烧伤后肠源性高代谢研究--高代谢及内毒素

目的 :探讨烧伤后高代谢与内毒素的关系。　方法 :观察了 4 0例严重烧伤病人 ,烧伤总面积达 (45±11.3) % ,其中深度烧伤为 (2 9.7± 10 .4 ) %。观察指标为静息能量消耗 (REE)、血浆内毒素、丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化酶 (SOD)、肿瘤坏死因子 (TNF)、白细胞介素 8(IL 8)、高血糖素、皮质醇、血清二胺氧化酶 (DAO)及尿乳果糖 /甘露醇比值 (L/M)、尿儿茶酚胺。　结果 :①烧伤后 1～ 14天观察期间 ,REE与血浆内毒素、TNF、IL 8、高血糖素呈显著相关 (r分别为 0 .5 985、0 .92 36、0 .8381、0 .85 17,P分别为 0 .0 14 3、0 .0 0 11、0 .0 0 94、0 .0 0 73) ;血清DAO与血浆SOD呈显著负相关 (r=- 0 .7871,P =0 .0 2 0 4 ) ,尿L/M与血浆SOD、MDA亦呈显著相关 (r =- 0 .9114、0 .94 4 5 ,P=0 .0 0 16、0 .0 0 0 4 )。②复苏期后 (伤后 4～ 14天 ) ,REE与SOD呈显著负相关 (r=- 0 .7180 ,P <0 .0 5 )。　结论 :烧伤后高代谢与内毒素、TNF、IL 8、高血糖素有关 ,伤后肠道损伤与早期缺血 再灌注损伤有关 ,血内毒素增高可能与肠道损伤所致的肠道内毒素移位有关。     

不同剂量L-精氨酸对严重烧伤患者辅助性T淋巴细胞型细胞因子的影响

目的 了解不同剂量L-精氨酸对严重烧伤患者血清辅助性T淋巴细胞1(Th1)/Th2型细胞因子水平的影响.方法 选择笔者单位收治的伤后20 h内入院、烧伤总面积为50%～80%TBSA的患者29例,按随机数字表法分为对照组[10例,经鼻肠管给予葡萄糖盐水500 mL(含50 g/L葡萄糖及9 g/L氯化钠,下同)]、L-精氨酸200 mg组(10例,经鼻肠管给予L-精氨酸200 mg/kg+葡萄糖盐水500 mL)、L-精氨酸400 mg组(9例,经鼻肠管给予L-精氨酸400 mg/kg+葡萄糖盐水500mL).于伤后1 d(行肠内营养前)及3、5、7 d,取各组患者空腹静脉血,用放射免疫法及酶联免疫吸附测定法检测血清Th1型细胞因子TNF-α、IL-1β和Th2型细胞因子TGF-β_1、IL-4含量.结果 各组患者血清TNF-α及IL-1β含量伤后均呈快速上升趋势,L-精氨酸200 mg组血清TNF-α及IL-1β含量伤后5 d达高峰[(318±57)ng/mL、(218±47)pg/mL],但仍显著低于同时相点对照组[(389±34)ng/mL、(272±40)pg/mL,P<0.05],伤后7 d此2种细胞因子含量下降;L-精氨酸400 mg组各时相点血清TNF-α及IL-1β含量与对照组相近(P>0.05).各组患者血清TGF-β_1及IL-4含量伤后呈较缓慢上升趋势;伤后5 d,L-精氨酸200 mg组血清TGF-β_1含量为(110±16)pg/mL,显著高于对照组[(83±20)pg/mL,P<0.05],L-精氨酸400mg组各时相点血清TGF-β_1含量与对照组相近(P>0.05).结论 在严重烧伤患者感染期,相对于400 mg/kg的用量,200 mg/kg的L-精氨酸通过调节血清Th1/Th2型细胞因子释放,能更有效地保持两者之间的比例,从而产生更好的免疫调理作用.     

