小鼠可移植性淋巴细胞性白血病,L783 Ⅲ.接种脾细胞悬液后的血液学和病理学变化

L783白血病小鼠脾细胞悬液接种SW1近交系小鼠腹腔后,可发展为全身性白血病。为了了解其发病过程,对接种后小鼠的血液学和病理学变化,作了动态观察。 材料和方法 一、材料 将L783白血病小鼠第48代的脾脏制成1∶3(W∶V)的生理盐水细胞悬液。取SW1近交系小鼠70只(雌雄各半,雌鼠体重为20～24克,雄鼠为22～26克),每鼠腹腔接种脾     

Snail在17β雌二醇引起的卵巢透明细胞癌ES-2细胞系侵袭力增加中的作用

目的 转录因子Snail可诱发上皮细胞-间充质细胞转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT),在肿瘤的黏附、侵袭、转移中起重要作用.本研究通过RNA干扰抑制Snail的表达,观察Snail表达抑制后是否影响17β雌二醇对卵巢透明细胞癌细胞系ES-2细胞趋向运动力、侵袭力及MMP-2表达的调控.方法 构建针对Snail的dsRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo-Snail,瞬时转染抑制Snail表达.10-8 mol/L 17β雌二醇及DMSO分别作用于阴性对照组及RNAi组细胞,用改良的Boyden小室检测细胞侵袭力、运动力的变化,RT-PCR检测MMP-2 mRNA表达的改变情况,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶活性.结果 用针对Snail的RNAi阻断Snail表达后,可使ES-2细胞胞质突起变短,细胞的趋向运动力、侵袭力及MMP-2表达降低;针对Snail的RNAi可部分阻断17β雌二醇对ES-2细胞趋向运动力、侵袭力的调节,并可阻断17β雌二醇对细胞MMP-2表达的调节作用.结论 Snail在雌激素引起的卵巢透明细胞癌肿瘤细胞侵袭能力增强的过程中起重要作用,可作为卵巢透明细胞癌治疗的重要靶点.     

EGF和TGF-α促进子宫内膜癌细胞增殖信号转导通路的研究

目的:探讨表皮生长因子(EGF)和转化生长因子α (TGF-α)促进子宫内膜癌细胞增殖的信号转导通路.方法:应用不同浓度的EGF和TGF-α分别处理子宫内膜癌细胞Ishikawa, MTT法检测细胞增殖,Western blot分析EGF和TGF-α处理后,不同时间MAPK通路关键分子ERK1/2的磷酸化水平和调控增殖的重要分子Survivin蛋白的表达.然后应用特异性的MAPK通路阻断剂U0126预处理细胞,观察EGF和TGF-α对细胞增殖和Survivin蛋白表达的影响.结果:不同浓度的EGF和TGF-α均促进了Ishikawa细胞增殖.与对照组相比,0.1、1、10和100 ng/mL的EGF处理组细胞增殖率分别为(112.12±10.23)%、(138.39±6.85)%、(165.50±15.20)%和(162.86±15.17)%;0.1、1、10和100 ng/mL的TGF-α处理组细胞增殖率分别为(102.87±6.44)%、(121.97±3.51)%、(144.42±11.60)%和(141.12±13.50)%.EGF和TGF-α还迅速诱导了ERK1/2的磷酸化,并使Survivin蛋白水平增加了8.35和9.42倍.MAPK通路阻断剂U0126则完全抑制了EGF和TGF-α诱导的ERK1/2磷酸化,阻断了MAPK通路的激活.阻断MAPK通路还明显抑制了EGF和TGF-α诱导的细胞增殖和Survivin蛋白表达的上调.结论:EGF和TGF-α能够促进子宫内膜癌细胞增殖,其机制是通过激活MAPK通路引起Survivin蛋白表达的增加,从而引发增殖的生物学效应.     

