食物加工过程中形成的致突变物和致癌物

流行病学研究表明,人类肿瘤的70～90%是由环境因素所引起。而由人们的饮食习惯,生活方式引起的肿瘤又占其中的40～60%。食物作为一个复杂的复合物,不仅含有人体所必须的营养成份,还可能含有一些对肿瘤的发生、发展产生影响的物质,如致癌,致突变和致畸物质以及抗致癌和抗突变物质。这些物质有的是食物的自身成分,有的是食物加工,贮存过程中添加或形成的,也有的是由于偶然的污染。研究还证明,有些肿瘤的发生及其部位,类型和食物中含有或缺少某些物质有关,如过量食入高脂肪食物易患直肠癌,乳腺癌等。这就提示我们要     

生长因子对人支气管上皮细胞和肺癌细胞生长的影响

MCDB151加多种生长因子的无血清培养基已成功用于培养成人和胎儿支气管上皮细胞及肺癌细胞(腺癌和鳞癌)。用该无血清培养基进行集落形成试验的结果表明,牛垂体提取物、胰岛素和氢化可的松可以促进人支气管上皮细胞及肺癌细胞的增殖,表皮生长因子和转铁蛋白却只刺激正常支气管上皮细胞的生长,而对本实验所检测的肺癌细胞无生长刺激作用。本研究所培养的大部分肺癌标本,在MCDB151完全培养基中加2％胎牛血清时,比不加血清时生长更快、更好。在MCDB151无血清培养基中,低浓度的钙有利于人支气管上皮细胞和肺癌细胞的生长。     

97.非小细胞肺癌病人血浆p16基因异常甲基化的检测

肺癌高死亡率的根本原因在于早期诊断的困难。现代分子肿瘤学的研究进展揭示了在肺支气管上皮癌变过程中发生的多种分子水平异常,使得我们有可能将外周血等容易取得的微创性样品中的分子病理学改变作为肺癌早期诊断的辅助指标。通过以往的研究我们发现,一条等位基因缺失而另一条等位基因异常高甲基化是肺癌组织中抑癌基因p16失活的重要机制之一。在这项研究中,我们利用从非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）病人外周血血浆中提取的DNA分析了P16基因的甲基化状态。采用改进的甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP）的方法,95例NSCLC病人的血浆DNA被检测,其中肺鳞癌59例,肺腺癌36例。作为对照,75例相应的肿瘤组织被同时分析。结果显示,p16基因启动子区高甲基化状态的检出率在血浆中为72．6%（69／95）,而在相应的肺癌组织中为74．7％（56／75）。值得注意的是,血浆DNA p16基因异常甲基化只是从那些肿瘤组织DNA表现p16基因高甲基化的病例中被检出——二者存在极好的符合率。我们还发现,在Ⅰ期病人中,血浆p16基因异常高甲基化在肺鳞癌(82.4%）比在肺腺癌（33.3％）中要高得多（P＜0.005）。从而提示,血浆p16基因异常甲基化有可能成为一项早期发现非小细胞肺癌（尤其是鳞癌）的、非常重要的分子病理学指标。而血浆DNA的MSP则是检测这一指标的敏感、可靠并且便于操作的技术之一,成为一种可以应用于人群筛查的方法。     

非小细胞肺癌p16/CDKN2基因失活的研究

目的：分析中国人非小细胞肺癌中p16／CDKN2基因失活的情况,探讨该基因在肺癌发生中的作用。方法：选取与p16基因紧密连锁的D9S1748位点,对17例临床切除的原发性肺癌标本进行微卫星不稳定性分析,用甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP)检测p16基因启动子区CpG岛甲基化状况,用免疫组织化学法检测P16蛋白表达情况。结果：微卫星不稳定性分析结果表明,在13例D9S1748位点存在多态性的肿瘤DNA中有9例（69．2％）发生了杂合性缺失（loss of heterozygosity,LOH)。MSP的结果显示,有70．6％（12／17）的肿瘤组织存在p16启动子区的异常高基甲基。在本研究中,82．4％（14／17）的肿瘤组织可以检测出一种或两种p16基因的异常改变。对此17例肿瘤标本进行的免疫组织化学分析显示,有13例P16蛋白表达阴性,其中92．3％（12／13）存在一种或两种p16基因的异常改变。免疫组化结果与p16基因分子遗传学改变情况基本吻合。结论：作为一种抑癌基因,p16在多种肿瘤组织中都有异常改变。我们的研究表明,p16基因失表达是非小细胞肺癌中较常见的事件;在这里,杂合性缺失和异常甲基化引起的基因表达沉默为其主要失活机制。     

