半乳糖受体介导的拉米夫定肝细胞导向作用的体内外研究

探讨修饰后拉米夫定（lamivudine，LA）对乙型肝炎病毒（HBV）的抑制作用及肝细胞的靶向性。以半乳糖苷为载体，构建十六酸拉米夫定酯固体脂质纳米粒（LAP-GSLN），将其导入2.2.15细胞，用免疫荧光法及ELISA观察2.2.15细胞内HbeAg及用免疫定量PCR检测细胞培养上清中HBV DNA；将LAP-GSLN经尾静脉注入小鼠体内，用RP-HPLC测定LA在血清、肝、肾、肺及脾中的分布。结果显示，LA及LAP-GSLN对2.2.15细胞HbeAg的表达和对HBV-DNA的复制均有抑制作用；LAP-GSLN组肝脏的含药量为LA组的3.3倍。表明LAP-GSLN能有效地抑制HbeAg表达和HBV DNA的复制，在体内具有明显靶向性。     

肾综合征出血热患者B淋巴母细胞系的建立方法及意义

目的 :探讨EB病毒 (EBV)转化B淋巴细胞的最佳方法 ,为进一步研究肾综合征出血热 (HFRS)患者的细胞免疫功能奠定基础。　方法 :采用环孢素A(CsA)法、微量全血法和冻存全血法三种方法建立B淋巴母细胞样细胞系 (B LCL) ,比较建立细胞系成功率和所用时间。　结果 :EBV成功转化后的B LCL ,其体积增大并永生化 ,进而增生的淋巴细胞积聚成团。CsA法、微量全血法和冻存全血法转化的成功率分别为 73.3%、2 6 .7%和 4 6 .7%。　结论 :CsA法成功率高 ,建立细胞系所用时间短 ,是建立B LCL的最佳选择。     

Construction and expression of the bicistronic expression vector with RANTES and SDF-1 genes

Objective: To construct bicistronic expression vector with RANTES and SDF-1 genes, the ligands of HIV-1 principal coreceptors, and identify its expression. Methods: RANTES-KDEL was amplified from plasmid pCMV-R-Kby PCR and cloned into eukaryotic expression vector pCMV-S/K. Gene transfection into HeLa cells was carried out by lipofectin. Indirect immumofluorescence and radioimmunoprecipitation were used to confirm the expression of RANTES and SDF-1. Results:The construction of pCMV-R-K-S-K was confirmed by enzymatic digestion and sequencing.RANTES and SDF-1 were shown expressed in HeLa cells by indirect immumofluorescence and radioimmunoprecipitation. Conclusion: pCMV-R-K-S-K was constructed and expressed in cell line Hela successfully, which will contribute to further study of gene therapy of AIDS by HIV-1 coreceptors knockout.     

新医改究竟能够走多远——写在新医改政策公布一年之际

去年的4月6日,历经3年的酝酿,3年的争论,3年的反复,加上3年的规划,翘首期待的新医改方案终于出台。方案的一个目标、四大体系、八大环节、五件大事,如久旱甘露恰逢其时,人们梦想着三座大山终于要搬掉一座,各类媒体的欢呼声不绝于耳。然而,时至今日,3年规划已过1年有余,改革的情况到底如何？     

双位点核酶细胞内抑制乙型肝炎病毒基因表达的初步研究

构建针对乙型肝炎病毒Ｃ区基因的双位点核酶的真核表达载体,以观察核酶在细胞内对ＨＢＶ基因表达的抑制作用。结论该双位点核酶可能通过针对ＨＢＶＣ区基因的剪切作用,阻断Ｃ区基因的表达,抑制ＨＢｅＡｇ的合成。     

丙型肝炎病毒cDNA与荧光素酶融合基因可调控逆转录病毒载体的构建

目的 构建丙型肝炎病毒(HCV)cDNA与荧光素酶(Luc)融合基因可调控逆转录病毒载体,以建立容易检测的HCV体外细胞模型。方法 利用基因重组技术,将HCV5’非编码区(5’NCR)和/或核心(C)区基因克隆于pGEM-Luc-DNA载体,使其与Luc基因相融合,然后再将融合基因插入可调控逆转录病毒载体(PBPSTR1)。结果pCEM-HCVl和pBPSTRl-HCV经酶切鉴定,HCV5’NCR和/或C区cDNA已与Luc基因融合,并被克隆于pBPSTRl。结论 通过体外分子克隆技术可使HCV基因cDNA带上Luc报告基因,并可克隆于逆转录病毒载体,为建立易检测的HCV细胞模型和进一步抗病毒基因治疗以及药物的筛选奠定了基础。     

腺病毒介导核酶对细胞内HBV基因表达的抑制作用

目的观察针对HBV(乙型肝炎病毒)C区双位点核酶在细胞内阻断C区基因表达的作用。方法采用亚克隆技术,从pGEM—Rz123(含针对HBV C区双位点核酶)上切下双位点核酶的片段,定向克隆于腺病毒表达载体pAd-CMV中。利用Lipofectamine2000介导,将重组病毒pAdCMV—Rz及pAdCMV—laz感染2.2.15细胞中,采用打点杂交技术观察核酶的表达,采用ELISA(酶联免疫)、免疫荧光、共聚焦定量、图象分析法、Western blot分析Hbe/HBcAg的表达。结果感染的2.2.15细胞2周后,打点杂交证实可表达针对HBV C区双位点核酶。ELISA方法检测发现核酶抑制HBeAg表达68.6％,用免疫荧光、免疫组化、图象分析法、Western blot分析证实核酶可抑制HBV细胞内表达。结论该双位点核酶通过针对HBV C区基因的剪切作用,阻断C区基因表达,抑制了HBe/HBcAg的表达。     

丙型肝炎病毒核心基因免疫研究

目的研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心（Ｃ）基因免疫用于预防和治疗ＨＣＶ感染的可行性和有效性．方法将ＨＣＶＣ基因片段插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３质粒ＣＭＶ启动子的下游，在证实其可以在小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０（Ｈ２ｄ）中表达之后，将重组质粒注射ＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ２ｄ）小鼠股四头肌，ＥＬＩＳＡ检测血清中抗体产生水平；３ＨＴｄＲ掺入法测定免疫小鼠淋巴细胞ＨＣＶＣ抗原特异性增殖能力，４ｈ５１Ｃｒ释放法检测免疫小鼠细胞毒Ｔ细胞（ＣＴＬｓ）体外杀伤功能．结果免疫小鼠２０只，初次免疫２ｗｋ后，血清中均出现了ＨＣＶＣ抗体，且增加免疫剂量可提高抗体滴度；淋巴细胞增殖指数为６１０，明显高于对照组（Ｐ＜００１），ＣＴＬｓ体外特异性杀伤率为６３１％，也高于对照组（Ｐ＜００１）．结论ＨＣＶＣ基因免疫不仅可以诱导机体产生特异性的体液免疫，而且产生特异性的细胞免疫，它可能是防治ＨＣＶ的有效方法．