氰戊菊酯对未成熟雌性大鼠的体液免疫及性激素的影响

目的：了解氰戊菊酸对未成熟雌性SD大鼠性激素分泌和体液免疫功能的影响并探讨其影响，机制。方法：20只4周龄雄性SD大鼠随机分为两组，分别为氰戊菊酯组（以氰戊菊酸LD50的1／10剂量染毒）和对照组，腹腔注射给药4周后取血清，用酶联免疫吸附法测定白细胞介素6（IL－6），肿瘤坏死因子（TNF－α）和免疫球蛋白G（IgG)的水平，用放射免疫法测定血清中17β－雌二醇和睾酮水平，结果：氰戊菊酯实验组小鼠外周血IL－6，TNF－α，IgG的含量分别为2．244mg/ml,0.360ng/ml,4.928μg/ml，对照组小鼠外周血IL－6，TNF－α，IgG的含量分别为2．805ng/ml,0.439ng/ml,3.825μg/ml，实验组与对照组相比，IL－6，TNF－α水平均有所下降，差异有显著性（P＜0．05），而IgG增高，差异有极其显著性（P＜0．01），外周血雌二醇含量实验组（50．785pmol/L)高于对照组（45．029pmol/L)，差异有显著性（P＜0．05），睾酮水平实验组（0．354nmol/L)与对照组（0．323nmol/L)，差异无显著性（P＞0．05），结论：氰戊菊酯可以影响到体液免疫系统和性激素水平，其机制可能是氰戊菊酯通过影响机体雌激素水平，从而影响到整个机体的免疫系统。     

循环中内皮细胞损伤生物标志物在判断狼疮性肾炎肾脏血管病变中的应用

目的：观察狼疮性肾炎（LN）患者血液中血栓调节蛋白（TM）、血管内皮细胞粘附分子1（VCAM-1）和E选择素（E-selectin）表达情况,探讨内皮损伤生物标记物与肾脏血管病变的关系.方法：30例经肾活检证实为LN伴血管病变患者、30例LN不伴血管病变患者和25名健康志愿者,ELISA法检测血循环中可溶性TM、VCAM-1和E-selectin水平.结果：不伴血管病变组LN患者TM和VCAM-1水平与正常对照组无明显差别,伴血管病变组患者TM和VCAM-1水平均显著高于不伴血管病变组和正常对照组（P＜0.01）.伴血管病变患者的E-selectin水平与正常对照组无明显差异.伴血管病变组患者TM与肌酐水平呈正相关（r=0.625,P＜0.01）.在伴血管病变LN患者中,合并血栓性微血管病变（TMA）患者TM水平明显高于不伴有TMA患者（P＜0.01）.结论：结合肾组织病理检查,检测循环中的TM和VCAM-1对评估LN患者肾脏血管病变具有重要的临床意义.     

汶川大地震期间无偿献血的组织、实施和启示

回顾分析汶川大地震救灾工作中群众无偿献血的组织和实施情况,可为今后战时或突发事件时的血液保障提供宝贵经验.文中综合分析救灾工作中无偿献血和临床用血情况,并与国外突发事件比较.此次地震发生后,来自群众的无偿献血量远远超出救治伤员的需求,应及时妥善协调,以免造成血液资源不必要的浪费;同时应加强血液需求量的评估和血液保存的研究,采取建立长期流动血液储备库等措施,既可保障突发事件情况下救援工作中的血液供应,又可缓解临床常规用血的压力.     

雷公藤甲素对嘌呤霉素所致足细胞凋亡的抑制作用

目的 为了探讨雷公藤治疗足细胞病变的机制,利用嘌呤霉素诱导足细胞凋亡的体外损伤模型,观察雷公藤甲素对足细胞损伤的保护作用及其机制.方法 用CCK法观察雷公藤甲素对足细胞增殖活性的影响;应用TUNEL染色法定性观察雷公藤甲素对嘌呤霉素诱导的足细胞凋亡的保护作用;采用PI染色后再经流式细胞仪来定量分析雷公藤甲素对足细胞凋亡的抑制效应.结果 雷公藤甲素质量浓度小于1 μg/mL时对足细胞生存率没有明显影响;100 μg/mL嘌呤霉索诱导足细胞凋亡,但是此凋亡效应可以被1 μg/mL雷公藤甲素抑制;而且这种抑制作用具有时间依赖性.结论 雷公藤甲素通过抑制细胞凋亡来保护足细胞.雷公藤甲素对足细胞的保护作用可能是临床上雷公藤有效治疗足细胞病变的机制之一.     

