ACSS2通过PI3K/AKT信号通路调控食管鳞癌细胞的顺铂敏感性

目的: 探讨乙酰辅酶A合成酶2（acetyl-CoA synthetase 2,ACSS2）表达对食管鳞癌细胞顺铂（cisplatin,DDP）敏感性的影响和可能机制。方法: 通过免疫组化和蛋白质印迹法检测40对食管鳞癌瘤体和癌旁组织中ACSS2蛋白的表达。蛋白质印迹法验证食管鳞癌细胞株TE-1、ECA-109和KY-SE150与正常食管鳞状细胞Het-1A中ACSS2的表达差异;利用脂质体转染siRNA-ACSS2或者慢病毒转染LV-ACSS2至TE-1细胞构建ACSS2下调或过表达细胞株;CCK8实验检测下调ACSS2对顺铂IC50值的改变;顺铂处理（5 μg/mL）前后,流式细胞术检测ACSS2干扰处理对TE-1细胞凋亡水平的影响;蛋白质印迹检测PI3K/AKT信号通路及凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3的表达。结果： 免疫组化及蛋白质印迹结果显示,食管鳞癌组织中ACSS2蛋白表达显著高于癌旁组织（P<0.001）,食管鳞癌细胞株中ACSS2表达水平明显高于正常鳞状上皮细胞Het-1A。CCK8结果显示siRNA-ACSS2处理显著下调TE-1细胞对顺铂的IC₅₀值（P值均<0.05）;流式细胞术结果证实,抑制ACSS2表达可显著上调食管鳞癌细胞凋亡率（P <0.01）;结合5 μg/mL顺铂处理,ACSS2干扰后TE-1细胞凋亡率明显上升（P值均<0.001）;蛋白质印迹结果表明,顺铂处理上调TE-1细胞中ACSS2及p-PI3K、p-AKT的表达;顺铂作用下,靶向抑制ACSS2后可见p-PI3K、p-AKT的显著降低而凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3表达量明显升高,过表达ACSS2在维持PI3K/AKT信号活化的同时可有效逆转cleaved-Caspase-3的形成。结论： ACSS2通过调控PI3K/AKT信号通路活化以及cleaved-Caspase-3表达参与食管鳞癌细胞顺铂敏感性调节。     

H2-calponin在食管鳞癌中的表达及意义

目的: 探讨H2 钙调理蛋白(H2 calponin)在食管鳞癌中的表达及意义。方法: 免疫组化技术检测30例食管鳞癌患者癌组织及癌旁组织芯片中H2 calponin的表达水平;体外培养人食管鳞癌ECA109、TE 1细胞株和正常食管上皮Het 1a细胞;荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测食管鳞癌细胞株中H2 calponin的表达;将食管鳞癌TE 1细胞分为空白对照组（常规培养）、阴性对照组（转染空载体siRNA）和H2 calponin siRNA组（转染H2 calponin siRNA）,采用蛋白质印迹法测定细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、E 钙黏蛋白(E cadherin),波形蛋白以及基质金属蛋白酶 2(MMP 2)、MMP 9、内皮生长因子 A(VEGF A)、血管内皮生长因子 C(VEGF C)蛋白的表达;ELISA法测定各组细胞培养上清液中MMP 2,MMP 9和VEGF C含量;荧光定量PCR检测NF κB通路抑制剂PDTC处理前（0 h）及处理后0.5, 1, 2, 4, 8, 12 h H2 calponin mRNA的表达;蛋白质印迹技术检测H2 calponin及NF κB通路蛋白的表达。结果： 免疫芯片结果显示,食管鳞癌组织中H2 calponin表达量低于癌旁组织, H2 calponin阳性表达率与食管鳞癌患者性别、年龄、肿瘤部位及病理分级之间无明显相关性(P均>0.05);荧光定量PCR和蛋白质印迹结果显示,食管鳞癌细胞中H2 calponin表达明显低于正常食管细胞(P<0.01);下调H2 calponin表达后,PCNA、E 钙黏蛋白和VEGF A表达无明显变化,而波形蛋白、MMP 2、MMP 9和VEGF C表达明显增加;ELISA结果显示,MMP 2、MMP 9和VEGF C分泌量明显增加(P<0.05);PDTC处理后可显著增加IκBα的蛋白表达进而恢复并上调H2 calponin的表达(P<0.01)。 结论： NF κB通路通过抑制H2 calponin表达保证波形蛋白,MMP 2,MMP 9,VEGF C持续表达,促进食管鳞癌细胞侵袭、转移发生。     