头颈鳞癌的DNA等位基因微卫星不稳定性分析

DNA等位基因微卫星不稳定性（microsatelliteinstability,MSI）广泛参与肿瘤的发生与发展,是肿瘤常见的遗传学改变之一。某些染色体或某一染色体的某些特定区域在头颈鳞癌（headandnecksquamouscellcarcinoma,HNSCC）发生发展中存在着高频发的MSI。有些MSI常发生于HNSCC的早期。弄清这些与HNSCC有良好相关性并与许多抑癌基因紧密连锁的微卫星有否等位基因缺失或不稳定性将有助于进一步阐明HNSCC的发生与发展机制。     

人支气管上皮细胞和肺癌的无血清培养及生物学性质的研究

一、人上皮细胞无血清培养系统的建立绝大多数人类恶性肿瘤起源于上皮细胞。上皮细胞的无血清培养技术的发展，对研究上皮细胞癌变及其机理具有重要意义。从1986年起，我们实验室先后建立了多种上皮细胞无血清培养系统。利用MCDB151加多种生长因子的无血清培养基，已成功培养了     

新的肺癌候选癌基因RAP2B的鉴定和功能研究初探

背景与目的 RAP2B是我们实验室构建的中国人肺鳞癌差异表达cDNA文库中高表达的基因之一.作为具有保守结构域的Ras超家族成员,RAP2B基因在肿瘤发生发展中的作用仍属未知.本文拟初步探讨RAP2B基因在肺癌中的作用及其机制.方法 应用半定量RT-PCR方法检测了27例手术切除的肺鳞癌肿瘤组织和相应的癌旁组织中RAP2B基因的表达;结合生物信息学分析克隆全长ORF区并转染大鼠Rat1细胞,观察转化灶形成情况;采用NF-kappaB信号通路特异的报告基因观察RAP2B基因对NF-kappaB通路的影响.结果 RAP2B mRNA在约67%(18/27)的肺鳞癌配对组织中肿瘤较癌旁组织高表达;成功构建了RAP2B的真核表达质粒;平板转化实验显示转染RAP2B基因的细胞出现明显转化灶;通路报告基因分析显示RAP2B能够明显激活NF-kappaB通路.结论 RAP2B基因在肺癌患者的肿瘤组织高表达,在体外具有恶性转化Rat1细胞能力,提示其为候选癌基因,并且可能通过激活NF-kappaB信号通路在肺癌发生发展中发挥作用.     

DENND2D通过调控PARP1对非小细胞肺癌细胞系H1299中顺铂细胞毒性的影响

目的： 检测肺癌细胞系H1299细胞中DENN/MADD domain containing 2D (DENND2D)基因过表达对顺铂细胞毒性的影响,并初步探讨其机制。方法：应用瞬时和稳定转染两种方法使H1299细胞外源过表达DENND2D基因,以空载体组作为对照组,应用CCK-8比色法检测不同浓度顺铂作用下H1299细胞的存活情况,据此计算出IC50值。利用Western blot方法检测外源过表达DENND2D的H1299细胞多聚ADP核糖聚合酶 [poly (ADP-ribose) polymerase-1,PARP1]的表达情况。利用顺铂处理外源过表达DENND2D的H1299细胞,并检测不同处理时间点 (0、1、2、4和8 h)H1299细胞多聚ADP核糖[poly (ADP-ribose),PAR]的表达情况。结果：顺铂对外源过表达DENND2D基因的H1299细胞毒性明显高于空载体组 (IC50值降低,P＜0.05)。外源过表达DENND2D的H1299细胞PARP1蛋白和PAR蛋白的表达均比空载体对照组低,且空载体对照组PAR的表达随时间推移呈上升趋势,而外源过表达DENND2D组则呈下降趋势。结论：DENND2D可能通过对PARP1的调控增强了顺铂对肺癌细胞系H1299的细胞毒性。