ASIC3-shRNA干扰慢病毒质粒的构建及其效率的鉴定

目的: 构建酸敏感离子通道3(acid sensing ion channels 3, ASIC3)干扰慢病毒质粒并进行效率鉴定。方法: 利用GenBank获取ASIC3基因序列并合成相应干扰序列,通过T4 DNA连接酶将ASIC3基因片段连接至环状Plko.1 Puro载体,将重组质粒转染293T细胞获取慢病毒,用实时荧光定量PCR(qRT PCR)检测病毒滴度;将包装之后的慢病毒感染PC12、BV2、N2a细胞,分别分为ASIC3 shRNA组和EGFP shRNA组(阴性对照),经慢病毒感染后用qRT PCR和免疫印迹技术分别检测ASIC3 mRNA和蛋白表达。结果： 合成的ASIC3干扰序列成功连接至Plko.1 Puro载体;qRT PCR及DNA测序鉴定结果证实,ASIC3 shRNA质粒构建成功;qRT PCR与免疫印迹结果表明,在PC12、BV2、N2a细胞中,与EGFP shRNA组相比,ASIC3 shRNA组ASIC3 mRNA和蛋白表达量均明显下调(P＜0.05)。病毒滴度约为1×109 IU/mL。 结论： ASIC3 shRNA干扰慢病毒质粒构建成功。     

干扰苹果酸酶3对人脑胶质瘤细胞线粒体分裂与融合的影响

［摘要］目的: 研究苹果酸酶3(malic enzyme 3, ME3)对人脑胶质瘤细胞线粒体分裂与融合的影响。方法: 将干扰质粒sh-ME3或对照质粒sh-EGFP转染到人脑胶质瘤LN229细胞中,用实时定量PCR、蛋白质印迹法检测干扰效率。蛋白质印迹法检测线粒体的融合与分裂指标及细胞凋亡相关蛋白;用荧光探针检测线粒体膜电位。结果： 与对照组相比,实验组ME3的 mRNA表达水平下降了76%（t= 20.16,P<0.01）,蛋白表达也相应减少。转染干扰质粒sh-ME3后,线粒体分裂相关的线粒体分裂蛋白1(mitochondrial fission 1 protein,Fis-1)和动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1, DRP1)表达增高,而线粒体融合相关的线粒体融合蛋白1(mitofusin 1, Mfn1)、线粒体融合蛋白2(mitofusin 2, Mfn2)、视神经萎缩症蛋白1(optic atrophy 1, OPA1)表达降低;线粒体膜电位降低;细胞凋亡相关的水解型半胱氨酸蛋白酶(cleaved caspase-3)表达增加,而B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）表达降低。结论： 干扰ME3促进了胶质瘤细胞线粒体的分裂,抑制了其融合,降低了膜电位,从而引起细胞凋亡。
     

低氧诱导胰腺癌细胞通过外泌体途径分泌高迁移率族蛋白1

目的: 研究低氧诱导条件下胰腺癌细胞中高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1 protein,HMGB1)的分泌途径。方法: 经GEO和TCGA数据库分析HMGB1在胰腺癌样本中的表达;低氧处理胰腺癌PaTu8988细胞0,6,12,24,48 h,免疫印迹法检测培养上清液中HMGB1的含量;采用外泌体提取试剂盒分离常氧和低氧培养液中的外泌体,运用透射电镜观察外泌体膜结构,运用免疫印迹法检测外泌体中的HMGB1以及外泌体标志蛋白CD9、CD63、CD81以及HSP70的表达;利用免疫荧光法和激光扫描共聚焦显微镜观察HMGB1在PaTu8988细胞中的定位情况。结果： 数据库分析结果表明,与健康胰腺组织相比,HMGB1在胰腺癌组织中呈高表达(P<0.01),且高表达者生存期明显短于低表达者(P<0.05)。低氧处理48 h,细胞培养上清液中的HMGB1含量最多,明显高于6,12,24 h。透射电镜观察到培养上清液中有微囊泡结构,直径在100 nm左右,蛋白质免疫印迹法检测到外泌体膜标志蛋白CD9,CD63,CD81,HSP70的表达和外泌体中HMGB1的表达。免疫荧光结果显示,低氧情况下HMGB1和外泌体共定位增多。 结论： 低氧处理条件下,胰腺癌细胞中HMGB1可通过外泌体途径释放到细胞外。     

浅谈妇产科门诊医疗服务中的医患交流

为适应医学发展的需要，良好的医患交流在门诊医疗服务过程中的作用越来越被人们所认识，它能使医务人员为患者提供的技术性服务和功能性服务有机地结合起来，取得最佳效果——患者满意。[第一段]     

几种丝素材料细胞毒性的实验研究

目的：研究不同交联方式的再生丝素膜(WL组，SD组，HY组)的细胞毒性及其影响细胞增殖的因素。方法：采用浸提液法，体外培养鼠胚真皮层纤维细胞，用MTT法检测细胞增殖活力和计算相对增殖率。结果：WL组，SD组再生丝素膜细胞毒性小于1级，有较强的增殖活力；HY组再生丝素细胞毒性0～2级；而用高浓度环氧交联剂交联的再生丝素膜对细胞生长有一定抑制作用；且随着环氧交联剂浓度的增加，细胞毒性增大。结论：WL组和SD组再生丝素膜无细胞毒性，HY组再生丝素膜无明显的细胞毒性，高浓度环氧剂交联的再生丝素膜对细胞有一定的毒性，有待于进一步改性。     

