MTT法检测NK和LAK活性的方法学探讨

获取不同来源的脾单个核细胞（人，鼠），用ＭＴＴ法检测了脾细胞的ＮＫ，ＬＡＫ活性，并对实验条件进行了探讨，寻找出了ＭＴＴ法检测ＮＫ，ＬＡＫ活性的最适效靶比（＜５０：１），最佳杀伤时间（ＮＫ２４小时，ＬＡＫ４８小时），探讨了实验的各操作步骤，检测数据的分析，处理，并与同位素法进行了比较，ＭＴＴ法的检测结果与同位素法有良好的一致性，但本方法操作简单，重复性好，且避免了同位素污染，经济，方便，不失为ＮＫ，     

加味大黄?虫颗粒对精索静脉曲张模型大鼠精子线粒体结构的影响

目的:探索加味大黄?虫颗粒对精索静脉曲张模型大鼠精子线粒体结构的影响。方法:40只雄性大鼠随机选出10只作为假手术组,剩余30按照Turner方法制造左侧精索静脉曲张模型大鼠,造模完成后,按照随机数字表法分为加味大黄?虫颗粒组、模型组、迈之灵组,每组各10只。加味大黄?虫颗粒组给予加味大黄?虫颗粒灌胃; 迈之灵组予迈之灵片,假手术组和模型组分别予等剂量0.9%生理盐水灌胃。8周后处死所有大鼠,取出左侧睾丸组织,完成精液质量分析、睾丸组织病理检测。结果:灌胃8周后,加味大黄?虫颗粒组精子浓度、总活率、前向运动精子、精子直线速度(VSL)、精子曲线速度(VCL)、平均路径速度(VAP)、精子头侧摆幅度(ALH),明显高于模型组(P<0.05)。模型组睾丸组织病理报告生精小管管腔空化,各级生精细胞破坏严重,精子膜结构破坏,精子线粒体肿胀、溶解。而加味大黄?虫颗粒组中睾丸组织的病理损伤得到不同程度的改善,精子线粒体结构完整,形态大小规则。结论:加味大黄?虫颗粒在一定程度上修复精索静脉曲张大鼠睾丸组织的病理损伤,进而起到保护精子线粒体结构与功能的作用,为精子的发育、活动提供稳定的能量代谢环境,有助提高精子活力及增加受精能力。     

基于网络药理学研究脑血疏口服液治疗脑出血的作用机制

目的基于网络药理学研究脑血疏口服液治疗脑出血的作用机制。方法利用TCMSP数据库,筛选出脑血疏口服液的活性成分。通过DisGeNET、Genecards数据库,筛选出脑出血疾病相关的靶点,两者取交集得到相同的靶点。将交集基因用David软件进行GO注释分析和KEGG通路分析。采用Cytoscape3.7.1软件,建立单味药-成分-靶点网络模型、交集基因蛋白质相互作用网络模型、活性成分-靶点-通路网络模型;利用Ledock分子对接软件,验证预测结果。结果脑血疏口服液治疗脑出血的活性成分共56种,其中黄芪紫檀烷苷、槲皮素、汉黄芩素、川芎嗪、桉脂素等可能是重要物质基础。脑血疏口服液治疗脑出血的机制涉及靶标40个、相关信号通路20条,可能与PI3K-Akt、肿瘤坏死因子、细胞凋亡等信号通路有关,而且ESR1、AKT1、PIK3CA、AKT3、EGFR、PTGS2、MMP2、MMP3等靶点可能在治疗脑出血过程中起着关键性的作用。结论本研究基于整体观角度,通过网络药理学构建了脑血疏口服液治疗脑血出血的成分-靶点-信号通路的相互关联网络,系统揭示了该制剂治疗脑出血的主要药效物质以及作用机制,可为临床科学使用提供依据。     

自噬在类风湿关节炎中的作用及中药干预研究进展

类风湿关节炎(RA)目前临床上多使用糖皮质激素或免疫抑制剂进行治疗,但长期使用具有明显的毒副作用,且免疫抑制剂价格昂贵,一定程度限制其广泛的应用。中药治疗RA历史悠久,且毒副作用小,但其具体作用机制不甚明确。自噬的过程是细胞自身在受到外界的刺激,通过细胞内信号转导,触发的一系列细胞维持内环境稳定的一种主动的生物学过程,其异常参与多种疾病的发生。目前研究表明自噬异常与RA的发生发展过程关系密切,可以干预RA血管翳生成、滑膜炎症和骨破坏等关键病理环节,从而影响RA的进展和预后。近年来很多研究发现中药复方及其活性成分可以通过调节自噬过程,发挥治疗RA的作用。本文对中药调控自噬进而干预RA的相关文献进行调研,以期为中药治疗RA重要作用机制、新药开发及临床治疗提供新思路。     