Wnt1诱导分泌蛋白-1通过NF-κB通路促进食管鳞癌细胞的增殖和侵袭转移

目的: 探讨Wnt1诱导分泌蛋白 1(Wnt1 induced secreted protein 1, WISP 1)在食管鳞癌细胞侵袭转移的作用机制。方法: 体外培养人食管鳞癌细胞株Eca109、TE 8和正常食管上皮细胞Het 1a,荧光定量PCR和蛋白质印迹检测WISP 1表达。将食管鳞癌细胞株Eca109和TE 8分为空白对照组、阴性对照组和WISP 1 siRNA组,利用CCK8法检测各组细胞增殖改变;流式细胞术分析不同处理组细胞凋亡率;Transwell实验检测细胞侵袭能力变化;蛋白质印迹法检测细胞中VEGF A,VEGF C,MMP2,MMP9以及NF κB通路相关蛋白的表达量;酶联免疫吸附法测定培养上清液中VEGF C和MMP9分泌量。结果： 荧光定量PCR和蛋白质印迹结果显示,食管鳞癌细胞中WISP 1表达量高于正常食管上皮细胞(P<0.01);CCK8和流式细胞术结果显示,下调WISP 1后,食管鳞癌细胞株增殖明显抑制（P<0.05）,凋亡率无明显影响;蛋白质印迹结果显示,下调WISP 1对VEGF A和MMP2 表达无明显影响,而VEGF C和MMP9表达明显得到抑制;酶联免疫吸附结果显示,VEGF C和MMP9分泌量随WISP 1下调也出现明显下降（P<0.05）;下调WISP 1后,食管鳞癌细胞株侵袭能力明显降低（P<0.01）;下调WISP 1表达显著抑制NF κB磷酸化并促进IκBα的磷酸化,抑制NF κB信号活化水平。 结论： WISP 1可通过NF κB通路,增加MMP9,VEGF C的表达和分泌,促进食管鳞癌细胞增殖及侵袭转移的能力。     

曲古抑菌素对小细胞肺癌细胞系NCI-H446的诱导分化及凋亡作用

目的探讨曲古抑菌素对NCI-H446细胞的诱导分化及凋亡的作用机制。方法用巢蛋白、CD133、波形蛋白和CD44的抗体对NCI-H446细胞进行免疫荧光染色,鉴定该细胞的干细胞特性;用NF-200、βⅢ-Tubulin、微管相关蛋白(MAP2)和BM88、Ki67的抗体进行免疫荧光染色和免疫印迹测定,观察NCI-H446细胞经曲古抑菌素诱导后向神经细胞分化的成熟程度和细胞增殖指数的变化;用Caspase-3、Bax、Bcl-2表达水平的变化,评价曲古抑菌素对小细胞肺癌的抗癌效果。结果小细胞肺癌NCI-H446细胞高表达巢蛋白、CD133、波形蛋白和CD44;曲古抑菌素诱导NCI-H446细胞向神经细胞分化并激活Caspase-3,诱导细胞的Bax表达水平增高,Bcl-2表达水平降低,细胞的增殖指数明显降低,凋亡指数明显增高。结论曲古抑菌素可诱导小细胞肺癌NCI-H446细胞分化成熟,最终激活Caspase-3通路导致细胞凋亡。     

大鼠角膜穿通伤后局部应用 IL-10抑制视网膜炎症和抗神经溃变的研究

目的：观察角膜穿通伤后局部应用 IL-10对视网膜炎症反应的抑制和对神经溃变的保护作用。方法：将清洁级成年雌性 SD 大鼠50只,随机分为对照组（8只）、损伤组和治疗组,后两组（每组21只）再分为损伤1 d、2 d 和3 d 组（每小组7只）。损伤组用无菌注射器刺穿眼球颞侧角膜缘角膜,制作角膜穿通伤模型。治疗组在角膜穿通伤后用 IL-10溶液滴眼。各组2只大鼠用于制作眼球切片,免疫荧光染色观察角膜穿通伤后炎症因子 IL-1β、IL-6和 TNF-α以及神经丝蛋白-200（neurofilament protein-200,NF-200）、血影蛋白（α-Ⅱspectrin）及钙蛋白酶2（m-calpain）在视网膜中的分布特征;另5只大鼠用于提取视网膜蛋白,采用免疫印迹法检测各组大鼠于角膜穿通伤24,48,72 h 后,视网膜组织内 NF-200和血影蛋白降解产物以及活性钙蛋白酶2相对含量的动态变化。结果：对照组视网膜结构层次清楚, IL-1β、IL-6、TNF-α和 m-calpain 免疫荧光很弱;血影蛋白和 NF-200免疫荧光染色可清晰显示阳性神经纤维;角膜穿通伤后,视网膜结构层次模糊,TNF-α、IL-1β,IL-6和 m-calpain 免疫荧光增强,主要分布在内层;NF-200和血影蛋白免疫荧光染色显示阳性神经纤维明显减少;IL-10治疗后,TNF-α、IL-1β,IL-6和 m-calpain 免疫荧光减弱,血影蛋白和 NF-200阳性神经纤维明显多于损伤组。免疫印迹检测结果表明,损伤组视网膜组织内大分子的 NF-200和血影蛋白含量逐渐减少,其小分子的降解产物以及小分子的活性 m-calpain 逐渐增加;在 IL-10治疗组,NF-200和血影蛋白的降解产物以及活性 m-calpain 的增加程度明显减轻。结论：角膜穿通伤可刺激视网膜细胞高表达炎症因子 IL-1β,IL-6和TNF-α,导致组织的炎症损伤,同时激活 m-calpain,后者降解视网膜细胞骨架蛋白 NF-200和血影蛋白,造成神经溃变;局部应用 IL-10可减轻炎症反应,抑制 m-calpain 对骨架蛋白的降解,从而对视网膜细胞产生保护作用。     

