32例造血干细胞移植患者出血的防治

目的研究造血干细胞移植患者出血并发症的防治措施.方法对32例行造血干细胞移植的血液病患者进行回顾性分析,观察其在移植后骨髓空虚期采用的防治出血措施的疗效.结果除1例伴有脾脏肿大的重型β地中海盆血患儿(行无关供者脐血移植)出血症状无好转,血小板数量无明显提高,最终死于颅内出血外,其余31例患者的出血症状均很快得以控制,血小板数量上升,安全度过无髓期.结论在造血干细胞移植后骨髓空虚期,及时采用输注新鲜单采血小板、应用止血药物及糖皮质激素等措施,能够有效控制患者出血并发症的发生.     

脐血造血细胞体外扩增巨核细胞的研究

目的探讨在体外用不同的细胞因子组合在不同的培养时间对脐血CD 34+细胞向巨核系分化以及扩增的作用.方法细胞因子分为TPO(T)、TPO+SCF+IL-6+IL-3(TS36)、TPO+SCF+IL-6+IL-3+FL(TSF 36)等3组.将脐血CD 34+细胞在体外经14 d的诱导分化和扩增,在扩增后通过流式细胞仪、集落培养和免疫组化等方法检测培养物中CD41+细胞百分率、扩增倍数和巨核祖细胞集落形成单位(CFU-MK)产率和扩增倍数以发现较好的细胞因子组.并比较了TSF 36组细胞因子在第7 d和第14d时的CD 41+细胞百分率及CFU-MK产率及它们的扩增倍数.结果CD 41+细胞占培养细胞的比率3组细胞因子在14 d分别为77.5±3.5%、14.4±3.2%、21.3±1.7%;CD 41+细胞扩增倍数3组细胞因子分别为75.2±13.2倍、212.4±70.8倍、378.6±74.7倍;每104个细胞可形成CFU-MK分别为56.7±7.0个、22.0±3.0个、24±4.0个;扩增倍数分别为5.9±2.3倍、14.6±0.6倍、19.5±2.4倍.TSF 36组细胞因子在扩增CFU-MK和CD 41+细胞方面均有最强的作用,其第14 d的CD 41+细胞百分率及CFU-MK产率均低于第7 d,但扩增倍数均高于第7 d.结论TSF 36细胞因子组合能使脐血CD34+细胞向巨核系进行分化和大量扩增,其巨核细胞扩增倍数第14 d高于第7 d,但巨核细胞纯度降低.这一结果进一步为临床应用巨核细胞体外扩增回输提供了实验基础.     

复方黄连处理后HNE1鼻咽癌细胞移植瘤的基因表达

背景复方黄连能够抑制鼻咽癌细胞移植瘤的生长,但其作用的机制并不很清楚.目的探讨复方黄连抑制鼻咽癌细胞移植瘤生长的机制.设计随机对照的实验研究.地点、材料和方法实验在中南大学湘雅医学院动物实验中心完成.实验选用10只Balb/C裸鼠,鼠龄3～4周.饲养1周后,在每只裸鼠的前腋下接种0.5 mL(0.5×107个)HNE1细胞.移植瘤形成后,根据移植瘤的大小,按数字法将裸鼠随机分成实验组和对照组,每组5只.实验组灌喂复方黄连,对照组裸鼠仅灌喂无菌水.从瘤组织提取RNA,经返转录荧光标记作为探针与cDNA芯片杂交后用激光共聚焦扫描仪分析基因表达并通过返转录-聚合酶链式反应技术进一步证实基因的表达.主要观察指标复方黄连处理后HNE1鼻咽癌细胞移植瘤的基因表达.结果复方黄连处理30 d后,移植瘤明显减小,同时有335条基因的表达发生改变,即242条基因表达下调和93条基因表达上调.通过RT-PCR分析,6条基因证实为真正差异表达.其中,MAD3,H731和EGR-α基因mRNA表达增高,而TRAF5,P68激酶和CHK1基因mRNA的表达下降.结论复方黄连能够抑制HNE1鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长,对HNE1鼻咽癌裸鼠移植瘤的抑制作用可能与基因表达的改变有关.     

甲型血友病携带者妇女出血倾向和因子Ⅷ分析

甲型血友病携带者妇女出血倾向和因子Ⅷ分析湖南医科大学附属湘雅医院吴新华，曾文洁，解勤之，陈方平甲型血友病（凝血因子Ⅷ缺乏症）为性联隐性遗传疾病，通常男性患病，女性为携带者，由于不同血友病基因缺陷部位不同导致外显率不一［１、２］，携带者Ⅷ：Ｃ活性变化较...     

腺相关病毒载体介导的人凝血因子Ⅸ基因在CD34+造血干/祖细胞中的表达

目的 研究2型重组腺相关病毒（rAAV-2）介导的人凝血因子Ⅸ（hFⅨ）基因在脐血CD34^＋细胞及其子代细胞巾的表达。方法 采用rAAV-2／hFⅨ转导经预刺激的人脐血CD34^＋细胞，分别向粒单系、巨核系和红系分化培养21d，从转录水平、蛋白质水平和其功能活性检测hFⅨ的表达，同时检测子代细胞的活力、增殖倍数、各系标志分化抗原的表达及集落产率来评估rAAV-2对其增殖分化能力的影响。结果 经测序证实转导组子代细胞的RNA可扩增出hFⅨ cDNA片段，上清液中可检测到hFⅨ抗原的表达，每24h分泌量达14.10ng／10^6细胞．转导组和未转导组细胞培养21d后其活力、增殖倍数、标志性分化抗原的阳性率及集落产率差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。结论 rAAV-2／hFⅨ能有效地转导人脐血CD34^＋细胞并在其子代细胞中表达具有凝血活性的hFⅨ，且对其体外培养21d的细胞增殖分化能力无明显影响.     

