NICU高胆红素血症新生儿听力筛查

目的通过对NICU高胆红素血症新生儿进行听力筛查,发现NICU中高胆红素血症新生儿听力障碍发病情况。方法对我院2005年10月至2006年12月期间NICU收住的高胆红素血症新生儿用DPOAE模式进行初筛,对初筛未通过者用DPOAE+ABR进行复筛,复筛未通过者进行听力学评估及确诊。结果共筛查高胆红素血症178人,确诊(6月龄)5例,听力障碍发病率为2.96%。结论高胆红素血症是NICU新生儿听力障碍发病的一个高危因素。     

应用PCR方法检测鼠疫现场标本的研究

目的用PCR方法检测疑似鼠疫现场标本,以建立准确、简便和快速的诊断技术。方法对采自疫源地的自毙鼠标本用两种方法提取DNA,进行caf1、pla基因检测和染色体标识基因检测。结果 2份样本均能检测到caf1、pla基因(与Yersinia pestis caf1、pla基因序列比对同源性达到99%以上)和4个染色体标识基因ypo 2087、ypo 2090、ypo2094、ypo 2102,试剂盒提取方式敏感性高于煮沸法。结论优化模板提取方式、提高扩增效率、质粒和染色体多基因检测,可以提高鼠疫PCR诊断技术的检出率。     

鼠疫菌纤溶酶原激活因子的分离纯化

目的 建立从人工培养的鼠疫菌中分离和纯化纤溶酶原激活因子(Plasminogen activator,Pla)的方法.方法 分别用超声破碎、尿素提取与硫酸铵盐析相结合的方法(简称超声法、尿素法)提取Pla,并分别用离子交换、凝胶过滤两步层析相结合的高效液相色谱和制备电泳纯化Pla,对提取、纯化的Pla进行纤溶酶原激活剂活性检测.结果 鼠疫菌超声破碎上清50%～60%饱和硫酸铵沉淀和尿素浸渍菌粉上清0～10%饱和硫酸铵沉淀,均获得了3条蛋白带[相对分子质量(Mr)约31×103、35×103、37×103].纤溶酶原激活剂活性检测两种方法获得蛋白的溶圈直径分别为6.5、7.2 mm.用高效液相色谱纯化的Pla主要由Mr约31×103、35×1033、37×103的3条蛋白带组成,纤溶酶原激活剂活性检测溶圈直径为5.0 mm.制备电泳纯化的Pla主要由Mr约31×103、35×103、37×103的3条蛋白带组成.条带所在位置还有其他一些低浓度蛋白存在,纤溶酶原激活剂活性检测无溶圈出现.结论 超声法和尿素法可以提取到Pla,后者经高效液相色谱和制备电泳可以达到基本纯化.     

鼠疫耶尔森氏菌Pla蛋白的分离纯化与质谱分析

目的建立一种从鼠疫耶尔森氏菌疫苗株EV76中分离纯化纤维蛋白酶原激活因子（Pla）的方法。方法采用超声破碎与硫酸铵盐析结合的方法初步提取Pla,经CHT陶瓷羟基磷灰石层析分离纯化,所获取的Pla进行质谱分析及Western blot实验。结果菌悬液超声破碎后上清以0~10%饱和硫酸铵沉淀,获得含有相对分子质量（Mr）约为31 000、35 000、37 000的3条Pla蛋白带,约占蛋白总量33%;CHT柱层析后,3条带约占蛋白总量80%。经质谱分析,在Mr约为31 000、35 000的条带中含有Pla,Pla单克隆抗体能特异性地识别该蛋白。结论采用超声破碎结合硫酸铵盐析的方法可从鼠疫菌中提取Pla,CHT柱层析可达到基本纯化,获得的样品经质谱分析和Western blot实验证实为Pla蛋白。     

云南省家、野两型鼠疫菌营养需求的比较试验

目的比较云南省家、野两型鼠疫菌的营养需求.方法采用固体平皿法,对云南省32株家、野两型鼠疫菌进行谷氨酸、苯丙氨酸营养需求研究.结果 21株家鼠鼠疫菌株中有19株对谷氨酸半依赖,2株对谷氨酸不依赖,21株均为苯丙氨酸依赖;11株野鼠鼠疫菌株中有3株对谷氨酸半依赖,8株对谷氨酸不依赖,11株均为苯丙氨酸依赖.结论云南省家、野两型鼠疫菌在营养需求上有交叉性.     

