α粒子诱导人支气管上皮细胞转化相关基因的分离与克隆

目的探索α粒子照射诱导人支气管上皮细胞转化的相关基因,并加以克隆。方法采用了ｍＲＮＡ差异显示技术,通过辐射诱发转化细胞与同代未经照射细胞的对比,找出差异ｃＤＮＡ片段。结果克隆出２ｇｓ３,５ｇｓ１,５ｇｓ２,２ｇｄ１,６ｇｄ１５个差异片段,测序,经文献检索发现除５ｇｓ１外均为新序列,已登录到ＥＭＢＬ库中。结论发现了细胞转化早期的新序列的４个ｃＤＮＡ片段,生物学特性与功能有待研究。     

转化生长因子β1及p53对大鼠气管上皮细胞转化的影响

本义研究转化生长因子β1（TGF-β1）和P53对致癌物转化的大鼠气管上皮（RTE）细胞的影响。结果表明早期转化的RTE细胞（尚未具致癌性）和恶性转化的RTE细胞（已具致癌性）的条件培养基可以抑制原代RTE细胞的集落形成率（CFE）,部分抑制早期转化RTE细胞的CFE,但对恶性转化的RTE细胞无抑制作用。TGF个;中和抗体可以阻断这种抑制作用,表明条件培养基中可能有TGF-β1。转化RTE细胞分泌TGF-β1可使对后者有抗性作用的细胞具有生长优势。为了评价P53对RTE细胞转化的作用,将野生型,突变型P53分别导人早期转化的RTE,研究表明,野生型P53抑制,而突变型P53促进转染细胞的CFE。突变型P53可能增强TGF-β1的分泌,从而促进转染细胞在裸鼠中癌变。本研究表明突变型P53可能通过TGF-β1自分泌或旁分泌途径促进RTE细胞恶性转化。     

建设研究型医院促进转化医学发展

转化医学旨在推动将实验室发现用于临床治疗,已经成为部分国家医学研究部署重点之一,美国国立卫生研究院(NIH)设置临床与转化科学基金,英国健康研究战略协调办公室（OSCHR）确定转化医学研究战略,法国卫生部门启动临床研究项目。我国转化医学研究刚刚起步,表现在创建研究型医院、开展转换医学研讨、成立转化医学研究中心、纳入健康中国科技支撑战略等。本文分析国际转化医学发展过程,结合我国医学研究现状,建议我国设置转化医学专项基金、面向健康需求确定优先领域、改革研究管理方式、依托大型综合医院实施转化医学研究。     

HPV感染与膀胱移行细胞癌相关研究

膀胱癌在我国泌尿男生殖系统恶性肿瘤中居首位,以移行细胞癌(transitional cell carcinoma,TCC)为主。然而其病因与发病饥制尚未完全清楚。HPV-16/18已被确认为宫颈癌的病因之一,鉴于泌尿系统的组织发生和解剖结构与宫颈有相似之处,学者们认为 HPV-16/18感染也可能参与了TCC 的发生。本项研究旨在明确 HPV 感染与膀胱 TCC 发生的关系。根据已往关于中国人关于 HPV 感染主要型别的报道,我们以 HPV-16和 HPV-18为主要研究的 HPV 型别,并参考既往关于证实高危型 HPV 感染是宫颈癌病因的课题设计进行以下几方面的课题研究。1.采用型特异性引物 PCR 扩增方法检测123例散发性膀     

化疗后卵巢癌细胞凋亡、增殖、基因表达的相关性

：探讨化疗后卵巢癌细胞凋亡增殖情况，以及基因与病理分级、化疗疗效的关系。方法：应用末端脱氧核苷酰转移酶（TDT）方法，对50例卵巢癌新鲜组织进行了凋亡检测。应用免疫组化方法检测了卵巢癌细胞增殖变化及bcl-2、bax、突变型p53基因蛋白表达。结果：50例卵巢癌组织中66％（33／50）出现不同程度的凋亡。肿瘤组织增殖及P53蛋白表达与组织分级有关，即低分化的阳性表达率高于高－中分化（P＜0.050。结论：卵巢癌细胞存在着自发性凋亡，而化疗药物诱导卵巢癌细胞的凋亡可能有一定的时限。     