以急性造血功能停滞为首发表现的急性非淋巴细胞白血病一例

患者 ,男 ,6 0岁。因头昏、乏力半月 ,发热 1周入院。查体 :贫血貌 ,全身皮肤无出血点 ,浅表淋巴结不肿大 ,胸骨无压痛 ,肝、脾肋缘下未及。白细胞 0 .9× 10 9/Ｌ ,血红蛋白 6 7ｇ/Ｌ ,血小板 12× 10 9/Ｌ ,网织红细胞 0 .0 0 4。骨髓象 :有核细胞增生极度减低 ,粒系 0 .0 5 0 ,红系 0 .0 5 0 ,淋巴细胞、浆细胞比值相对增多 ,巨核细胞未见。经康力龙等治疗半月 ,症状消失。血常规 :白细胞 4 .8× 10 9/Ｌ ,中性粒细胞 0 .70 ,淋巴细胞 0 .30 ,血红蛋白 10 4ｇ/Ｌ ,血小板 16 4× 10 9/Ｌ。骨髓象 :有核细胞增生明显活跃 ,粒系 0 .312 ,红…     

腺病毒受体在不同白血病细胞中的表达及意义

高效转移目的基因进入细胞,尤其是处于非分裂静止期的细胞,是基因治疗至关重要的步骤.由于腺病毒载体(Ad-Vec)具有制备简便、宿主范围广、感染性强、包装容量大、病毒繁殖滴度高和安全性好的特点,因此,AdVec已成为继逆转录病毒载体后被广泛应用的载体系统.然而,我们以往的研究发现,传统的以5型腺病毒为基础构建的AdVec即AdSVec很难高效感染多种不同的白血病细胞如K562细胞,但是,它们均能被新型嵌合的AdVec即Ad5F35AdVec有效感染[1].为进一步探讨其机制,我们分析了腺病毒受体(CAR)在不同白血病细胞中的表达.     

重组AAV2/hFⅨ病毒制备及其基因治疗血友病B的实验研究

目的　制备携带人凝血因子Ⅸ (hFⅨ )基因的重组AAV2病毒 (rAAV2 /hFⅨ ) ,并对用rAAV2 /hFⅨ肌肉注射治疗血友病B模型小鼠的疗效进行评价。方法　通过“一株载体细胞 /一株辅助病毒”的双因素包装策略制备出rAAV2 /hFⅨ ,体外转导BHK 2 1、C2C12细胞后 ,检测细胞培养上清中hFⅨ的表达量 ;肌肉直接注射血友病B模型小鼠后 ,检测其血浆中hFⅨ的抗原水平和凝血活性等指标。结果　转导 2 4h后在细胞上清中即可检测到hFⅨ ,连续检测 12 0h都有表达 ,BHK 2 1、C2C12细胞 2 4h最高表达量分别达到 (5 1.0± 6 .5 )ng/ 10 5细胞和 (6 8.0± 7.2 )ng/ 10 5细胞。rAAV2 /hFⅨ经肌肉直接注射后 ,高、中、低三个剂量组均能检测到小鼠体内高效表达hFⅨ ,在给药后第 3周达到高峰 ,小鼠血浆中hFⅨ的表达量与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 1) ,之后缓慢下降 ,到第 10周仍可检测到低水平hFⅨ表达 ;取第 3周小鼠血浆样品检测凝血功能 ,高、中、低剂量组FⅨ活性均得到明显改善 ,小鼠的割尾实验出血时间明显缩短 ,5min失血量也相应显著减少 ,其中高剂量组hFⅨ最高表达量达到 (387.0± 12 .5 )ng/ml血浆 ,FⅨ活性达到正常水平的 (30 .0± 5 .5 ) % ;给药后第 10周 ,除在注射点外 ,其它主要脏器均未检测到AAV载体DNA。结论     

弥散性血管内凝血早期诊断的实验研究

目的：探索弥散性血管内凝血(DIC)早期诊断的实验指标。方法：采用EMSA双抗体夹心法测定血浆凝血酶原片段l 2(F1-2)、D-二聚体(D-D)，采用免疫浊度法测定血清抗凝血酶Ⅲ(AT—Ⅲ)。结果：各期DIC组患者血浆F1 2、D-D含量均显著升高，AT—Ⅲ含量显著降低，且与可疑DIC组及正常对照组比较差异均有极显著性意义(P＜0．01)。在早期DIC组中，F1 2阳性率为l00％，D-D及AT—Ⅲ阳性率为93．8％，敏感性远远高于DIC常规实验室检查。结论：F1 2、AT—Ⅲ、D-D是能早期反映体内凝血、抗凝及纤溶系统激活的敏感性指标之一，在DIC早期诊断中有着重要实用价值。     

一变异型血小板症无力症的临床特点及家系分析

本文报道一例产时大出血患者,血小板对ADP、肾上腺素和胶原无聚集反应,膜糖蛋白Ⅱ_b—Ⅲa含量正常.家系调查其父、弟、妹和儿子等4人均有出血症状,血小板聚集不良而膜糖蛋白Ⅱ_b—Ⅲa正常,并经SDS—PAGE分析和扫描结果无异常.作者认为系一变异型血小板无力症.