肺癌病人痰细胞中p16基因高甲基化分析

目的　分析肺癌病人痰标本中p16基因启动子区域异常高甲基化的改变情况 ,评价该指标作为肺癌辅助诊断分子标记物的价值。方法　运用半巢式甲基化特异性PCR技术 ,检测 94例原发性肺癌病人痰标本和部分对应肿瘤组织 ,以及 10例慢性炎病例痰标本中p16基因启动子区域的甲基化改变。结果　 74%的肺癌病人痰标本中检测到了p16基因异常高甲基化 ,与传统细胞学相比 ( 4 6.8%) ,痰标本中p16基因异常高甲基化对肿瘤的检出率灵敏度更高 (P <0 .0 1) ;痰细胞中p16甲基化检测和细胞学相结合 ,对肿瘤的检出率可达 86.17%( 81 94)。如果痰标本中p16基因启动子区域发生高甲基化 ,其对应的肿瘤组织中p16基因亦为高甲基化。 10例慢性炎病人痰标本中仅 3例检测出p16基因甲基化。结论　痰标本中p16基因甲基化是临床肺癌辅助诊断的有效分子生物标记物之一。     

组织微阵

组织微阵技术可以把多达1000种不同的肿瘤排列在同一个蜡块上，通过它可以在同一时间对数千种分子标记物进行DNA，RNA和蛋白水平的原位分析。与传统的技术相比，组织微阵技术在不破坏原先组织的情况下对分子的分析速度加快100倍。而且它能对实体组织进行研究，构建和分析可以自动化。目前为止组织微阵技术大都应用在癌症的研究中。     

癌症——一种分子网络疾病

随着新一代DNA测序技术的迅猛发展,癌症基因组研究硕果累累,人们认识到肿瘤组织基因突变谱存在巨大异质性。突变基因不仅数目繁多、功能复杂,而且处在动态的网络系统之中。肿瘤的发生发展是涉及一系列调控细胞生长、分化等通路的基因群的网络系统功能异常驱动所引发的细胞恶变、代谢过程。这种分子网络的异常程度及复杂性决定了肿瘤的恶性表型和个体差异。面临这一类复杂的分子网络疾病的严峻挑战,人们必须改变现有的治疗策略和治疗理念,分子网络整体观念将在未来肿瘤个体化诊治中发挥重要的作用。     

化学致癌物体外转化大鼠气管上皮细胞的研究

作者建立了大鼠气管上皮(rat tracheal epithelial,RTE)细胞的单层原代培养和RTE细胞体外转化实验,比较有滋养层和无滋养层RTE细胞转化系统的实验结果。首次证明烟草中的特殊亚硝胺——甲基亚硝基吡啶基丁酮(NNK)对RTE细胞有体外转化作用。在甲基硝基亚硝基胍(MNNG)和NNK诱导转化实验中,有滋养层和无滋养层体外转化系统得到的结果一致,而后者在RTE细胞体外转化应用中更为敏感而方便。     

致癌物诱导大鼠食管上皮细胞转化的研究

非致瘤性的F344大鼠食管上皮细胞RE-149培养于低钙、并含有透析血清及七种生长因子的PFMR-4培养基中。经致癌物(±)反式-7.8-二氢苯并(a)芘-7.8-二醇或甲基硝基亚硝基胍作用后2周,种入不含血清和EGF的选择性培养基中。经致癌物作用的细胞集落转化率增高11～77倍。这种转化集落可以在选择性培养基中连续传代,接种于同种新生大鼠皮下形成鳞状细胞癌。该研究表明,致癌物作用后引起细胞对生长因子依赖性的变化,可能作为选择转化上皮细胞的一个新途径。     

肺癌染色体遗传标记 2q~- 在癌变和发展中的意义

目的研究肺癌发生过程中的细胞遗传学改变，探讨肺癌发生的遗传学机理。方法应用荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）技术，对１例已永生化并趋于恶性的人支气管上皮细胞系Ｍ，以及１２例临床原发非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）标本中２号和３号染色体改变进行了研究。结果２ｑ－和３ｐ－高频发生。Ｍ细胞系的晚期代数ＭＰ７１及检测的７例ＮＳＣＬＣ标本中的３例有２ｑ－，Ｍ细胞系及１２例标本中的５例有３ｐ－。结论２ｑ－也是肺癌中高发的细胞遗传学改变。可能在２ｑ上存在一个或几个肿瘤抑制基因，其丢失可导致ＮＳＣＬＣ的发生和发展。     

