2013年全国175家临床实验室检测抗中性粒细胞胞浆抗体的比对分析

目的通过全国多中心实验室自身抗体检测比对活动,了解国内抗中性粒细胞胞浆抗体的检测水平现状,以提高检测质量。方法由卫生公益性行业科研专项“风湿免疫病诊疗关键技术临床推广及转化应用研究”项目组(以下称“项目组”)制备自身抗体比对样品(液体血清),向全国175家自愿报名参加抗中性粒细胞胞浆抗体检测的实验室发放比对品。比对品包含抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)阳性或阴性、抗髓过氧化物酶(MPO)抗体阳性或抗蛋白酶3(PR3)抗体阳性,共计1组5支血清。由项目组统一寄送至各实验室。要求各实验室在规定时间内完成检测,并将结果上传至项目组。采用Excel软件对检测结果进行统计分析。结果参加ANCA,抗MPO抗体及抗PR3抗体检测比对工作的实验室数目分别为134家,148家和148家。ANCA,抗MPO抗体及抗PR3抗体比对品检测结果阳性符合率分别为90.8%,98.0%和98.0%,阴性符合率分别为94.4%,96.1%和98.8%。间接免疫荧光法为国内实验室检测ANCA的主要方法,但回报的结果符合率参差不齐,荧光模型回报率尚不理想,仅为77.9%。结论2013年全国实验室检测ANCA比对品的阳性符合率尚不理想,且应用IIF法检测ANCA时荧光模型回报率不高。抗MPO抗体及抗PR3抗体比对结果较为满意。ANCA检测质量仍有待提高。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞FCGR3A和TYROBP mRNA的表达及其临床意义

目的通过研究原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中免疫球蛋白G Fc段受体Ⅲa(Fc fragment of IgG,low affinity Ⅲ a,receptor,FCGR3A)和酪氨酸激酶结合蛋白(tyrosine kinase binding protein,TYROBP)mRNA的表达,探讨FCGR3A和TYROBP在PBC发病机制中的作用及临床意义。方法采用实时荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR检测80例PBC、55例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis type B,CHB)和68名健康对照者(healthy control,HC)PBMC中FCGR3A和TYROBP mRNA基因表达水平,以2-△△Ct法计算基因表达的量,并比较FCGR3A mRNA与TYROBP mRNA表达水平的相关性及FCGR3A和TYROBP mRNA表达水平与肝功能指标的相关性。结果 PBC患者PBMC中FCGR3A mRNA表达水平(1.96±1.87)显著高于疾病对照组CHB患者(1.38±1.19,P=0.044)和HC组(0.75±0.40,P=0.000),CHB患者也明显高于HC组(P=0.000);PBC患者PBMC中TYROBP mRNA表达水平(1.29±0.66)显著高于HC组(0.98±0.36,P=0.009),而与CHB患者无明显差异(1.19±0.76,P=0.233);PBC患者FCGR3A与TYROBP mRNA表达水平有显著相关性(r=0.519,P=0.000);FCGR3A mRNA表达水平与PBC患者肝功能指标r-谷氨酰转肽酶(GGT)的含量呈明显正相关(r=0.427,P=0.000),而与其他指标无相关;PBC患者TYRBOP mRNA表达水平与肝功能指标无相关。结论 PBC患者FCGR3A和TYROBP mRNA表达水平的异常,表明FCGR3A和TYROBP可能参与PBC的发病和疾病的维持。FCGR3A mRNA的表达和肝功能指标GGT相关,可能直接参与PBC肝损伤。     

慢性疲劳综合征患者外周血单个核细胞中转化生长因子β1 mRNA及雌二醇受体β野生型mRNA的表达水平

目的 探讨慢性疲劳综合征(CFS)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA及雌二醇受体p野生型(ERβwt)mRNA表达及其与CFS的发病关系.方法 用实时荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR检测63例CFS患者、50例其他疾病患者(疾病对照组)、50名健康体检者(健康对照组)外周血PBMCs中TGF-β1 mRNA和ERβwt mRNA的表达水平和含量.以△Ct=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)来比较基因表达水平的变化.结果 CFS患者TGF-β1 mRNA表达水平(△Ct=3.27±0.58)明显高于健康对照组(△Ct=4.37±1.00,t=7.02,P<0.01)和疾病对照组(△Ct=4.54±1.05,t=8.11,P<0.01).CFS患者ERβwt mRNA表达水平(△Ct=9.34±0.92)明显低于健康对照组(△Ct=7.10±0.48,t=15.47,P<0.01)与疾病对照组(△Ct=7.12±0.47,t=15.44,P<0.01);结论CFS患者TGF-β1 mRNA表达水平显著高于健康人和疾病对照组;CFS患者ERβwtmRNA表达水平显著低于健康人和疾病对照组,TGF-β1 mRNA和ERβwt mRNA的表达可能参与了CFS的发病过程.     