肌球蛋白轻链激酶介导缺氧后肠上皮屏障功能紊乱的研究

目的 了解肌球蛋白轻链激酶(MLCK)在缺氧后肠上皮屏障功能损害中的作用.方法 建立单层肠上皮细胞缺氧模型,根据缺氧时间不同将细胞分为正常对照组(缺氧0 h),缺氧2、6、8、12、24 h组,(5-氯萘-1-磺酰)-1-六氢-1,4-双苯妥英钠(ML-9)处理组(缺氧6 h并用终浓度为100μmol/L的MLCK特异性抑制剂ML-9处理).用电阻仪测定单层肠上皮细胞跨细胞电阻(TER);免疫荧光法检测单层肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1的变化;蛋白质印迹法检测肠上皮细胞磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)及MLCK蛋白表达.结果 缺氧6、8、12、24 h组单层肠上皮细胞TER值分别为(422±17)、(427±27)、(403±40)、(426±22)Ω,均低于正常对照组[(451±27)Ω,P<0.05],ML-9处理组为(558±110)Ω,显著高于各单纯缺氧组(P<0.01).缺氧6 h组单层肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1发生明显改变,主要表现为不规则,出现明显皱褶、圆滑排列程度减弱,甚至有断裂及锯齿等不连续现象.ML-9组肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1近似于正常对照组,排列较规则,皱褶及锯齿状改变较单纯缺氧组减少或消失.各单纯缺氧组肠上皮细胞MLCK、p-MLC蛋白表达水平均较正常对照组增加.结论 MLCK可介导缺氧引起的肠上皮屏障功能紊乱.     

肠道喂养和静脉营养对烧伤早期肠道复苏和修复的效应

肠道喂养与静脉营养两者各有利弊 ,在临床营养支持时 ,两者应结合应用。从本系列实验 30 % °大鼠烧伤以及5 0 %成人烧伤来看 ,早期肠道喂养组对改善肠粘膜血流量、肠道血管通透性及血液流变性 ;降低 REE,改善肠粘膜能荷 ,提高肠粘膜细胞线粒体 态呼吸率、呼吸控制率及磷氧比 ,提高肠组织氧摄取率及肠粘膜 p Hi,降低细胞内游离 Ca2 + ;减轻肠粘液层、粘膜变薄、绒毛变短、隐窝变浅、肠粘膜 PD下降、L/M升高、血清 DAO升高 ,降低血浆、肠道、肠粘膜细胞线粒体 MDA以及血浆内毒素、TNF;提高血清蛋白及肠粘膜 DNA、RNA、氮量 ,降低…     

直肠腺癌原发灶体素内不相干运动扩散加权成像参数联合纹理分析术前预测非肿大淋巴结转移的价值

目的:探讨直肠腺癌原发灶的体素内不相干运动扩散加权成像（IVIM-DWI）参数联合T 2WI纹理分析术前预测短径≤9 mm淋巴结转移的价值。 方法:回顾性收集2015年6月至2020年10月安徽医科大学附属省立医院经手术病理证实的115例直肠腺癌患者,所有患者均接受直肠常规MRI和IVIM-DWI...     

α变形菌纲磁螺菌属TaqMan探针实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

目的建立一种快速有效检测环境中α变形菌纲磁螺菌属细菌的方法。方法本研究以α变形菌纲磁螺菌属保守且特异的16SrRNA片段为靶序列,化学合成基因序列,制备重组质粒作为磁螺菌属检测的标准品;用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术,针对目的片段基因设计特异性引物和TaqMan荧光探针,进行实时荧光定量PCR检测,运用统计学方法评价该方法的特异性、敏感性及重复性。结果本实验成功构建了质粒PUC19-QC,引物、探针特异性良好,标准曲线在5.10×101~5.10×107拷贝数之间具有较好的线性关系,相关系数R2=0.999。该法最低可检测到5.10×10个DNA拷贝数,灵敏度明显高于普通PCR;重复性试验表明,荧光定量PCR检测结果 Ct值波动范围较小,Ct值的标准差均小于0.23,表明该法重复性好,可靠性高。析因方差分析表明不同稀释度之间的Ct值差异有统计学意义(F=3 125.305,P0.001),三个批次的再现性良好,差异无统计学意义(F=0.057,P=0.945),而浓度分组与时间之间也无交叉效应(F=0.533,P=0.873)。结论本实验所建立的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测技术,能够快速有效地检测α变形菌纲磁螺菌属细菌,且检测结果稳定,受外界条件如时间、气温等影响小。     

头颈部及胸部髓外浆细胞瘤影像学征象分析

目的总结分析头颈部及胸部髓外浆细胞瘤影像学表现特点,提高对该病的影像学诊断及鉴别诊断的能力。方法回顾性分析经病理证实6例髓外浆细胞瘤病例影像学资料。结果 6例病例中,肿块位于口咽部1例、鼻腔2例、肺内2例、纵隔1例。CT表现为软组织密度肿块,边界清楚,密度多均匀,增强扫描中等度-明显强化,且肿瘤周边可见增粗血管影;MRI表现为等或稍长T1,等或稍长T2信号,DWI像扩散受限明显,部分病灶内可见低信号分隔,肿瘤坏死不明显,增强扫描明显均匀性强化。结论髓外浆细胞瘤具有一定的影像学特点,但缺乏特异性,确诊需病理活检;术前CT及MRI检查能明确病变范围、临近组织及淋巴结受累情况,对该病的早期诊治、疗效评估有重要意义。     

