融合蛋白TNFR1/DED介导舌癌细胞凋亡的实验研究

目的 :构建含FADD及TNFR1基因功能结构域的融合基因TFL ,稳定转染入舌癌细胞后 ,通过体内、外实验初步观察融合蛋白TNFR1/DED在重组人肿瘤坏死因子 α(rhTNF α)作用下介导舌癌细胞凋亡的效应。方法 :反转录及重组PCR构建融合基因TFL ;鉴定融合蛋白TNFR1/DED在建系舌癌细胞T TFL中的表达 ,通过MTT法、形态学观察、DAN片段及体内抑瘤实验 ,观察融合蛋白TNFR1/DED介导舌癌细胞凋亡的效应。结果 :获得了人FADD及TNFR1基因并构建成功融合基因TFL ,转染入Tca 8113细胞后 ,能表达融合蛋白TNFR1/DED活性 ,体外实验观察到rhTNF α可有效地杀伤舌癌细胞 ,体内可明显抑制移植瘤的生长 ,且荷瘤动物内脏器官无病理性改变。结论 :融合蛋白TNFR1/DED可有效地介导舌癌细胞凋亡 ,为舌癌基因治疗研究提供实验基础。     

流式细胞仪实时监测细胞内Ca^2＋浓度变化

背景：多种信号转导途径可影响细胞内Ca2＋浓度的变化,因而对细胞内钙离子变化的检测,有助于了解细胞功能的启动、加强或抑制。目的：利用流式细胞术实时监测细胞内钙离子浓度的动态变化。方法：选取健康人新鲜全血,用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,使用Ca2＋荧光指示剂Fluo-3/AM负载淋巴细胞,加入CD3单克隆抗体和CD28单克隆抗体刺激淋巴细胞活化,以流式细胞仪动态监测活化淋巴细胞内Ca2＋的浓度变化。结果与结论：T淋巴细胞在静息状态时,钙离子的荧光值平稳,显示为基线;加入抗CD3单克隆抗体和抗CD28单克隆抗体后,T淋巴细胞被活化,钙离子的浓度迅速升高,持续大约两三分钟后下降,逐渐趋向平缓。结果提示采用钙离子指示剂Fluo-3负载细胞与流式细胞术分析可以跟踪细胞内钙离子的动态变化,成为钙离子动态变化监测的有效方法。     

流式细胞术在血小板因子4保护环磷酰胺损伤小鼠骨髓中的应用价值

 目的 探讨流式细胞术在研究血小板因子4(PF 4)保护环磷酰胺(CTX)损伤小鼠骨髓造血细胞中的应用价值。方法 腹腔一次性注射CTX 200mg／kg,造成药物损伤模型。给CTX前予以PF 4预处理,于给药后第5天、第8天分别用流式细胞仪测定骨髓有核细胞DNA含量及细胞周期变化。结果 第5天PF 4保护组的骨髓有核细胞中,G0／G1期细胞百分率较CTX组明显提高,坏死、凋亡率下降(P＜0.01),而与对照组基本相同(P＞0.05)。第8天各组间比较无明显差异(P＞0.05)。结论PF 4对CTX损伤的小鼠骨髓造血细胞有保护作用。通过流式细胞仪测定DNA含量及细胞周期变化可阐明其化疗保护作用机制,表明流式细胞术具有重要的应用价值。     

尿素-SDS-PAGE快速测定多肽的相对分子质量

随着电泳技术的不断改进和完善,该技术已成为现代分子生物学实验不可缺少的基本实验技术之一。然而进行小分子多肽的电泳分析时,由于其相对分子质量（Ｍｒ）小,易受电泳条件（电泳缓冲系统、凝胶浓度、电泳时间、染色和脱色等）的影响,极易引起条带扩散、不易着色,使分辨率降低,因而直接影响多肽Ｍｒ的测定。现有多肽Ｍｒ的电泳测定法［１,２］操作复杂,且结果也不理想。因此,我们经反复实验,建立了对Ｍｒ为２ ５００－１７ ０００多肽的尿素－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ快速测定法。１材料和方法１．１材料 ＥＣＰ－３０００电泳仪为北京…     

呋喃丙吡啶对心肌顿抑兔心肌肾素、血管紧张素Ⅱ及去甲肾上腺素的影响

目的研究心肌局部肾素、血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）及去甲肾上腺素（ＮＥ）在心肌顿抑发病中的作用，以及呋喃丙吡啶（Ｆ３）对心肌顿抑是否具有保护作用。方法采用冠状动脉结扎法建立兔心肌顿抑模型，用放射免疫法测定肾素、ＡｎｇⅡ及ＮＥ的变化，缺血前用呋喃丙吡啶静脉给药。结果心肌缺血后局部肾素活性有升高趋势，再灌注后心肌局部肾素活性显著高于正常对照组。心肌局部ＡｎｇⅡ含量明显高于正常对照组。心肌ＮＥ含量明显升高。缺血前静脉推注呋喃丙吡啶可以降低心肌顿抑时心肌局部ＡｎｇⅡ及ＮＥ的产生。结论心肌局部肾素，ＡｎｇⅡ及ＮＥ在心肌顿抑的发病中具有重要意义，缺血前静脉应用呋喃丙吡啶防治可能是有益的。     

