应用E2基因缺失的检测评价宫颈病变中HPV16感染状态

目的:应用E2基因缺失的检测了解宫颈病变中HPV16病毒染色体的存在状态,探讨其与宫颈癌的关系.方法:应用多重聚合酶链反应(PCR)对HPV16感染标本将其E2基因的C端、N端、铰链区分别与E6基因同时进行扩增,应用Scion Image 4.0软件对E2基因、E6基因电泳条带面积灰度值进行半定量分析,判定HPV16是...     

宫颈癌免疫治疗的耐药机制及应对措施

宫颈癌严重威胁全球女性的生命健康，晚期宫颈癌治疗手段有限，5年生存率不到20%，是妇科肿瘤的巨大挑战。免疫治疗是晚期宫颈癌患者的重要治疗手段之一，包括免疫检查点抑制剂、治疗性疫苗和过继性T细胞免疫疗法等，但免疫治疗耐药性使部分患者无应答而效果不佳。因此，迫切需要深入研究和探讨免疫耐药的机制从而改善耐药，现归纳总结了近年有关宫颈癌中免疫耐药机制的相关研究，主要分为肿瘤内在因素和外在免疫环境改变等因素，并介绍针对免疫耐药提出的应对措施及进展。     

化香树果序乙醇提取物诱导CNE1、CNE2细胞发生methuosis死亡的机制

目的 探讨化香树果序乙醇提取物(PSZ)诱导鼻咽癌细胞CNE1、CNE2发生methuosis死亡的机制.方法 用1.0 mg/mL PSZ处理CNE1、CNE2细胞,观察细胞形态学变化,RT-qPCR、Western blotting检测PSZ干预后Rac1基因和蛋白表达水平.EHT 1864抑制两组细胞Rac1表达,观察化香树果序醇提物对CNE1、CNE2细胞的作用.结果 CNE1、CNE2细胞经PSZ处理后,细胞质出现大量空泡,空泡相互融合,不断增大,最后细胞膜破裂,细胞核没有发生明显的变化,这种形态学改变符合methuosis细胞死亡方式,Rac1在基因和蛋白水平表达均增加.EHT 1864抑制细胞Rac1表达后,PSZ引起的methuosis死亡现象消失.结论 Rac1是PSZ诱导人鼻咽癌细胞CNE1、CNE2发生methuosis死亡的关键靶点.     

补阳还五汤对内皮型eNOS启动子活性的影响

目的:研究补阳还五汤含药血清对人内皮型一氧化氮合酶(eNOS)启动子活性的影响。方法:基因亚克隆方法构建pGL2 eNOS和pEGFP- 1 -eNOS质粒载体;应用jetPEITM转染内皮细胞ECV304,分别用HTS7000生化分析仪和荧光显微镜观察报告基因的表达。结果:含补阳还五汤及黄芪的血清均能增强 pEGFP -1- eNOS转染的内皮细胞的绿色荧光蛋白的表达,并能增强转染 pGL2- eNOS荧光素酶的表达。结论:补阳还五汤和黄芪可能通过增强内皮型eNOS启动子的活性、延缓内皮功能障碍的发生以防治动脉粥样硬化。     

大黄(虫)虫丸抗实验性肝纤维化的功效组分研究

目的 观察大黄虫丸各功效组分对大鼠实验性肝纤维化的作用.方法 建立肝纤维化大鼠模型.全自动生化分析仪测定ALT、AST、TP、ALB,放免法测定HA、LN、 CⅣ、PCⅢ,光镜下观察肝组织形态学及胶原纤维增生情况.结果 各功效组分均能一定程度上改善肝功能及降低肝纤维化血清指标(P <0.01或P <0.05),光镜下可见各药物组肝纤维化程度与模型组相比差异显著(P<0.05).其中活血化淤组在降低ALT、AST及肝纤维血清指标方面效果较好,而滋阴养血组能更有效地升高TP及ALB.结论 大黄虫丸各功效组分均有一定的抗肝纤维化作用,其中活血化淤组作用更为明显.     

大黄虫丸对肝纤维化大鼠肝卵圆细胞的作用及其对TIMP-1、CTGF和Notch1表达的影响

目的:观察肝卵圆细胞活化在大黄虫丸防治实验性大鼠肝纤维化中的作用。方法:应用二甲基亚硝胺复制大鼠肝纤维化模型,给以大黄虫丸高、中、低剂量组干预,Mallory染色观察肝纤维化水平,放免法检测血清肝纤维化指标,免疫组化观察肝卵圆细胞活化水平,荧光定量PCR法检测TIMP-1、CTGF和Notch1表达。结果:模型组肝纤维化水平显著升高,大黄虫丸显著降低血清HA、PCⅢ、LN水平,减少HOC活化数量,降低TIMP-1、CTGF和Notch1表达,大黄虫丸抑制HOC活化水平与降低肝纤维化水平呈正相关。结论:大黄虫丸通过抑制TIMP-1、CTGF通路,减轻肝纤维化;通过抑制Notch1表达,减少HOC活化,其防治肝纤维化的作用可能与减少HOC活化相关。     