谷氨酰胺对烧伤大鼠肠上皮细胞线粒体呼吸功能的影响

目的　研究谷氨酰胺对烧伤大鼠肠上皮细胞线粒体呼吸功能的影响。方法　采用 30 %体表面积 度烧伤大鼠模型 ,随机分成伤前对照 (C)组、普通肠道营养 (EN)组及谷氨酰胺强化的肠道营养 (GL N )组。EN和 GL N组除是否给予谷氨酰胺外 ,其它条件均相同。分离肠上皮细胞线粒体 ,观察烧伤后各组线粒体呼吸控制率 (RCR)、磷氧比 (P/O)、肠黏膜血流量 (IMBF)及肠道氧摄取率 (Oext)的变化。结果　烧伤后各组线粒体 态呼吸率 (ST3)明显下降 , 态呼吸率 (ST4 )升高 ,RCR显著降低。两组相比 ,GL N组变化幅度较小 ,同时其 IMBF和 Oext也明显高于 EN组。结论　严重烧伤后肠黏膜血流量下降 ,肠道 Oext降低 ,肠上皮细胞线粒体呼吸功能受损 ,氧化磷酸化失耦联。 GL N能改善肠道血供 ,增加 Oext,减轻肠上皮细胞线粒体呼吸功能受抑程度。     

α变形菌纲磁螺菌属TaqMan探针实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

目的建立一种快速有效检测环境中q变形菌纲磁螺菌属细菌的方法。方法本研究以α变形菌纲磁螺菌属保守且特异的16SrRNA片段为靶序列,化学合成基因序列,制备重组质粒作为磁螺菌属检测的标准品;用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）技术,针对目的片段基因设计特异性引物和TaqMan荧光探针,进行实时荧光定量PCR检测,运用统计学方法评价该方法的特异性、敏感性及重复性。结果本实验成功构建了质粒PUC19-QC,引物、探针特异性良好,标准曲线在5．10×10^1～5．10×10^7拷贝数之间具有较好的线性关系,相关系数R2=0．999。该法最低可检测到5．10x10个DNA拷贝数,灵敏度明显高于普通PCR;重复性试验表明．荧光定量PCR检测结果Ct值波动范围较小,α值的标准差均小于0．23,表明该法重复性好,可靠性高。析因方差分析表明不同稀释度之间的ct值差异有统计学意义（F=3125．305,P〈0．001）,三个批次的再现性良好,差异无统计学意义（F=0．057,P=0．945）,而浓度分组与时间之间也无交叉效应（F=0．533,P=0．873）。结论本实验所建立的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测技术,能够快速有效地检测仅变形菌纲磁螺菌属细菌,且检测结果稳定,受外界条件如时间、气温等影响小。     

胰高血糖素样多肽2受体上调表达的Caco2细胞株克隆转染与筛选鉴定

目的建立胰高血糖素样多肽2受体(glucagon like peptide-2 receptor,GLP-2R)上调表达的Caco2细胞株。为研究GLP-2肠道保护机制构建体外模型。方法常规扩增抽提GLP-2R／pcDNA 3．1质粒,经酶切、测序鉴定正确后,用脂质体转染法将其转染至Caco2细胞。G418抗性筛选,挑选耐药细胞克隆培养获得稳定细胞株。以HER293细胞、VE细胞、正常Caco2细胞及正常人小肠组织为对照,采用逆转录聚合酶链反应与蛋白质印迹法检测稳定转染细胞中mRNA及其蛋白的表达。结果扩增抽提GLP-2R／pcDNA 3．1质粒后经酶切、测序结果正确。GLP-2R mRNA及其蛋白在HER293细胞及VE细胞中无表达,在正常Caco2细胞中表达微弱,在人小肠组织中有较强表达;转染CLP-2R后,Caco2／GLP-2R( )细胞中GLP-2R mRNA及其蛋白表达明显增强。结论GLP-2R分布具有相对特异性,正常Caco2细胞中GLP-2R表达较弱;构建的Caco2／GLP-2R( )细胞模型成立,为深入研究GLP-2的作用机制奠定了良好基础。