妊高征孕妇血小板胞质游离钙的水平

0　引言　妊高征的发病机制不明 ,钙代谢异常与妊高征关系密切 .我们通过对妊高征患者静息血小板胞质游离钙水平的测定 ,来了解妊高征的细胞内钙代谢变化 ,探索其病理生理机制 .1　对象和方法1.1　对象　随机选择 1999- 0 6 /2 0 0 0 - 0 1在西安市第四医院产科住院分娩的 30例妊高征孕妇 (妊高征组 ) ,其中轻度 16例 ,中度 8例 ,重度 6例 .以同期住院的 2 0例正常晚孕妇女 (对照组 )作对照 .妊娠妇女均为单胎、初产妇 ,年龄 2 2～ 39岁 ,孕周 35～ 42 wk,无心、肺、肾、糖尿病及高血压病史 .两组在取标本前至少 2 wk内未接受硫酸镁、钙剂、…     

白介素8受体免疫阳性细胞在大鼠消化道的分布

目的 观察白介素-8受体（IL-8R）免疫阳性物质在大鼠消化道的存在和分布。方法 运用免疫组织化学方法对5只2-3mo龄雄性SD大鼠胃肠道进行形态学观察。结果 IL-8R免疫阳性物质广泛分布于正常大鼠消化道管壁的粘膜层内,细胞形态不一,大部分呈柱状或锥形,散在分布于腺上皮间。部分呈圆形或椭圆形,散在于粘膜固有层内。结论 首次证明IL-8R分布于消化道粘膜上皮细胞,提示IL-8在消化道局部可能具有生理调节作用。     

用图像分析作交点计数的尝试

目的;探讨如何利用图像分析仪定量测量血管表面神经纤维密度。方法：对相同视野中的神经纤维分别采用灰度法和交点计数法进行测量,然后分析二者之间的函数关系,为进行统计学分析。结果：建立了测量血管表面神经纤维密度的灰度法和交点计数法之间的对数关系进行验证。结论：在图像分析仪上可以利用灰度法测量进行神经纤维密度的定量分析。     

人涎腺黏液表皮样癌多药耐药细胞系的建立及其生物学特性

目的：建立一种耐药性稳定的人涎腺黏液表皮样癌细胞株（MEC/5-FU）,为研究其耐药机制和逆转药物的筛选奠定实验基础。方法：采用浓度递增法联合大剂量冲击诱导方法,建立稳定的MEC/5-FU。应用MTT法、RT-PCR、罗丹明123蓄积试验等方法检测该细胞株的耐药性能及其生物学特性。结果：MEC/5-FU耐药性能稳定,对5-FU的耐药倍数达到36.11,并且对其他几种化疗药物表现不同程度的交叉耐药性。RT-PCR显示耐药相关基因ABCA2、ABCB1、ABCB11、ABCC1、ABCC4等ABC家族基因在MEC/5-FU细胞中明显高表达。罗丹明123在MEC/5-FU细胞中的蓄积量远低于MEC细胞。结论：MEC/5-FU具有多药耐药特性,为人涎腺黏液表皮样癌耐药机制和耐药逆转研究提供了理想的实验模型。     

流式细胞仪实时监测细胞内Ca2+浓度变化

背景：多种信号转导途径可影响细胞内Ca2+浓度的变化,因而对细胞内钙离子变化的检测,有助于了解细胞功能的启动、加强或抑制。 目的：利用流式细胞术实时监测细胞内钙离子浓度的动态变化。 方法：选取健康人新鲜全血,用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,使用Ca2+荧光指示剂Fluo-3/AM负载淋巴细胞,加入CD3单克隆抗体和 CD28单克隆抗体刺激淋巴细胞活化, 以流式细胞仪动态监测活化淋巴细胞内Ca2+的浓度变化。 结果与结论：T淋巴细胞在静息状态时,钙离子的荧光值平稳,显示为基线;加入抗CD3单克隆抗体和抗CD28单克隆抗体后,T淋巴细胞被活化,钙离子的浓度迅速升高,持续大约两三分钟后下降,逐渐趋向平缓。结果提示采用钙离子指示剂Fluo-3负载细胞与流式细胞术分析可以跟踪细胞内钙离子的动态变化,成为钙离子动态变化监测的有效方法。