Demethylation of the γ-synuclein gene CpG island in colorectal cancer and its clinical significance

Objective To explore the relationship between γ-synuclein gene expression and CpG island demethylation in colorectal cancer (CRC), and the relationship between the demethylation and clinicopathological factors of CRC. Methods The expression of γ-synuclein mRNA was examined in 30 pairs of tumor tissues and tumor-matched non-neoplastic adjacent tissues (NNAT) by RT-PCR.CRC cell lines including COLO205, LoVo, and SW480 were used and treated with a demethylating agent, 5-aza-2'-deoxycytidine (5-aza-C). Before and after the treatment, the expression of γ-synuclein mRNA in the cells was determined by RT-PCR, and bisulfite sequencing PCR was also used to analyze methylation status of CpG island. The methylation status of γ-synuclein was then examined in 67 CRC samples and 30 NNAT samples by nested methylation-specific PCR (NMSP) and real time methylationspecific PCR (real-time MSP). The relationship between the demethylation of γ-synuclein in CRC and clinicopathological factors was analyzed. Results The mean γ-synuclein mRNA expression was 0.66±0.34 in CRC samples, which was much higher than 0.45±0.26 in NNAT samples (P=0.011). 5-aza-C could induce expression and demethylation of γ-synuclein in COLO205, LoVo and SW480 cells. Γ-Synuclein gene was demethylated in 80.0%(24/30) of the CRC samples and 50.0%(15/30) of the NNAT samples.The demethylated status of γ-synuclein was much higher in CRC samples than that in NNAT samples (P=0.030), and was significantly correlated with clinical stage, lymph node involvement, and distant metastasis of CRC (P＜0.05). Conclusion The upregulation of γ-synuclein expression in CRC is primarily attributed to the demethylation of CpG island, which may be used as a marker for prognosis.     

Wnt信号通路靶基因GS mRNA及蛋白在胃癌中的表达

目的: 探讨Wnt信号通路的靶基因GS mRNA及蛋白在胃癌中的表达及其临床意义.方法: 荧光实时定量PCR(FQ-PCR)检测52例胃癌组织及癌旁正常组织GS mRNA表达;免疫组织化学技术(SP法)检测97例胃癌组织、30例癌旁正常组织及10例肠化生组织中GS蛋白表达水平差异.结果: 癌组织和癌旁正常组织GS mRNA表达有显著差异(25.508±5.090 vs 13.001±2.040,P<0.05). 癌组织GS蛋白表达与组织学类型、Lauren分型及淋巴结转移密切相关(χ2= 26.994,54.929,5.173,均P<0.05),与肿瘤大小、TNM分期、远处转移及患者的性别和年龄等无明显相关.结论: GS mRNA和蛋白高表达同胃癌生物学行为密切相关,可能与胃癌的发生、发展及预后有关.     

胆结石病人肝脏核受体LRH-1及其调控基因表达的研究

目的 研究胆囊胆固醇结石病人肝脏的肝脏受体类似物1(Liver receptor homolog 1,LRH-1)及其调控的三磷酸腺苷结合盒(ABC)转运体家族成员abcg5/8的表达,探讨胆固醇结石病发病的机制.方法 27例胆囊胆固醇结石病人,男6例,女21例;年龄平均52岁.10例无胆石症的胆囊息肉病人为对照,男6例,女4例;平均年龄48岁.测定胆汁脂类成分和计算胆汁胆固醇饱和指数.实时定量PCR法测定肝脏LRH-1及abcg5/8 mRNA的表达量.结果 胆石组LRH-1表达高于对照组(14.18±1.80vs7.22±2.22,P<0.05),胆石组肝脏abcg基因mRNA表达量均较对照组增高(abcg5:49.34±3.68 vs 33.48±2.77,P<0.05)abcg8:38.93±5.70 vs 18.70±3.42,P<0.05).胆石组胆汁呈胆固醇过饱和(1.17±0.02).结论 该研究结果提示人类肝脏LRH-1及其调控的abcg5/8的表达增高与胆囊胆固醇结石形成有关.     

FRZB基因在胃癌组织中的表达和胃癌细胞内定位及其意义

目的研究FRZB基因在胃癌中的表达和在细胞内的定位及其意义。方法通过免疫组织化学（免疫组化）链霉菌抗生物素蛋白．过氧化酶连接法（SP法）对90例胃癌组织及正常胃黏膜组织FRZB基因的表达进行分析。通过定量PCR和Western印迹检测胃癌细胞株和胃上皮细胞株GES-1的FRZB表达，并用免疫荧光技术对FRZB的细胞内定位进行研究。结果FRZB在胃癌中的表达高于正常胃黏膜，在胃癌组织中，FRZB表达阳性率为92．2％，而正常胃黏膜中除了1例（10．0％）为弱阳性表达外，其余均为阴性。FRZB在胃癌组织中的表达与分化程度（P=0．220）和Lauren分型（P〈0．01）相关，与其他的临床病理参数不相关。免疫荧光和Western印迹结果显示，FRZB在细胞核和细胞质中均有表达。定量PER结果显示，在胃癌细胞株中FRZB表达高于GES-1。结论FRZB与胃癌的分化和肠型及弥漫型的发生相关，FRZB在细胞核的定位可能与其在胃癌中的作用相关。     