白细胞介素-23通过无翅基因相关整合位点/β-连环蛋白通路增强舌鳞状细胞癌抗凋亡及耐药能力

目的 检测白细胞介素-23（IL-23）在舌鳞状细胞癌组织中表达水平与临床预后的关系,研究舌鳞状细胞癌细胞系SCC9经IL-23处理后抗凋亡及耐药能力的变化。方法 免疫组织化学法检测28例舌鳞状细胞癌患者组织中IL-23的表达情况;实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测不同浓度的IL-23处理后,SCC9中无翅基因相关整合位点（Wnt）1及c-myc的mRNA表达水平;结合小分子干扰RNA（siRNA）,Western blot法检测IL-23对SCC9细胞的β-连环蛋白（β-catenin）和B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）、P-糖蛋白（P-gp）表达影响及潜在机制;甲基噻唑基四唑法检测SCC9细胞在IL-23作用下对顺铂的抗凋亡能力改变。结果 舌鳞状细胞癌组织中IL-23表达强度与淋巴结转移、神经侵犯及治疗复发有相关性（P<0.05）; IL-23可增强癌细胞抗凋亡蛋白Bcl-2和耐药相关蛋白ABCG2、P-gp的表达,并且与Wnt通路活化程度密切相关;IL-23能够显著加强SCC9细胞对顺铂的抵抗性（P<0.01）。结论 IL-23通过上调舌鳞状细胞癌细胞的Wnt通路增强其抗凋亡及耐药能力。     

胶质瘤U251细胞中CD133表达及干细胞特性分析

目的： 探讨CD133⁺细胞的生物学特性,分析CD133作为胶质瘤干细胞标记的可行性。方法： 利用免疫荧光染色检测U251细胞中CD133、巢蛋白（nestin）、神经元特异性烯醇化酶( NSE )、神经胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)等蛋白表达,分析CD133⁺细胞与CD133^－细胞中巢蛋白、NSE、GFAP阳性细胞存在的差异。结果： U251中CD133⁺细胞比例为0.060±0.003,在CD133⁺细胞中,巢蛋白阳性细胞,NSE和GFAP阴性细胞比CD133^－中明显增多;在CD133^－细胞中,也存在巢蛋白阳性细胞,数目较CD133⁺中明显减少,相反巢蛋白阴性细胞,NSE和GFAP阳性细胞明显增多。结论： 胶质瘤U251细胞存在CD133⁺细胞,在CD133阳性和阴性细胞中,均存在干细胞样细胞,但是在CD133⁺细胞中此类细胞更多。     

芳香化酶抑制剂治疗雌激素相关肿瘤引起代谢失衡的研究进展

雌激素相关肿瘤是女性较为常见的恶性肿瘤类型。绝经前妇女雌激素主要由卵巢分泌,而绝经后雌激素的重要来源为芳香化酶催化雄激素转化为雌激素,因此芳香化酶抑制剂（aromatase inhibitors,AIs）作为绝经后乳腺癌、子宫内膜癌和上皮性卵巢癌的治疗药物在临床上得到广泛应用。AIs的使用会带来多种不良后果,如潮热、骨痛、骨质疏松和增加心血管疾病的风险等,但其引起的代谢失衡尤为重要。本文综述AIs治疗后可能带来的代谢失衡,分析代谢紊乱发生的原因,提出了采用联合使用二甲双胍和联合运动的方式改善AIs治疗雌激素相关肿瘤所致代谢失衡的新思路。     

替莫唑胺化疗对胶质瘤U251中CD133~+细胞的影响

目的探讨化疗耐药与肿瘤干细胞之间的关系。方法分析替莫唑胺(TMZ)作用前后胶质瘤U251中CD133蛋白表达及阳性细胞数量的变化。通过MTT实验评估U251细胞对TMZ的敏感性。利用免疫荧光染色和Western blot检测TMZ作用前后U251细胞中CD133、巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)等蛋白表达。结果U251细胞中未加入TMZ组的CD133+细胞比例约为0.060±0.003,明显低于加入TMZ组的0.337±0.012(P<0.05)。在TMZ作用后,CD133和nestin表达明显增加,而GFAP和NSE表达明显减少(P<0.05)。结论胶质瘤U251细胞株中存在CD133+细胞,大部分具有脑肿瘤干细胞特性;在TMZ作用后,这类细胞比例增加,提示其与化疗耐药有关。     

大鼠鼻黏膜外胚层间充质干细胞向成骨细胞和神经元的诱导分化

目的:建立鼻黏膜外胚层间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,ECTO-MSCs)的体外培养方法,探讨该细胞的干细胞特性(stemness)和分化潜能.方法:在观察ECTO-MSCs在大鼠鼻腔呼吸黏膜内分布特征的基础上,体外培养扩增ECTO-MSCs,并用干细胞标志蛋白巢蛋白、CD133、C...