去唾液酸糖蛋白受体H1亚单位基因片段的克隆表达及其检测自身免疫性肝炎的价值

Objective To clone and express the human asialoglycoprotein receptor(ASGPR) H1 subunit, purify and identify the immunoreactivity of the recombinant protein, and establish the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) to detect anti-ASGPR antibodies in diagnosis of autoimmune hepatitis. Methods The CRDHI cDNA (435 bp) was subcloned into eukaryotic vector PEGH, and the recombinant protein expression was induced by D (+)-Galactose. The recombinant CRDH1 was purified with Glutathione Sepharose 4B, and its immunoreactivity was identified by SDS-PAGE and western blot as well as MALDI-TOF. ELISA was established to detect the anti-ASGPR antibodies in serum samples of 45 patients with AIH, 30 patients with SLE, 30 patients with RA, 10 patients with SS and 30 normal controls. Results The sequencing of recombinant plasmid showed the CRDH1 gene was successfully inserted to the eukaryotic expression vector with correct sequence and open reading frame. The fusion protein showed a molecular weight of 42 500 Da on SDS-PAGE gel and confirmed to be the human ASGPR by MALDI-MS through peptide mass fingerprint analysis with Mascot in human protein database. It shared 98. 34% homology with ASGPR H1 subunit. Western blot analysis showed that the fusion protein had the same immunoreactivity as human ASGPR. The results of ELISA indicated that the positive rate of anti-ASGPR was 35.6% ( 16/45 ), but the ELISA was negative in other control. There was significant difference of positivity of the autoantibodies between AIH and non-AIH controls (χ2 = 31.85,P < 0. 01 ). Conclusions The human plasmid containing ASGPR is successfully clone into Saccharomyces cerevisiae Y258. The recombinant autoantigen owns good antigenicity and specificity. ELISA established with the purified protein shows good specificity for diagnosis of AIH.     

系统性红斑狼疮患者树突状细胞CD11c^＋，CD123^＋亚群与疾病活动性的关系

目的 探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血树突状细胞CD11c+,CD123+亚群与疾病活动性、肾脏损伤及血清抗ds-DNA抗体产生的关系.方法 选定SLE疾病组51例、疾病对照组30例(类风湿关节炎、舍格伦综合征患者各15例)和正常对照组30例,采用流式细胞术检测上述指标.结果 ①SLE患者外周血树突状细胞CD11c+,CD123+亚群比例均显著低于正常对照组(P<0.01),而疾病对照组与正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05).②疾病活动期SLE患者外周血树突状细胞CD123+亚群比例显著高于稳定期患者(P<0.01),而两者CD11c+亚群比例之间差异无统计学意义(P>0.05).③SLE肾病组外周血树突状细胞CD123+亚群比例显著高于非肾病组患者(P<0.01),两者CD11c+亚群比例之间差异无统计学意义(P>0.05);ds-DNA+组SLE患者外周血树突状细胞CD11c+,CD123+亚群比例均显著低于ds-DNA-组(P<0.05).结论 树突状细胞CD11c+,CD123+亚群的变化可能是SLE发病机制中的关键环节之一.     

联合检测炎症性肠病患者抗酿酒酵母细胞抗体和抗中性粒细胞抗体的临床意义

目的 探讨联合检测炎症性肠病(IBD)患者血清中抗酿酒酵母细胞抗体(ASCA)和抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)对IBD诊断和鉴别诊断的应用价值.方法 用ELISA法和间接免疫荧光法分别测定159例IBD患者[溃疡性结肠炎(UC)97例,克罗恩病(CD)62例],167例主诉为腹痛、腹泻并除外IBD的患者和25名健康人血清中IgG型与IgA型ASCA和ANCA.结果 ASCA-IgA/IgG在CD组、UC组、疾病对照组和健康对照组中的阳性率分别为43.5%、14.4%、29.3%和0;CD组的阳性率显著高于UC组和疾病对照组(X2值分别为16.76、4.12,P分别<0.01、<0.05).ANCA在以上各组中的阳性率分别为8.1%、56.7%、4.8%和0;UC组中阳性率显著高于CD组和疾病对照组(X2值分别为38.08、90.47,P均<0.01);ASCA+/ANCA-组合诊断CD的敏感度、特异度、阳性预测值分别为40.3%,93.8%和80.6%;而ANCA+/ASCA-组合诊断UC的敏感度、特异度和阳性预测值分别为48.5%,98.4%和97.9%;ASCA在手术治疗与未手术治疗CD患者中的阳性率差异具有统计学意义(P=0.03).结论 ASCA或ANCA单项检测不能有效的筛选IBD患者,但2项指标联合检测有助于对UC和CD进行鉴别诊断.同时检测IgA型和IgG型ASCA可提高CD诊断的敏感度.中国人群中ASCA阳性可能与手术治疗相关.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中ISG15 mRNA表达水平的研究