再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞遗传特性的影响

目的 :研究再生丝素膜 (WL组 ,HY组 ,SD组 )对大鼠鼠胚成纤维细胞的遗传物质的影响。方法 :采用浸提液法在体外培养鼠胚成纤维细胞 ,计算细胞的微核率 (MNF)和染色体畸变率 (CAF) ,用单细胞电泳法 (SCGEassay)检测基因组DNA的损伤程度。结果 :WL组、SD组再生丝素膜和空白对照组的细胞微核率 (MNF)和染色体畸变率(CAF)无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,无明显彗星现象 ;而HY组再生丝素膜与阴性对照比较有显著差异 (P <0 0 1)。结论 :WL组和SD组再生丝素膜对种子细胞的遗传学特性无明显影响 ,优于HY组。     

新疆维吾尔自治区四市医养结合调研分析

目的　通过对新疆四个试点城市医养结合发展现状进行调研,以实际运营中的问题为导向,为相关管理部门在推进医养结合工作进程、制定出台导向性政策方面提供实践依据。方法　本研究采用实地调研、座谈及访谈法,于2017-05-03至2017-06-16对乌鲁木齐市、昌吉市、克拉玛依市及库尔勒市卫生与计划生育委员会（卫计委）、医养结合养老服务机构、失能和半失能老年人家庭进行现场调研。调研内容为四个城市的老龄人口基数、医养结合机构主要运营模式、发展现状及存在的主要问题。结果　四个城市中总人口数、医疗卫生机构、卫生技术人员、编制床位数、60岁以上人口数前三位依次为乌鲁木齐市、昌吉市、库尔勒市,60岁以上人口占户籍人口比例前三位依次为乌鲁木齐市、克拉玛依市、昌吉市,养老机构床位数前三位依次为昌吉市、乌鲁木齐市、库尔勒市,每千老年人口养老床位数前三位依次为库尔勒市、昌吉市、克拉玛依市。乌鲁木齐市养老机构数108个,养老机构形式以社会福利院为主;昌吉市养老机构数443个,养老机构形式以农村互助院为主;克拉玛依市养老机构数82个,养老机构形式以社区日间照料中心为主;库尔勒市养老机构数242个,养老机构形式以农村互助院为主。调研结果显示,四个城市结合自身实际情况,不同程度开展了各类医养结合项目,但是还存在医养结合相关政策有待制定、试点有待推进、落实有待加强的问题;不同医养结合模式运营过程中仍存在一些难以解决的具体问题,如基层全科医师及专业老年医疗、护理人才短缺等问题。结论　四个城市因人口老龄化现状不同、各管理部门协作、人才短缺等因素制约,医养结合工作的开展受到一定限制。各地政府应该充分发挥主导作用,合理配置资源;基层社区要依托社区卫生服务中心为老年人提供基本医疗康复服务;各部门应立足本行业,协调配合相关部门,加大对试点城市政策探索和资金投入力度。     

大鼠鼻黏膜外胚层间充质干细胞向成骨细胞和神经元的诱导分化

目的:建立鼻黏膜外胚层间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,ECTO-MSCs)的体外培养方法,探讨该细胞的干细胞特性(stemness)和分化潜能.方法:在观察ECTO-MSCs在大鼠鼻腔呼吸黏膜内分布特征的基础上,体外培养扩增ECTO-MSCs,并用干细胞标志蛋白巢蛋白、CD133、C...     

干扰Hmgb3表达对肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的 构建针对Hmgb3的shRNA诱导型慢病毒,检测诱导稳定感染细胞株干扰序列的干扰效率及其对A549细胞增殖的影响。方法 设计Hmgb3 及对照GFP shRNA序列,装入Tet-pLKO-puro质粒,进行慢病毒包装,感染A549细胞,嘌呤霉素筛选稳定株,筛选最佳诱导浓度并诱导干扰序列表达, Western blot检测干扰效率,MTT实验检测其对A549细胞增殖的影响。结果 构建的Hmgb3shRNA慢病毒稳定细胞株诱导后可显著抑制Hmgb3的表达,干扰效率达73%（P<0.05）,而对照组无明显干扰效果（P=0.721）,对照组的增殖率为94%,实验组的增殖率下降为46%（P<0.05）。结论 成功构建了针对Hmgb3的shRNA诱导型慢病毒,并有效沉默A549细胞靶基因,干扰Hmgb3对肺癌细胞的增殖有一定的抑制作用。     

长链非编码RNA aHIF和ANRIL在胃癌中的表达

［摘要］目的: 探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)中的反义缺氧诱导因子(antisense hypoxia inducible factor,aHIF)和位于细胞周期激酶抑制因子4(INK4)基因座中反义非编码RNA(antisense noncoding RNA in the INK4 locus,ANRIL)在胃癌组织与血浆中的表达。方法: 收集20例胃癌患者癌组织及对应的癌旁组织、33例胃癌患者和20例健康者血浆,采用实时荧光定量PCR测定胃癌组织和血浆中lncRNA aHIF和ANRIL的表达水平,分析lncRNA aHIF、ANRIL在血浆中的表达与胃癌组织表达的相关性。结果： 胃癌组织中lncRNA aHIF和ANRIL的表达水平均明显高于癌旁组织(t分别为-4.463,-4.886,P均<0.01);胃癌患者血浆中lncRNA aHIF和ANRIL的表达水平均明显高于健康者(t分别为-4.232,-4.450,P<0.01),且与胃癌组织中的表达水平呈正相关(r分别为0.536,0.524,P<0.05)。结论： lncRNA aHIF和ANRIL在胃癌组织和患者血浆中均高表达,且血浆与组织中的表达水平呈正相关。