针刺苍白球内侧部对帕金森病模型大鼠脑内抗氧化酶的调节

目的；观察针刺苍白球内侧部对帕金森病模型大鼠行为学及纹状体抗氧化酶的影响。方法：①实验于2001—07／12在黑龙江中医药大学针灸生理实验室完成。选用健康Wistar大鼠45只。②选取35只大鼠，应用偏侧纹状体立体定位注射6-羟基多巴胺的方法制备帕金森病模型大鼠，将造模成功的帕金森病模型大鼠18只随机分为2组：模型组9只，治疗组9只．治疗组：借助脑赢体定位技术将改制的针灸针垂直刺入帕金森病模型大鼠患侧苍白球内侧部进行针刺治疗，1次／d，连续治疗1周；然后再应用G．6805Ⅱ型电针治疗仪进行电针治疗[强度1mA左右（以大鼠能耐受且不激怒、嘶叫为标准），频率为100Hz，连续波1，持续15min，1次／d，连续治疗2周。另取10只大鼠为空白对照组，在大鼠左侧纹状体区注射含0．2％的抗坏血酸的生理盐水5μL。模型组及空白对照组：不再做任何处理，正常饲养3周。③分别于钊刺治疗前、针刺后1周、电针后1周、电针后2周后于3组大鼠背部皮下注射阿朴吗啡0．5mg/kg诱发旋转，记录给药后10-40min内各组大鼠的旋转次数。④行为学检测完毕后，按照南京建成生物工程研究所试剂盒说明步骤，取组织匀浆上清液，通过722分光光度仪用化学比色法测定各组大鼠纹状体谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、丙二醛的含量。⑤计量资料差异比较采用t检验。结果：因造模失败脱失17只，进入结果分析28只。①治疗组从治疗后1周开始，旋转次数逐渐减少，针刺治疗后1周，电针治疗后1和2周分别比治疗前减少14．55％，49．50％，67，07％，即随着治疗时间的延长，帕金森病大鼠的行为学改变明显好转。针刺治疗后1周，其旋转次数与治疗前比较，差异不明显（P〉0．05）；电针治疗后1和2周，旋转次数明显少于治疗前（P〈0．01）。②模型组大鼠纹状体丙二醛含量明显高于空白对照组（P〈0．01）。治疗组大鼠纹状体丙二醛含量明显低于模型组（P〈0．01）。模型组超氧化物歧化酶含量与空白对照组比较，整异不明显（P〉0．05）。模型组大鼠谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶含量明显低于空白对照组和治疗组（P〈0．05-0．01）。3组大鼠纹状体超氧化物歧化酶含量差异不显著（P〉0．05）。结论：针刺苍白球内侧部可明显改善帕金森病模型大鼠的行为学，同时针刺苍白球内侧部可以减轻多巴胺能神经元的脂质过氧化反应，对氧化应激所引起的神经损伤且有保护作用。     

干扰素和苦参素联合对乙型肝炎血清标志物影响的研究

大剂量干扰素治疗乙型肝炎有一定疗效,同时也有外周血白细胞、血小板减少等副反应,甚至影响到长期使用。而苦参素有升高白细胞的作用,并有一定抗乙型肝炎病毒的效果。现将二药合用,以达到协同增效、弥补不足的目的。1　临床资料1.1　临床资料　74例均为本院2 0 0 0年—2 0 0 2年门诊及住院病人。男5 1例,女2 3例;年龄16岁～5 3岁,平均3 4.7岁。按2 0 0 0年9月全国病毒性肝炎诊断标准,均符合慢性乙型肝炎诊断。病程6个月至5a。乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎抗核抗体(抗-HBc)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)及乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV …     

关节镜辅助下内侧髌股韧带重建治疗急性髌骨脱位的中期随访

目的探讨关节镜辅助下内侧髌股韧带(medial patellofemoral ligament, MPFL)重建治疗急性髌骨脱位(acute patellar dislocation, APD)的中期临床疗效。方法 2016年3月至2018年3月,我科采用关节镜辅助下MPFL重建手术治疗19例APD病人,其中男7例,女12例;年龄为(21.5±6.3)岁。所有病人于术中进行关节镜检查,评估髌骨轨迹,然后进行MPFL重建。术后6个月随访复查X线片及膝关节CT,测量膝关节Q角,采用Lysholm评分评价病人术后膝关节功能情况。结果术后所有病人均获随访,随访时间为(11.7±5.3)个月。术后无髌骨再脱位发生,恐惧试验阴性,关节功能恢复良好。术后6个月,19例病人的髌骨Q角为15.37°±1.46°,较术前的17.63°±1.83°显著减小,差异具有统计学意义(t=5.938,P<0.001);术后6个月19例病人的膝关节Lysholm评分为(90.47±2.83)分,较术前的(67.63±7.14)分明显提高,差异具有统计学意义(t=-16.052,P<0.001)。结论关节镜辅助下MPFL重建治疗APD的中期临床效果良好。     