不同浓度甲氨蝶呤对外周血单个核细胞表达和分泌白细胞介素-17的影响

目的 体外观察不同浓度的甲氨蝶呤(MTX)对外周血单个核细胞(PBMCs)表达和分泌白细胞介素(IL)-17的影响,探究MTX有效治疗类风湿关节炎(RA)的可能机制.方法 分离RA患者和健康人PBMCs,予不同浓度MTX预处理,抗人CD3和抗人CD28刺激后,37 ℃体积分数为0.05的CO2培养箱培养.分别于培养的不同阶段收集细胞或上清液,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析IL-17mRNA的表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养液中IL-17的浓度;荧光抗体标记细胞表面抗原CD4和胞内蛋白 IL-17,流式细胞仪分析CD4+IL-17+细胞的比例.结果 比较采用两两配对t检验或独立样本t检验.结果 浓度为0.1、1.0、5.0、25.0μg/ml MTX组IL-17mRNA/GAPDH比值分别为(0.58±0.09、0.48±0.11、0.50±0.09、0.51±0.14),与无药抗体组(0.76±0.08)组间两两比较差异有统计学意义(P＜0.01);IL-17分泌水平则分别为(121±54)、(104±45)、(90±36)、(115±41)pg/ml,与无药抗体组(370±187)pg/ml组间两两比较差异有统计学意义(P＜0.01);MTX处理组CD4+IL-17+细胞比例的平均值下降,但统计学检验差异无统计学意义(P＜0.05).结论 MTX可以有效抑制PBMCs合成和分泌IL-17,而且在一定的剂量下可发挥显著作用,加大剂量并不能增强该作用.     

不同月龄和血脂水平ApoE基因敲除小鼠体内类固醇激素合成急性调节蛋白的表达

 目的 检测不同月龄和不同血脂水平载脂蛋白E敲除小鼠体内类固醇激素合成急性调节蛋白（steroidogenic acute regulatory protein,StAR）的表达水平。方法 实验分别选取雄性和雌性1天龄新生鼠、1月龄、3月龄及5月龄载脂蛋白E敲除小鼠（apoE-/-）及对照C57BL/6J小鼠,每组6只,共16组。利用试剂盒检测不同年龄小鼠的血脂水平。利用实时定量RT-PCR及Western blot方法检测不同年龄和血脂水平下,小鼠肝脏中StAR基因和蛋白的表达。结果 相比同年龄同性别的正常对照小鼠,载脂蛋白E敲除小鼠血清中含较高水平的低密度脂蛋白（LDL）和较低水平的高密度脂蛋白（HDL）。在对照小鼠中,StAR基因和蛋白表达水平随月龄增加逐渐下降;但是在载脂蛋白E敲除小鼠体内,因为血脂水平的提高,StAR基因和蛋白表达水平呈现先增高后降低的趋势。结论 StAR通过调节脂质代谢,可作为一个有效调节动脉粥样硬化以及其他心血管疾病的调节因子。     

肥大细胞聚集和脱颗粒促进冠状动脉微血管栓塞后心肌内胶原纤维的沉积

目的:探讨心肌肥大细胞聚集和脱颗粒,在小型猪冠状动脉微血管栓塞后心肌胶原纤维沉积中的作用.方法:32头小型猪分成4组.分别为冠状动脉微血管栓塞组(n=8),假手术组(n=8),肥大细胞膜稳定剂曲尼司特预处理并冠脉微血管栓塞组(n=8),以及曲尼司特预处理但无冠脉微血管栓塞组(n=8).冠脉微血管栓塞30 d后,用组织化学方法和透射电镜,研究肥大细胞总量以及脱颗粒肥大细胞的数量和胶原纤维的沉积.结果:微血管栓塞30 d后,肥大细胞总量和脱颗粒的肥大细胞数量以及胶原容积分数,同对照组相比均有显著性差异(P<0.01).而肥大细胞膜稳定剂曲尼司特能,有效减少微血管栓塞组中肥大细胞总量和脱颗粒的数量以及胶原容积分数.胶原容积分数分别同总的肥大细胞数量(r=0.91,P<0.001)和脱颗粒的肥大细胞数量(r=0.92,P<0.001)呈正比.结论:肥大细胞的聚集和脱颗粒促使心肌胶原纤维的沉积.     

