过表达NK4对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的:构建含有NK4基因的重组慢病毒载体(LV-NK4),感染人肺腺癌A549细胞后观察NK4基因的表达,并研究NK4对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响?方法:采用DNA重组技术,将NK4基因克隆至带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的慢病毒载体GV358,脂质体介导法将其与慢病毒包装系统共转染293T细胞,包装为慢病毒,感染A549细胞,观察感染效率?采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹法(Western blot)检测NK4基因和蛋白的表达?建立A549(空白对照组)?A549/NK4(实验组)?A549/LV(空病毒对照组)3组细胞;RT-PCR 法测定各组细胞c-met基因水平;噻唑蓝(MTT)比色法测定各组细胞第1~7天增殖情况,绘制生长曲线;流式细胞术检测各组细胞凋亡率?结果:经基因测序证实LV-NK4构建成功;感染后A549细胞中可见明显的NK4蛋白表达,Western blot显示50 000处有蛋白条带;RT-PCR结果显示实验组NK4 mRNA水平较空白对照组和空病毒对照组明显升高(P < 0.01),c-met mRNA水平较其他两组下降(P < 0.05);MTT结果显示实验组细胞从第4天起生长比正常对照组和空病毒对照组均缓慢(P < 0.05);流式细胞术结果显示实验组细胞凋亡率高于正常对照组和空病毒对照组(P < 0.05)?结论:成功构建NK4慢病毒载体且有效转染A549细胞;NK4具有抑制A549细胞增殖并促进其凋亡的作用,可能与下调c-met基因水平有关?     

肺移植术后受者T细胞亚群和IL-6水平的动态变化1例并文献分析

目的：探讨肺移植术后患者T细胞亚群和白介素-6（IL-6）水平的动态变化。方法：用流式细胞仪测定1例异体肺移植患者不同时间外周血T细胞亚群细胞的百分率和CD4／CD8比值，以及用酶标ELISA法测定其不同时间外周血IL-6水平，术后监测T细胞亚群至50d，IL-6至96d，以患者术前结果作对照。结果：排异反应前CD3、CD4、CD8、NK、IL-6随着免疫抑制药应用逐渐降低，以2～4d为最低，CD4／CD8比值虽有降低，但有波动，术后第6d发生排异反应，CD3、CD4、CD8、NK迅速升高，IL-6迟于发生排异反应2d后出现高峰，予以甲强龙冲击治疗，CD3、CD4、CD8、NK并未降低到发生排异前水平，CD3、CD8、NK维持在稍低于正常的水平，CD4接近正常，CD4／CD8比值大多高于术前，IL-6也有所下降，但2个月后发生肺部霉菌等感染，IL-6也出现一个高峰。结论：外周血CD3、CD4、CD8、NK、CIN／CD8的检测，对于肺移植患者早期急性排异反应的预测有一定价值，在发生排异反应经甲强龙冲击治疗后其水平的变化与患者稳定的病情相一致，而IL-6的变化特异性不高。     

姜黄素对博莱霉素诱导大鼠肺纤维化的保护作用

目的观察姜黄素对博莱霉素诱导大鼠肺纤维化的保护作用及其作用机制。方法 72只大鼠随机分为三组:正常对照组(气管内一次性注射生理盐水2 mL/kg)、博莱霉素组(气管内一次性注射博莱霉素5 mg/kg)和姜黄素组(气管内一次性注射博莱霉素5 mg/kg后第15天起每日腹腔注射姜黄素50 mg/kg)。分别在实验第14、17、21、28天每组各处死大鼠6只,取肺组织行苏木精-伊红(HE)和Masson染色以评价病理变化;双抗体夹心ELISA测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-10含量。结果姜黄素组第28天肺泡炎和肺纤维化程度显著轻于博莱霉素组(均P<0.05);BALF中IL-10含量显著高于博莱霉素组(P<0.05)。结论姜黄素可以减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化,其保护作用可能与促进IL-10表达有关。     