膀胱移行细胞癌HPV-16/18感染与p53基因改变的关系

目的初步探讨膀胱移行细胞癌(TCC)中HPV-16／18感染与p53基因改变的关系。方法选择已确定为HPV-16／18感染的18例膀胱TCC患者(其中HPV-16／18E7片段阳性者13例，HPV-16／18E7阴性者5例)，采用微卫星方法检测肿瘤组织内与p53基因紧密连锁的TP53位点杂合性缺失(LOH)情况，并采用免疫组织化学方法检测p53蛋白表达情况。结果18例TCC组织中TP53位点杂合率为83．33％(15／18)，其LOH率达46．67％(7／15)；p53蛋白阳性率为50．00％(9／18)。其中，HPV-16／18E7 DNA阳性和p53基因改变[包括TP53位点LOH和(或)p53蛋白阳性]并存者11例，占61.11％(11／18)；仅HPV-16／18E7 DNA阳性或p53基因改变[包括TP53位点LOH和(或)p53蛋白阳性]者5例，占27．78％(5／18)；两者均阴性者2例，占11．11％(2／18)。结论HPV-16／18感染可能通过p53基因改变在TCC的发生发展过程中发挥作用，这种p53基因改变可以是LOH和(或)蛋白异常表达。     

人膀胱移行细胞癌染色体9p21.3-9p23杂合性缺失作图

目的　研究并确定人膀胱移行细胞癌染色体 9p2 1.3 -9p2 3区域杂合性缺失发生率和最小缺失区域 ,为寻找与克隆膀胱移行细胞癌相关的抑癌基因提供线索。方法　选取 7个微卫星多态性标记 (其中 6个位于 9p2 1.3 -9p2 3 ,另 1个位于 9q3 4作为对照 ) ,对 2 4例膀胱移行细胞癌组织及其对应的外周血淋巴细胞进行核素标记的聚合酶链反应和聚丙烯酰胺变性凝胶电泳。分析 9p2 1.3 -9p2 3区各微卫星位点杂合性缺失的发生情况及其与病理分期分级的关系。 结果　 2 4例膀胱癌中的 2 0例 (83 .3 % )存在至少 1个微卫星位点的杂合性缺失。在 9p2 1.3 -9p2 3区域的 6个位点中 ,杂合性缺失率最高的为 9p2 3的D9S2 85 ,达66.7%(8/12 ) ;其次为 9p2 1的D9S1846,达 5 4.5 % (6/11)。位于 9q3 4.12的D9S182 1的杂合性缺失率为 5 4.5 % (6/11) ,而且在发生杂合性缺失的 6个病例中 ,有 5个被证明为部分染色体片段的缺失。结论　在 9p2 1.3 -9p2 3区域 ,可能至少存在 2个与膀胱移行细胞癌相关的候选抑癌基因 ,分别位于D 9S2 85和D9S1846附近     

喉癌三号染色体短臂(3p)抑癌基因微卫星多态位点的杂合性缺失检测

目的 :检测喉鳞癌组织在 3号染色体短臂上 (3p)三个区段 3p14 - cen、3p2 1- 2 2、3p2 5 - 2 6内相应抑癌基因FHIT,h ML H1及 VHL微卫星 (microsatellite,MS)的杂合性缺失 (loss of heterozygosity,L OH)。方法 :采用显微切割法从病理切片中挑取肿瘤组织 ,选取上述基因内含子或与其连锁的 7个 MS多态位点对 4 1例喉癌组织进行聚合酶链式反应和变性凝胶电泳。结果 :FHIT基因内含子三个 MS位点 D3S12 34、D3S130 0及 D3S4 10 3的 L OH发生率分别为77.4 2 %、6 8.97%和 6 9.70 %。与 h ML H1基因连锁的两个 MS位点 D3S15 6 1和 D3S16 12的 L OH发生率分别为 5 8.33%和 4 5 .16 %。与 VHL基因连锁的两个 MS位点 D3S10 38及 D3S12 83的 L OH发生率分别为 4 3.33%和 4 6 .88%。 FHIT基因内含子的 MS,与 h ML H1基因连锁的 MS,与 VHL基因连锁的 MS的 L OH发生率分别为 82 .93% (34/ 4 1) ,6 7.5 0 % (2 7/ 4 0 ) ,70 .0 % (2 8/ 4 0 )。同时在上述三个基因区域内发生某一或某些 MS多态位点 L OH者有 16例 ,占 39%。D3S12 34L OH在吸烟指数≥ 4 0 0的喉癌患者较吸烟指数 <4 0 0者明显频发 ,统计学有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :喉癌组织 3号染色体短臂上三个抑癌基因 FHIT,h ML H1及 VHL存在高频率的 L OH提