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41.
42.
目的建立一种检测人血清中基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)的双抗体夹心ELISA法,探讨血清TIMP-2的水平与肝纤维化病程进展程度的关系。方法确定包被TIMP-2单克隆抗体(McAb)和辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗TIMP-2McAb的最佳工作浓度,建立双抗体央心ELISA方法,并用于临床初步检测408例肝炎血清TIMP-2水平。结果包被TIMP-2McAb的最佳工作浓度为2μg/ml,HRP标抗体的最佳工作浓度1:400。该法具有良好的重复性,灵敏度达5ng/ml,中和抑制率在80%以上,稳定性能好,与国外TIMP-2 ELISA试利盒进行对比试验,表明两种检测方法有良好的相关性(Y=1.2752X-4.7465,r=0.976)。临床检测表明TIMP-2随着病损纤维化程度加重而升高,与正常人血清TIMP-2水平相比差异显著(P〈0.01~0.001)。结论该法能够快速检测人血清中TIMP-2浓度,血清TIMP-2可作为定量诊断肝纤维化指标之一。本试验为国内TIMP-2诊断试剂盒的研制和开发提供了科学实验依据 相似文献
43.
目的利用HCV体外培养细胞模型,观察C型凝集素CLEC4M对于HCVcc易感性的影响。方法构建GV166-CLEC4M慢病毒表达载体,脂质体转染293T细胞,获取的慢病毒转染Huh7.5细胞,获得稳定过表达CLEC4M的Huh7.5细胞系(即Huh7.5-CLEC4M),Western印迹和RT-PCR检测CLEC4M的过表达情况。利用HCVcc病毒液感染过表达CLEC4M的Huh7.5细胞系,并设置单克隆抗体干扰组及甘露聚糖干扰组,检测CLEC4M对HCVcc感染性的变化。结果 Huh7.5细胞系获得稳定过表达的CLEC4M。Huh7.5-CLEC4M获得对HCVcc的高度易感性。经鼠抗人CLEC4M单克隆抗体和甘露聚糖干扰后,Huh7.5细胞的感染效率较前降低。结论 C型凝集素CLEC4M影响细胞对HCVcc的易感性,可能与HCV的嗜肝性有关。 相似文献
44.
45.
目的 筛选汉坦病毒β3整合素受体拮抗肽,为进一步设计和获取高活性的抗病毒短肽提供参考资料.方法 以β3整合素为靶分子,从随机七肽噬菌体展示库中筛选β3整合素的高亲和力噬菌体配体,应用相关软件对阳性噬菌体的基因DNA测序结果进行分析.结果 通过比较亲和性噬菌体外源插入肽的DNA序列,发现LPLTPLP、TGVKGPG、DHRNHLV肽段有较高的重复概率,经与汉滩病毒囊膜糖蛋白氨基酸序列比较发现,两者存在一定的同源序列.结论 运用噬菌体展示技术从肽库中筛选β3整合素受体拮抗剂是可行的. 相似文献
46.
目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)包膜基因E1E2对核心基因C DNA疫苗诱生的免疫应答作用。方法 将包含HCV C或CE1E2基因片段插入真核表达载体pcDNA3中,构建重组质粒pHCV-C或pHCV-CE1E2,分别免疫Balb/c小鼠,每间隔2wk加强免疫1次,同时剪尾取血。ELISA法检测免疫小鼠血清中HCV C特异性抗体的水平。以pHCV-C转染并表达HCcAg的BLAB/c小鼠骨髓瘤Sp4/0细胞为靶细胞,采用~(51)Cr释放试验检测特异性CTL的杀伤作用。结果 两个实验组20只小鼠均产生抗HCV C特异性抗体,当效/靶细胞比例为100:1时,CTL的杀伤率均明显高于对照组(p<0.01);而pHCV-CE1E2与pHCV-C组之间,无论是抗HCV C抗体的滴度还是CTL的杀伤率均无显著性差异(p>0.05)。结论 E1E2基因的加入,并没有增加HCV C基因DNA疫苗诱导的抗HCcAg特异性抗体的滴度和CTL的杀伤作用。 相似文献
47.
HCV E1/E2-Fc融合基因真核载体的构建及表达产物的鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
48.
49.
pcDNA3.1-CD81载体在人肝癌细胞中的表达及意义 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究人白细胞分化抗原CD81真核表达载体pcDNA3.1-CD81在人肝癌细胞系HepG2中的表达及意义。方法由人Molt-4细胞提取细胞总RNA,根据已公布的序列设计引物,运用RT-PCR及PCR方法扩增出人CD81基因,应用TA克隆插入PMD-18T载体;定向克隆入真核表达载体pcDNA3.1( );通过脂质体介导转染人肝癌细胞系HepG2,用免疫组织化学方法(ABC法)及流式细胞技术检测目的蛋白的表达。结果由RT-PCR及PCR方法扩增出入CD81编码基因与Genebank公布的序列完全一致。重组真核表达载体pcDNA3.1-CD81经酶切和PCR鉴定分析正确。免疫组织化学方法(ABC法)及流式细胞技术证明转染的HepG2细胞表面能有效地表达CD81蛋白。结论所构建的pcDNA3.1-CD81真核表达载体在HepG2细胞有良好的表达,该转染细胞可作为研究CD81在HCV感染中的作用提供细胞模型,为研究丙型肝炎病毒(HCV)与CD81相互作用奠定基础。 相似文献
50.
重型肝炎的临床诊治和研究进展——第五讲 重型肝炎并发肝性脑病的诊治进展 总被引:9,自引:0,他引:9
肝性脑病(hepatic encsphalopathy,HE)系肝功能衰竭或失代偿性肝硬化门体静脉分流,出现一系列代谢紊乱,引起大脑功能障碍,其临床表现为精神、神经异常如性格、行为异常进而烦躁、睡眠倒错、嗜睡、意识完全丧失或昏迷。为肝功能衰竭患者的严重并发症和死亡的重要原因之一。 相似文献