硫利达嗪诱导SW480细胞凋亡的机制

目的研究硫利达嗪对结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响。方法应用5~30 μmol/L硫利达嗪处理SW480细胞,MTT
法检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342 细胞核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期;
RT-qPCR分析PDCD4、c-MYC、BCL2、CCND1、CASPASE3、PARP1、CDK4、EIF4A基因表达水平;Western blotting 检测AKT、
p-AKT、PDCD4蛋白表达水平。结果MTT结果表明硫利达嗪抑制SW480细胞的增殖,硫利达嗪处理细胞后出现核固缩、染色
质凝集和核碎片化等典型的细胞凋亡特征;流式检测表明硫利达嗪诱导G0/G1期阻滞,细胞凋亡增加。RT-PCR结果表明硫利达
嗪处理细胞后PDCD4表达上调,CCND1、CDK4、c-MYC、BCL2、CASPASE3、PARP1和EIF4A表达下调。免疫印迹分析结果显
示PDCD4蛋白表达上调,p-AKT蛋白表达下调。结论硫利达嗪能够抑制人结肠癌SW480细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制
可能与抑制PI3K/AKT信号通路导致PDCD4表达水平升高有关。
     

妇科恶性肿瘤住院患者的构成特点及变化趋势

[目的]了解武汉大学中南医院1995～2009年间妇科恶性肿瘤住院患者的构成特点及变化趋势。[方法]对武汉大学中南医院2751例妇科恶性肿瘤住院患者的临床及病理资料进行回顾性分析。[结果]①各类妇科恶性肿瘤住院人数呈上升趋势,构成比前4位依次为宫颈癌、卵巢恶性肿瘤、子宫内膜癌和恶性滋养细胞肿瘤。其中宫颈癌患者比例呈上升趋势（P=0.001）;卵巢恶性肿瘤、子宫内膜癌和恶性滋养细胞肿瘤比例呈下降趋势（P=0.014,P=0.009,P=0.001）。②宫颈癌发病年轻化,35岁以下宫颈癌患者增加。③各类妇科恶性肿瘤地域分布无变化,宫颈癌患者主要集中于农村地区,卵巢恶性肿瘤、子宫内膜癌、外阴阴道恶性肿瘤、子宫肉瘤患者大多集中于城镇。④妇科恶性肿瘤患者就诊时大多处于早期（Ⅰ、Ⅱ期）,但卵巢恶性肿瘤患者多为中晚期（Ⅲ、Ⅳ期）。⑤各类妇科恶性肿瘤的病理组织学类型分布各时期无统计学差异。[结论]妇科恶性肿瘤住院患者人数呈持续增加趋势,且住院患者以早期为主。     

人乳头瘤病毒16型转化基因在不同阶段宫颈上皮病变组织中的分布及基因变异特点

目的 研究人乳头瘤病毒(HPV)16 E6、E7和E5基因在湖北地区不同阶段宫颈上皮病变患者组织中的分布以及E6、E7基闪的变异特点.方法 从124例宫颈癌、17例宫颈上皮内瘤变(CIN) Ⅰ+CINⅡ级、23例CIN Ⅲ级和36例慢性宫颈炎患者活检或手术切除标本中提取组织DNA,用HPV16 E6、E7和E5特异性引物进行PCR扩增,对部分扩增的 E6 和 E7 产物片段进行测序分析.结果 在官颈炎、CIN Ⅰ+CINⅡ级、CINⅢ级和宫颈癌组织中,E6基因的阳性率分别为25.0%、29.4%、60.9%和76.6%;E7基因的阳性率分别为16.7%、41.2%、43.5%和61.3%:E5 基因的阳性率分别为5.6%、5.9%、30.4%和40.3%.E6、E7和E5基因在不同阶段宫颈上皮病变组织中的阳性率差异均有统计学意义(均P<0.01).在80例官颈癌测序组织中,有47例发生E6基因178位点的T→C突变,突变率为58.8%,相应氨基酸由天冬氨酸(Asp)改变为谷氨酸(Glu);而在20例宫颈炎和22例CINⅠ～Ⅲ级测序组织中,E6基因178位点的突变率分别为25.0%和31.8%.在30例宫颈癌测序组织中,有21例发生E7基因647位点的A-G突变,突变率为70.0%,相应氨基酸由天冬酰胺(Asn)改变为丝氨酸(Ser);而在20例宫颈炎和22例CINⅠ～Ⅲ级测序组织中,E7基因647位点的突变率分别为35.0%和40.9%.结论 HPV16 E6、E7和E5基因与宫颈癌的发生和发展有高度的相关性.但E5基因在不同阶段官颈上皮病变中可能存在不同程度的缺失.中国湖北地区流行的HPV16病毒株可能为HPV16亚洲型变异株.