两种时机行关节镜下自体肌腱重建手术治疗急性前交叉韧带损伤的效果对比

目的探讨急性前交叉韧带损伤患者在不同时机行关节镜下自体肌腱重建手术的临床效果。方法回顾性分析2016年2月~2020年1月安徽医科大学附属六安医院骨科收治的80例急性前交叉韧带损伤患者病历资料,均接受关节镜下自体肌腱重建手术治疗,根据不同手术时机分组,观察组40例,伤后至手术时间<4周;对照组40例,伤后至手术时间≥4周,比较两组术前、术后6个月膝关节功能、活动度、稳定性变化及术中所见合并症。结果术前两组国际膝关节文献委员会膝关节主观评价表(the international knee documentation committee knee evaluation form,IKDC)、膝关节Lysholm评估量表、膝关节Tegner活动指数量表的评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。术后6个月与对照组比较,观察组上述评分明显较高(P<0.05);术前两组膝关节活动度、屈膝受限度、伸膝受限度比较,差异无统计学意义(P>0.05),术后6个月与对照组比较,观察组膝关节活动度数明显较大,屈膝受限度、伸膝受限度明显较小(P<0.05);术前两组Lachman试验阳性率、前抽屉试验阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05),术后6个月与对照组比较,观察组上述试验阳性率明显较低(P<0.05);术中探查显示,两组膝关节粘连率分别为2.5%、7.5%,差异无统计学意义(P>0.05),观察组半月板损伤率、软骨损伤率分别为47.5%、12.5%,明显低于对照组的70%和32.5%(P<0.05)。结论急性前交叉韧带损伤患者于早期实施关节镜下自体肌腱重建手术治疗,在促进膝关节功能、维持膝关节活动度及稳定性方面优于延期手术,且能减少继发损伤,更值得推广。     

基于网络药理学的济生肾气丸治疗骨质疏松症的分子机制研究

目的应用网络药理学分析技术研究济生肾气丸治疗骨质疏松症(OP)的分子作用机制。方法通过TCMSP数据库查询并筛选出济生肾气丸全方共10味中药的活性成分及有效靶点;检索Comparative Toxicogenomics Database (CTD)、Gene Cards、Online Mendelian Inheritance in Man(OMIM)三大疾病靶点数据库查询骨质疏松症相关靶点;利用Venny 2.1统计复方与疾病的交集靶点,并绘制Venn图。利用Cytoscape 3.6软件,绘制活性成分-交集靶点网络图。将交集靶点导入String数据库后获得的数据经Cytoscape的Cyto Hubba插件构建蛋白互作网络图。通过DAVID数据库进行基因功能GO分析和KEGG通路富集分析,并利用R-studio软件进行气泡图绘制。利用Cytoscape绘制核心靶点与KEGG通路的网络图。结果济生肾气丸中共得到63个活性成分,预测出211个相关靶点;经过三大数据库共检索出OP相关靶点3 126个;复方与疾病交集靶点132个。通过Cytoscape构建交集基因蛋白互作网络图与核心靶点-通路网络图,按照连接节点(degree)大小排列显示济生肾气丸主要通过作用于AKT1、MAPK1、IL6、MAPK8、JUN、VEGFA等靶基因及调控肿瘤坏死因子信号通路、白细胞介素17信号通路、AGE-RAGE信号通路、流体剪切应力和动脉粥样硬化信号通路等发挥治疗OP的作用。结论济生肾气丸治疗OP具有多成分、多靶点、多系统的特点,其作用机制可能通过抑制破骨细胞的生成、刺激成骨细胞的活性、调节骨代谢平衡、降低炎症反应等途径有关。     

人工虎骨粉治疗老年脆性骨折的有效性临床研究

目的探讨人工虎骨粉对老年脆性骨折患者肿胀、疼痛的缓解作用,及对生活质量的影响。方法选择62例脆性骨折患者,采用随机信封方法分为两组,每组各31例,患者均给予骨折的综合治疗,干预组给予工虎骨粉口服,对照组给予碳酸钙和维生素D口服。于干预前及干预第15、30天记录肿胀评分、疼痛评分。分别于干预前及干预后3、6个月记录简化Fugl-Meyer运动功能、生活质量(SF-36)。结果干预第15、30天,两组的肿胀、疼痛评分下降,干预组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后3、6个月,两组的运动功能、生活质量评分升高,干预治疗组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论人工虎骨粉可有效缓解脆性骨折老年患者的早期肿痛,改善患者运动功能,提高生活质量。