云南省鹤庆县2017年分离鼠疫菌分子溯源

目的 了解2017年云南省鹤庆县新分离的鼠疫菌的基因分型,为该地的鼠疫防控提供科学依据。方法 采用差异片段（DFR）、规律成簇的间隔短回文重复序列（CRISPRs）和多位点可变数目串联重复序列分析（MLVA）3种方法对10株鹤庆县新分离鼠疫菌进行分型,并将10株鼠疫菌及邻近疫源地鼠疫菌株93株纳入聚类分析。结果 鹤庆鼠疫菌株与丽江鼠疫疫源地菌株具有相同的DFR型（Genomovar 05型）及CRISPRs型（Ca7簇,22型）,在MLVA聚类分析中,鹤庆鼠疫菌株与丽江野鼠鼠疫菌株位于同一个簇,两者之间仅有2个位点（N2117,M23）的差异。结论 2017年云南省鹤庆鼠疫菌株与丽江野鼠鼠疫疫源地菌株具有很高的同源性,鹤庆县疫情可能是丽江鼠疫进一步向南扩散的结果。     

云南省鼠疫菌株脉冲场电泳分析

目的:对云南不同片区及不同类型的鼠疫菌株进行基因分型。方法:采用脉冲场电泳(PFGE)对菌株进行分析。结果:1.云南省鼠疫菌株被分为5个型,所有鼠疫菌株在680kb和330kb有两条共同的带;2.大部分家鼠鼠疫具有一致图谱;3.云南家、野两型鼠疫菌的脉冲场电泳图谱存在差异。结论:脉冲场电泳分析可用于云南鼠疫分子流行病学研究。     

冠心病病人血清lncRNA TUG1和miR-140-3p水平与血清炎性因子、斑块稳定性指标的相关性

目的:探讨冠心病病人长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)、微小RNA-140-3p(miR-140-3p)与血清炎性因子、斑块稳定性指标的关系。方法:选取我院收治的140例冠心病病人为研究对象,其中稳定型心绞痛(SAP)病人(SAP组)68例,不稳定型心绞痛(UAP)病人(UAP组)72例,同期选取66名健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清lncRNA TUG1、miR-140-3p水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清炎性因子白介素(IL)-6、IL-1β、IL-18、C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)及斑块稳定性指标正五聚素-3(PTX3)、脂蛋白相关磷脂酶-A2(Lp-PLA2)、成纤维细胞生长因子-23(FGF23)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平,采用彩色多普勒超声诊断仪测量内膜中层厚度(IMT);采用Pearson相关分析法分析冠心病病人血清lncRNA TUG1、miR-140-3p水平与炎性因子、斑块稳定性指标的相关性。结果:UAP...     

检测鼠疫抗体胶体金免疫层析试纸条的研制

目的建立快速、简易的检测鼠疫F1抗体的胶体金免疫层析法(G ICA)。方法(1)采用胶体金颗粒标记纯化F1抗原,并将标记物喷于玻璃纤维;同时将纯化F1抗原喷线固定于硝酸纤维素膜上,用于F1抗体的捕捉;按常规组装成检测鼠疫抗体免疫层析试纸条。(2)采用该试纸条与血凝法对同一份兔抗F1抗体进行检测,以评价该试纸条的敏感性。(3)采用该试纸条对44株非鼠疫菌的免疫鼠血清进行检测,以评价该试纸条的特异性。(4)采用该试纸条、血凝法及ELISA对607份血清标本进行检测,以评价该试纸条对现场材料的检测效果。结果(1)该试纸条可在15 m in之内完成检测;(2)在敏感性上,该试纸条对同一份免疫兔血清的检测较血凝法高一个滴度;(3)对被试的44株所选菌株的免疫鼠血清的检测均为阴性;(4)在对607份血清标本的检测中,免疫层析试纸条、血凝及ELISA三种方法的符合率中度,而免疫层析试纸条的敏感性分别比血凝与ELISA高111%和90%。结论以纯化的鼠疫F1抗原为基础建立的G ICA检测鼠疫F1抗体的方法特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有较大的推广应用价值。     

全基因测序技术在鼠疫分子溯源中的应用

高通量测序技术的发展使得测序成本大幅降低,全基因测序(whole genome sequencing, WGS)技术已成为追溯传染性疾病病原菌和研究细菌遗传进化的主要技术手段。鼠疫菌基因组序列的测定在鼠疫疫情溯源及探索病原菌遗传进化中发挥至关重要的作用。细菌表型分析虽能体现一定的遗传关系,但不能直接评估所测定表型的遗传基础,不宜用于鼠疫菌的溯源,WGS技术因其具有获取遗传信息全面、精确、高通量及高分辨率等优势,现已在鼠疫的分子溯源工作中被广泛应用。本文简要综述了WGS技术及其在鼠疫分子溯源中的应用进展。