中国人膀胱移行细胞癌中DPC4/Smad4的异常表达

目的：探讨抑癌基因ＤＰＣ４／Ｓｍａｄ４在中国人移行细胞癌中的发生发展过程中的可能作用。方法：选取ＤＰＣ４／Ｓｍａｄ４所在染色体区域１８ｑ２１．１的１８个微卫星位点，对３０例移行细胞癌新鲜癌组织进行分析和精细遗传作图；并用ＤＰＣ４／Ｓｍａｄ４抗体对相应的病理组织切片进行免疫组织化学分析，检测其表达水平。结果：ＤＰＣ４／Ｓｍａｄ４三个紧密联锁的微卫星位点Ｄ１８Ｓ４６、Ｄ１８Ｓ３６３、Ｄ１８Ｓ４７４有高频率的杂合性缺失，分别为６２５％、５７５％、５２８％；１８个微卫星位点中有５个位点在所分析人群…     

应用氨基酸稳定同位素标记-质谱技术构建肺癌细胞14-3-3sigma相互作用的分子网络

目的 筛选14-3-3 sigma在非小细胞肺癌细胞中的功能相关蛋白,构建相互作用的分子网络.方法 构建稳定过表达14-3-3 sigma蛋白的非小细胞肺癌细胞株(PG细胞,大细胞肺癌),采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法检测PG细胞的生长速度.利用稳定同位素标记氨基酸(stableisotope labeling by amino acids in cell culture,SILAC)技术,联合线性离子阱回旋共振质谱仪(LC-LTQ-FT)鉴定由14-3-3 sigma过表达引起的差异表达蛋白,将质谱鉴定为表达＞2倍或＜0.5倍的蛋白作为差异蛋白.通过检索人类蛋白参考数据库(Human protein reference database,HPRD)和蛋白质交互作用网络数据库(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)构建分子网络.结果 显示C4克隆中外源14-3-3 sigma表达量最高(命名为PGSC4),后续实验用PGSC4细胞进行.转染14-3-3 sigma 后,PG细胞生长速度明显减慢.建立了包含147个蛋白差异蛋白的数据库.构建的分子网络中含有26个蛋白,其中参与了多个细胞活动(细胞周期调控、细胞分化、凋亡等)的重要激酶——酪蛋白激酶Ⅱα亚基(casein kinaseⅡsubunit alpha,CSNK2A1)是表达升高最明显的蛋白质,与DNA损伤调节机制相关的转录调节因子MEN1 (Menin)则是表达降低幅度最大的蛋白质.结论 14-3-3 sigma可以抑制非小细胞肺癌PG细胞的生长速度,与细胞周期、DNA损伤修复等机制相关的蛋白质发生了变化,并构成了相互作用的分子网络.     

非小细胞肺癌pl6/CDKN2基因失活的研究

目的：分析中国人非小细胞肺癌中ｐ１６／ＣＤＫＮ２基因失活的情况,探讨该基因在肺癌发生中的作用。方法：选取与ｐ１６基因紧密连锁的Ｄ９Ｓ１７４８位点,对１７例临床切除的原发性肺癌标本进行微卫星不稳定性分析,用甲基化特异性ＰＣＲ（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＰＣＲ, ＭＳＰ）检测 ｐｌ６基因启动子区 ＣｐＧ岛甲基化状况,用免疫组织化学法检测Ｐ１６蛋白表达情况。结果：微卫星不稳定性分析结果表明,在１３例Ｄ９Ｓ１７４８位点存在多态性的肿瘤ＤＮＡ中有 ９例（６９ ．２％）发生了杂合性缺失（ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ, ＬＯＨ）。 ＭＳＰ的结果显示,有 ７０． ６％（１２／１７）的肿瘤组织存在ｐ１６启动子区的异常高甲基化。在本研究中,８２．４％（１４／１７）的肿瘤组织可以检测出一种或两种ｐ１６基因的异常改变。对此１７例肿瘤标本进行的免疫组织化学分析显示,有 １３例 Ｐ１６蛋白表达阴性,其中 ９２ ３％（１２／１３）存在一种或两种ｐ１６基因的异常改变。免疫组化结果与ｐ１６基因分子遗传学改变情况基本吻合。结论：作为一种抑癌基因,ｐ１６在多种肿瘤组织中都有异常改变。我们的研究表明,ｐ１６基因失表达是非小细胞肺癌     

原发性非小细胞肺癌中c—myc癌基因的易位激活

探讨ｃ－ｍｙｃ癌基因的易位激活是否也存在于临床原发性非小细胞肺癌病例中。方法以荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）为主，并结合免疫组织化学的方法，对１２例人原发性肺癌标本进行了ｃ－ｍｙｃ癌基因易位激活的研究。结果１２例原发性肺癌中２例存在ｃ－ｍｙｃ癌基因易位。免疫组织化学结果显示，存在ｃ－ｍｙｃ癌基因易位的病例ｃ－ｍｙｃ蛋白高表达。结论ｃ－ｍｙｃ癌基因易位是导致原发性非小细胞肺癌ｃ－ｍｙｃ癌基因激活的原因之一。