脱氢表雄酮诱导CD4~+T细胞系Jurkat细胞凋亡的初步探索

为研究脱氢表雄酮(DHEA)对Jurkat细胞增殖活性和凋亡的影响,用不同浓度的DHEA处理Jurkat细胞12 h、24 h后,用MTT法测定细胞活性;Hoechst染色观测细胞形态的改变;碘化丙啶(PI)染色检测细胞凋亡;Annexin V/PI双染法检测细胞膜变化;DNA阶梯状电泳分析细胞DNA断裂;荧光显微镜分析细胞线粒体膜电位变化;并用RT-PCR和流式检测凋亡时细胞中Fas和FasL的mRNA和蛋白表达的情况。结果显示,DHEA在10~(-7)mol/L时对Jurkat细胞有显著的增殖抑制作用(P<0.05)和诱导凋亡效果,细胞凋亡率比对照组分别升高2.48%和2.52%;Annexin V/PI双染法检测,处理组凋亡细胞比率比对照组也明显增加;且随着DHEA剂量的增加细胞线粒体膜电位倒塌明显增强,Fas和FasL的mRNA和蛋白水平也随之增加。以上结果表明,DHEA在高浓度时对Jurkat细胞有一定的抑制增殖并诱导其凋亡的作用,Fas/FasL通路和膜电位的改变在此机制中发挥了相应的作用。     

一种新型的具有免疫调节和介导DNA基因治疗的蛋白质载体的研制

目的:研制一种具有调节宿主免疫系统,同时又能包装核酸进入肿瘤细胞的新型蛋白质载体。方法:利用基因工程技术,将人乙肝病毒核心抗原(HBcAg)的-COOH端和靶向肿瘤的整和素配体RGD肽与谷胱甘肽还原酶(GST)在大肠埃希菌中融合表达,经分子筛和GST亲和纯化后,获得DNA包装蛋白GST-RGD-ΔHBcAg。此包装蛋白用FITC标记后与前列腺癌PC-3细胞孵育,观察进入细胞情况;并用此包装蛋白包装含绿色荧光蛋白GFP基因的DNA载体pEGFP-N1,转染PC-3细胞,观察绿色荧光蛋白表达。此外,用包装蛋白GST-RGD-ΔHBcAg免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,检测血清IgG1和IgG2a抗体水平。结果:本研究应用原核表达系统成功地表达并纯化出DNA包装蛋白GST-RGD-ΔHBcAg;荧光显微镜下观察到包装蛋白GST-RGD-ΔHBcAg能进入到PC-3细胞,并能携带绿色荧光蛋白基因进入PC-3细胞并表达;该包装蛋白免疫BALB/c小鼠后,小鼠血清IgG1和IgG2a抗体水平同时升高。结论:本研究研制的DNA包装蛋白GST-RGD-ΔHBcAg可作为基因治疗载体,并能对宿主的免疫系统起调节作用,为肿瘤的免疫——基因治疗载体提供一个新的选择。     

临床输血质量管理体系的建立

为确保血液和血液成分的安全和合理使用,必须加强临床输血的质量管理。根据ISO9001:2000标准,文中建立了有效的临床输血质量管理体系,其关键控制点涵盖了人员、设备、试剂、环境、血液储存、运输与发放、输血不良反应和计算机管理系统等。编写的质量管理体系文件包括质量手册、程序文件、标准操作规程和质量记录,所有有效文件必须经授权和受控。     

O型悬浮红细胞ABO抗体效价研究

目的:测定O型悬浮红细胞ABO抗体效价,探讨未交叉配合O型悬浮红细胞紧急输注的安全性和可行性. 方法:采集100份O型全血,分离制备成悬浮红细胞和血浆制品,测定全血、悬浮红细胞储存第1、7、14 d时的IgM、IgG抗A、抗B抗体效价,并进行比较. 结果:全血IgM抗体效价主要分布于4～128,IgG抗体效价主要分布于16～256;悬浮红细胞IgM抗体效价主要分布于4～32,IgG抗体效价主要分布于8～128,与全血相比均明显下降(P<0.01).悬浮红细胞储存第1、7、14 d间抗体效价虽有所下降,但差异无显著性意义(P＞0.05). 结论:O型悬浮红细胞的ABO抗体效价较低,推断其未经交叉配合的紧急输注也是安全的.     