STK15和ki67基因在胃癌组织中的表达研究

目的研究丝氨酸/苏氨酸激酶15(STK15)基因在胃癌组织中的表达,及其与临床病理指标以及ki67表达的关系。方法采用免疫组化检测STK15和ki67在89例胃癌组织中的表达。结果STK15在胃癌组织中的表达阳性率为34.83%(31/89),显著高于邻近的非癌组织的4.49%(12/89)(P<0.01);STK15基因过表达与分化型胃癌及其侵润深度密切相关(P<0.05),而与ki67的表达无相关性。结论STK15基因可能在胃癌发生、发展中起相应作用,其过表达程度可作为胃癌的某些生物学行为新的判定指标。     

线粒体途径在温热化疗诱导胃癌细胞AGS凋亡中的作用

目的 探讨线粒体途径在温热化疗诱导胃癌细胞AGS凋亡中的作用.方法 应用人胃癌细胞株AGS,根据不同实验处理分为常温对照(NT)、单纯温热(HT)、常温化疗(NTCT)和温热化疗(HTCT)四组.Western blotting法检测AGS细胞中Bax、Bcl-2蛋白及其线粒体胞质蛋白中细胞色素C的表达,实时PCR检测其Bax、Bcl-2的mRNA表达;分别测定各组AGS细胞Caspase 3和Caspase 9的酶活性变化.结果 与NT、HT、NTCT组比较,HTCT组AGS细胞Bcl-2蛋白表达下调而Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2显著上升;线粒体胞质蛋白中细胞色素C表达增加;Caspase 9和Caspase 3的酶活性显著增高.结论 HTCT可引起AGS细胞Bcl-2、Bax基因和蛋白表达水平发生改变,促使其细胞色素C由线粒体释放进入细胞质,从而诱导细胞凋亡.     

新疆维吾尔族ABCG8和NPC1L1基因多态性与胆囊结石病的关系

目的:研究新疆维吾尔族ATP结合盒G8(ABCG8)基因和尼曼-匹克C1样1蛋白(NPC1L1)基因单核苷酸多态性与胆囊结石病的关系。方法:采集43例新疆维吾尔族胆囊结石病人和96例无胆结石对照病人的外周静脉血,提取基因组DNA。用实时定量PCR的等位基因分型法确定ABCG8基因T400K、Y54C、D19H和NPC1L1基因-762 TC、1679 CG的基因型。结果:在所有病人中,NPC1L1基因1679 G在胆石组与对照组中的分布无统计学差异(32.6%比26.6%,P=0.306);但在女性胆石组中,1679 G频率明显高于对照组(36.7%比19.4%,P0.05)。NPC1L1基因-762 TC位点以及ABCG8基因3个位点在两组间的分布无差异。结论:携带NPC1L1基因1679 G等位基因可能与新疆维吾尔族女性胆石病发病存在相关性。     

抑制polo-like kinase-1基因表达对5-氟脲嘧啶及顺铂体外诱导胃癌细胞凋亡的影响

目的观察抑制polo-like kinase-1(Plk-1)基因对5-氟脲嘧啶(5-Fu)及顺铂(CDDP)体外诱导胃癌细胞株-MKN45凋亡的影响。方法小片断干扰RNA(siRNA)阻断MKN45细胞Plk-1 基因的表达;定量PCR及Western blot检测Plk-1表达的变化;MTT法检测MKN45细胞增殖速率;流式细胞仪检测MKN45细胞凋亡率。结果经靶向Plk-1的siRNA作用24 h、48 h及72 h后,Plk-1 mRNA水平分别下降了51．91％、89．45％、91．03％,蛋白水平在48 h及72 h分别降低了38．43％和 60．66％;联合应用5-Fu、CDDP与靶向Plk-1 siRNA组的MKN45细胞增殖速率较单用5-Fu、CDDP或靶向Plk-1 siRNA组明显减慢(P<0．05);在48 h及72 h细胞凋亡率明显上升(P<0．05)。结论 Plk-1基因表达抑制在体外可增强5-Fu及CDDP对MKN45细胞的凋亡诱导作用;联合应用靶向Plk-1 的siRNA有可能提高5-Fu及CDDP对胃癌细胞杀伤作用。     

氯喹在小鼠肝脏热缺血-再灌注损伤中的保护作用

目的:研究氯喹对小鼠肝脏热缺血-再灌注损伤的保护作用,并探讨相关机制。方法:Balb/c小鼠建立肝脏部分热缺血-再灌注模型。氯喹组给予氯喹预处理,对照组给予等体积生理盐水。肝脏再灌注1、6、24 h后检测血清谷氨酸转氨酶(ALT)水平,HE染色检测肝脏病理学变化,荧光定量PCR检测炎症因子TNF-α和IL-6 m RNA水平,Western印迹检测肝脏TLR4及HMGB1表达。结果 :与对照组相比,氯喹组再灌注1、6、24 h血清ALT显著下降(P<0.05);肝细胞变性坏死、炎性细胞浸润显著减轻(P<0.01);血清TNF-α、IL-6含量显著降低(P     

胆固醇息肉病人胆囊黏膜ABCG1表达的研究

目的:探讨ABCG1基因在胆囊黏膜中的表达与胆固醇息肉病的关系。方法:采集15例胆囊胆固醇息肉病病人和8例无息肉无结石之对照组的胆囊黏膜和胆汁。测定胆汁胆固醇、胆汁酸和磷脂含量;real-time PCR测定胆囊黏膜中ABCG1 mRNA的表达;Western印迹法检测胆囊黏膜ABCG1之蛋白表达。结果:胆固醇息肉组胆汁胆固醇饱和指数、ABCG1mRNA表达均较对照组升高(P<0.05);息肉组中胆囊黏膜ABCG1在蛋白水平较对照组同样存在高表达。结论:胆固醇息肉病人之胆囊黏膜ABCG1基因及蛋白高表达,可能在胆固醇息肉疾病的发生、发展中起一定作用。