaF4c携带毒力基因模式分成五大类型,Ⅰ型是主要毒力基因模式。PFGE电泳条带图谱显示,ShigellaF4c中100%相同的菌株数较少;100%相同的都为同一年代,91%相同的菌株出现跨年度;不同年代分离株无完全相同基因型,地域方面没有明显联系。结论马鞍山地区S.F4c分离株携带ipa H、ial、set、sen四种毒力基因普遍存在,毒力强是本地区ShigellaF4c主要特征之一;ShigellaF4c在本地区无显著的流行迹象,属于散在发病。     

Safety and immunogenicity of a Shigella flexneri 2a Invaplex 50 intranasal vaccine in adult volunteers

Shigellosis is a leading cause of diarrhea worldwide prompting vaccine development. The Shigella flexneri Invaplex 50 is a macromolecular complex containing IpaB, IpaC, and LPS, formulated from an aqueous extract of virulent Shigella delivered via nasal administration. Preclinical vaccine testing demonstrated safety, immunogenicity and efficacy. An open-label dose-escalating phase 1 study evaluated a 3-dose (2-week intervals) regimen via nasal pipette delivery. Thirty-two subjects were enrolled into one of four vaccine dose groups (10, 50, 240, or 480 μg). The vaccine was well tolerated with minor short-lived nasal symptoms without evidence of dose effect. Antibody-secreting cell (ASC) responses were elicited at doses ≥50 μg with the highest IgG ASC, Invaplex 50 (100%) and S. flexneri 2a LPS (71%), as well as, serologic responses (43%) occurring with the 240 μg dose. Fecal IgA responses, Invaplex 50 (38.5%) and LPS (30.8%), were observed at doses ≥240 μg. The Invaplex 50 nasal vaccine was safe with encouraging mucosal immune responses. Follow-on studies will optimize dose, delivery mechanism and assess efficacy in a S. flexneri 2a challenge study.     

Decrease in shigellosis-related deaths without Shigella spp.-specific interventions, Asia

In 1999, a review of the literature for 1966-1997 suggested that ≈1.1 million persons die annually of shigellosis, including ≈880,000 in Asia. Our recent review of the literature for 1990-2009 indicates that ≈125 million shigellosis cases occur annually in Asia, of which ≈14,000 are fatal. This estimate for illnesses is similar to the earlier estimate, but the number of deaths is 98% lower; that is, the lower estimate of deaths is associated with markedly reduced case-fatality rates rather than fewer cases. Shigella spp.-related deaths decreased substantially during a period without Shigella spp.-specific interventions. We speculate that nonspecific interventions, e.g., measles vaccination, vitamin A supplementation, and improved nutrition, may have led to the reduced number of shigellosis-related deaths.