便携式应急采血箱的研制与应用

目的研制新型便携式应急采血箱,以满足突发事件情况下应急血液保障快速反应的工作需求。方法调研论证应急血液保障的需求,分析现有保障条件,形成计划方案,解决关键问题,制作定型便携式应急采血箱并进行实践检验。结果研发了可1人携行、基本物资配置齐备,外形为700mm×500mm×400mm的便携式应急采血箱。经过多次实践证明此箱可满足突发事件情况下血液应急救援采血过程所有程序的功能需要。结论便携式应急采血箱可满足应急情况下紧急采血的工作需求。     

雷公藤甲素干预足细胞病变的体外观察

目的：雷公藤甲素对Heymann肾炎和嘌呤霉素肾病大鼠的疗效及其对足细胞病变的影响提示，雷公藤甲素有可能直接作用于足细胞，从而改善其病变状况。本研究借助小鼠足细胞系，体外观察了雷公藤甲素对足细胞损伤的保护和修复作用，并对其作用机制进行了研究。方法：体外采用氨基核苷嘌呤霉素（puromycin aminonucleoside，PAN）致足细胞损伤模型。观察雷公藤甲素对足细胞损伤的保护作用研究中，雷公藤甲素与足细胞预孵育30min后，再加入含PAN的培养基，继续作用24h；观察雷公藤甲素对足细胞损伤的修复作用研究中，PAN作用足细胞24h，造成足细胞明显损伤后，再加入含或不含雷公藤甲素的培养基，继续培养3天。免疫荧光法和流式细胞仪分析足细胞骨架相关蛋白F-actin和Synaptopodin的变化，并进一步观察了细胞内调节骨架装配的Rho／ROCK信号通路的活性，即采用Western Blot检测ROCK-Ⅰ底物——肌球蛋白磷酸酶结合亚单位（MBS）磷酸化水平，以及Rho／ROCK信号通路选择性阻断剂Y-27632对雷公藤甲素作用的影响。同时采用免疫荧光法和流式细胞仪分析足细胞裂孔膜相关分子Nephrin和Podocin在足细胞的分布及表达量的变化。结果：正常分化足细胞F—actin呈丝状结构，密度大，丝强劲有力，沿细胞极性分布；Synaptopodin呈颗粒状沿细胞骨架分布。裂孔膜蛋白Nephrin沿足细胞膜和细胞骨架分布，Podocin呈线状均匀分布于胞浆内，PAN作用24h后，细胞足突回缩，F—actin几乎完全解聚，Synaptopodin表达消失。Nephrin和Podocin表达减弱，正常丝状结构消失。而经过雷公藤甲素的预处理，PAN诱导的足细胞损伤明显减弱，足细胞未表现出上述骨架结构的改变，Synaptopodin表达没有明显减弱。同时我们的结果显示，在PAN造成足细胞明显损伤后再加入雷公藤甲素，足细胞损伤能够得到一定修复，细胞内重新出现极性分布的微丝，同时，Synaptopodin的表达也得以修复。Rho／ROCK信号通路研究显示，100μg／ml PAN明显降低Rho／ROCK通路活性。雷公藤甲素能有效遏制MBS磷酸化水平的降低，维持足细胞Rho／ROCK通路的活性状态。Rho／ROCK信号通路选择性抑制剂Y-27632可阻断雷公藤对足细胞骨架结构的保护作用。此外，对裂孔膜蛋白Nephrin，Podocin的研究表明，不论是在预防组和治疗组，PAN对Nephrin和Podocin的损伤可在一定程度上被雷公藤甲素预防和修复。结论：雷公藤甲素可稳定足细胞的细胞骨架，拮抗PAN对足细胞的损伤。在足细胞损伤已经发生后，雷公藤甲素可逆转足细胞的损伤，修复足细胞骨架结构和相关分子的表达。雷公藤甲素的上述作用与细胞内Rho／ROCK信号通路密切相关。雷公藤甲素对足细胞的影响可能是其降低肾小球肾炎患者尿蛋白的重要机制之一。