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中ISG15 mRNA表达及其与疾病活动性的关系.方法 采用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)的方法,在Light Cycler Real time PCR检测仪上检测89例SLE患者(活动期50例、缓解期39例)、结缔组织病(CTD)患者34例(疾病对照组)、健康体检者35名(健康对照组)外周血PBMCs中ISG15 mRNA 的表达水平和含量.以ΔCt=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)来比较基因表达水平的变化.结果 活动期SLE患者ISG15 mRNA表达水平(ΔCt=2.04±1.07)明显高于缓解期SLE患者(ΔCt=5.48±1.72,t=11.572,P＜0.01);活动期SLE患者ISG15 mRNA表达水平(ΔCt=2.04±1.07)明显高于疾病对照组(ΔCt=5.90±1.72,t=12.69,P＜0.01)和正常对照组(ΔCt=5.66±1.63,t=12.359,P＜0.01);缓解期SLE患者ISG15 mRNA表达水平与正常人及疾病对照组的差异无显著性(P＞0.05).SLE患者PBMCs中 ISG15 mRNA的表达水平与SLE疾病活动评分指数(SLEDAI)评分及抗双链DNA抗体呈显著正相关(均P＜0.01),与补体C3、C4呈显著负相关(均P＜0.01).结论 活动期SLE患者ISG15 mRNA表达水平显著高于正常人、疾病对照组和疾病缓解期,提示ISG15的表达可能参与了SLE的发病过程并与疾病的活动性显著相关.     

2013年全国229家实验室抗核抗体谱结果比对分析

目的调查全国抗核抗体谱(ANAs)的检测现状,以改进和提高其检测水平与质量。方法由卫生公益性行业科研专项"风湿免疫病诊疗关键技术临床推广及转化应用研究"项目组向全国229家自愿报名参加ANAs检测的实验室发放比对品。比对品可检测抗核抗体(ANA)、抗双链DNA(ds DNA)抗体、抗可提取性核抗原(ENA)抗体,共计一组5支血清。由项目组统一寄送至各实验室。各实验室在规定日期内使用常规方法检测,并将结果上传至项目组比对网站。采用Excel软件对检测结果进行统计及描述性评价。结果参加ANA、抗ds DNA抗体及抗ENA抗体检测的实验室数目分别为217家、219家和223家。ANA、抗ds DNA抗体检测定性结果阳性符合率分别为98.9%和89.5%,阴性符合率分别为97.2%和98.8%。间接免疫荧光法(IIF)是检测ANA的主要方法,核型回报正确率高于89.5%,滴度回报结果在可接收范围内的正确率高于81.8%。抗ds DNA抗体应用免疫印迹法检测结果阴性符合率高于96%,但阳性符合率仅为76%,明显低于IIF法95.4%及ELISA法97.9%。抗ENA抗体检测结果阳性符合率高于94%。结论 2013年全国参与ANAs质评实验室的数量较以往明显增加。比对品的定性结果符合率理想,核型符合率较为理想,滴度和定量结果符合率有待提高。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞諸Toll样受体3 mRNA表达水平的研究

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中Toll样受体3(TLR3 mRNA)表达及其与疾病活动性的关系.方法 利用实时荧光定量-反转录-聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)的方法 ,检测55例PBC患者(活动期33例、缓解期22例)、20例肝癌患者(疾病对照组)和24名健康体检者(健康对照组)PBMCs中TLR3 mRNA的表达水平.以△Ct=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)来比较基因表达水平的高低.结果 PBC患者活动期TLR3 mRNA的表达水平高于疾病缓解期,差异有统计学意义(P<0.05);同时也高于肝癌患者和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);缓解期TLR3 mRNA的表达水平与健康人和肝癌对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 PBC患者TLR3 mRNA表达异常,可能参与了PBC的发病过程并与疾病的活动性有关.     

系统性硬化病合并原发性胆汁性肝硬化的临床分析及文献复习

目的 探讨系统性硬化病(SSc)合并原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者的临床特征,提高对此重叠综合征的认识.方法 收集北京协和医院2005年4月至20l0年4月确诊为SSc合并PBC的病例资料,对符合条件的9例患者的临床表现、实验室检查和组织病理检查进行分析.同时进行文献复习,与国外资料进行比较.结果 ①9例患者中男性1例,女性8例,平均年龄(54±8)岁;以SSc起病者7例,以PBC起病者2例,二病发生间隔1～8年、平均(4.3±2.3)年.②弥漫型SSc(dcSSc)仅1例,而局限型SSc(lcSSc)8例(完全型CREST综合征2例,不完全型5例),8例有雷诺现象和食管运动功能障碍,并均以雷诺现象起病.有PBC临床表现者5例,亚临床型4例,胆管酶升高8例,2例行肝穿刺病理检查为PBC的Ⅰ和Ⅱ期.③抗核抗体均阳性,抗着丝点抗体(ACA)阳性8例,抗线粒体抗体(AMA)阳性9例,AMAM2阳性8例.④早期给予糖皮质激素和熊去氧胆酸治疗有效,3例因肺间质纤维化、肺动脉高压和肝硬化疗效欠佳.结论 SSc可以合并PBC,以lcSSc、尤其是CREST综合征多见,筛查ACA、AMA、AMA-M2可早期识别SSc合并PBC,早期干预有助改善预后.