肥大细胞类胰蛋白酶在动脉粥样硬化发生中的作用机制

很多研究报道在动脉粥样硬化斑块周围有大量肥大细胞聚集,其中肥大细胞中类胰蛋白酶含量也增多,且与炎症关系密切,但是其在动脉粥样硬化发生发展中的作用并不明确。本课题组从炎症角度进行研究了类胰蛋白酶在动脉粥样硬化发生中的机制。①纯化了人肺组织β类胰蛋白酶,并且制备了β类胰蛋白酶的两个单克隆抗体,以此为基础建立了国内首个人血清β类胰蛋白酶的ELISA检测方法,该方法为炎症、过敏性休克、哮喘等类胰蛋白酶相关疾病的诊断和法医学鉴定提供了新的方法。②在体外培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞的研究中,利用RT-PCR和Western blot发现,肥大细胞类胰蛋白     

高脂血症apoE基因敲除小鼠心脏中一氧化氮合酶含量及基因表达

目的 探讨高脂饲料对apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠心肌组织中内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric-oxide synthase,eNOS）的含量及基因表达的影响。方法 将13只apoE-/-小鼠随机分为两组,即高脂饲料组（n=7）和普通饲料组（n=6）。喂养12周后,测血清总胆固醇（total cholesterol,TC）、三酰甘油（triglyceride,TG）、高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL）和低密度脂蛋白（low density lipoprotein,LDL）含量,采用Real-Time RT-PCR法检测心肌组织中eNOS的mRNA表达水平,以免疫组化方法检测eNOS蛋白的表达。结果 高脂饲料组TC、TG和LDL明显高于普通饲料组,HDL则低于普通饲料组（P<0.01）;高脂饲料组心肌组织中eNOS的mRNA和蛋白水平均低于普通饲料组（P<0.01）。结论 高脂饲料导致apoE-/-小鼠发生高脂血症,并引起心肌组织中eNOS的mRNA表达的减少和相应蛋白水平的降低。     

β5整合素在造血细胞上的表达及其与细胞增殖和诱导凋亡的作用

目的 :整合素 (ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ)是一类广泛存在于细胞表面的糖蛋白。在造血细胞的整合素由α和β两个亚基组成 ,参与细胞与胞外基质、细胞骨架的莲接 ,并通过酪氨酸和丝氨酸蛋白激酶系统介导细胞信息的传递。αｖβ5的过度表达与肿瘤转移及血管形成有关。αｖβ3也已证实与血管形成时的能动性调节及肿瘤的转移有关。αｖβ3和αｖβ5均可作用在摄取腺病毒易感的细胞 ,因而αｖβ3和αｖβ5的上调可引起腺病毒与易感细胞再结合增加。为研究αｖβ5的功能及其对血源性细胞的作用 ,我们成功的构建了逆转录病毒载体系统和四环素控制下的诱导…     

胞嘧啶脱氨酶基因/5-氟胞嘧啶联合在肿瘤基因治疗中的研究

临床上许多恶性肿瘤在外科手术治疗后还需进一步作化学治疗,但目前化疗的应用受到很大的限制,其中一个重要原因就是化疗药物在体内杀伤肿瘤细胞的同时往往对机体正常细胞也有明显的损害,使患者难以耐受大剂量的化疗,无法达到彻底杀灭肿瘤细胞的目的,这也是长期以来恶性肿瘤复发率居高不下的原因之一。 因此,如何减少化疗的副作用成为人们普遍关注的问题。近年来随着分子生物学的发展,肿瘤的基因治疗已开始应用于临床。而利用基因治疗与化疗联合应用方案提高化疗的敏感性和选择性,减轻副作用,改善肿瘤疗效,是当前基因治疗中的一个…