125Ⅰ粒子植入对家兔气管辐射损伤的实验观察

目的:研究植入125I粒子后家兔气管组织结构的辐射损伤,探讨临床应用安全性.方法:采用2x2析因设计方法,将实验组和空白对照组动物在不同时间点(第14天,第30天)的损伤程度进行组合交叉分组,研究辐射和时间两种因素各自损伤水平,以及两者间有无交互作用.具体分组方法如下:健康雄性普通级新两兰家兔16只(体重2.5～3.0 kg)按照体重与窝别配为8对,再随机分为2个亚组(第14天组,第30天组),每组4对;每对动物各自分为实验组1只,对照组1只.实验组(8只)采取气管外膜缝扎3颗0.5 mCi125I粒子,粒子互相间隔10 mm排列的布源方法,对照组(8只)采用3颗空白粒子,按相同方法布源.第14天与第30天分别取相应亚组动物气管进行肉眼观察、HE染色病理与透射电镜检查,观察炎症损伤程度,进行统计分析.结果:第14天和第30天,实验组和对照组兔左侧气管均无穿孔、血栓形成等严重并发症;两组HE染色对比炎症损伤程度计分无显著性差异(P>0.05);实验组电镜观察到辐射敏感细胞器损伤,但第14天与第30天无明显程度差异,对照组电镜检查正常.结论:间隔10 mm连续排列的3颗0.5 mCi125I粒子对家兔气管的辐射损伤小,临床应用安全.     

呼出气一氧化氮测定在慢性咳嗽病因诊断中的价值

慢性咳嗽是临床常见症状,病因较多,其中常见的病因有支气管哮喘、上气道咳嗽综合征(UACS)、胃食管反流性咳嗽(GERC)、变应性咳嗽(AC)、嗜酸细胞性支气管炎(EB)、慢性支气管炎等。在慢性咳嗽病因的鉴别诊断中,支气管激发试验、诱导痰嗜酸细胞检测常用于鉴别哮喘性咳嗽和非哮喘性咳嗽。支气管激发试验操作复杂且具有一定的风险性,诱导痰嗜酸细胞检测特异性不强,痰中细嗜酸细胞增多不但见于哮喘,而且     

低氧诱导因子作为肺癌治疗靶点的研究进展

<正>世界卫生组织(WHO)近年来的相关数据显示,无论是男性还是女性,肺癌在癌症死亡相关病因中都位居首位。尽管随着靶向治疗与精准治疗的进一步发展,关于肺癌的治疗有了许多新的突破,然而这些治疗效果并不是完全明显的,并且会不可避免出现化疗耐药。众多研究表明,肿瘤微环境(tumor micro-environment TME)在肿瘤细胞的生存、生长、侵袭和转移过程中发挥着至关重要的作用[1]。肿瘤微环境广义上是指除肿瘤细胞以外的组织细胞和细胞外基质     

慢病毒介导NK4过表达对人肺腺癌移植瘤生长的影响

目的：研究瘤内注射慢病毒介导的NK4过表达对肺腺癌移植瘤生长、转移以及微血管生成的影响。方法：构建人肺腺癌A549裸鼠皮下移植瘤模型并随机分为3组。通过瘤内注射的方式分别向三组注射过表达慢病毒LV-NK4 (50 μl, 6×108 TU/ml)、空载慢病毒LV-con (50 μl, 6×108 TU/ml)和PBS(50 μl)。观察28天后将裸鼠处死,测量瘤体积及瘤重。HE染色观察瘤组织、肺组织情况。采用TUNEL法检测各组瘤体细胞凋亡情况。免疫组化染色检测c-Met蛋白的表达,微血管密度(MDV)检测评估血管生成。结果：小鼠荷瘤实验显示,LV-NK4组瘤体积(316.166±89.290 mm3)小于LV-con组(812.714±348.967mm3)和PBS组(838.598±390.780mm3),差异具有统计学意义,P＜0.05。LV-NK4组瘤重(0.4344±0.1234g)小于LV-con组(0.7018±0.2227g)和PBS组(0.7829±0.1510g),差异具有统计学意义,P＜0.05。肿瘤组织病理结果显示LV-NK4组凋亡、坏死明显增多;LV-NK4组微血管密度(MDV)为(11.2±2.78),较LV-con组(18.90±3.479)和PBS组(22.00±5.40)明显减少,P＜0.01。LV-con组和PBS组肺部可见明显肿瘤转移灶,LV-NK4组未见明显转移灶,RT-PCR/WB检测证明移植瘤组织中NK4的表达增加。免疫组化染色显示LV-NK4组裸鼠瘤组织c-Met蛋白表达明显减少。结论：慢病毒介导的NK4过表达抑制肺腺癌移植瘤的生长及肺转移。     

虾青素对百草枯致大鼠肺纤维化的干预作用及机制

目的：观察虾青素（astaxanthin,AX）对百草枯（paraquat,PQ）诱导大鼠肺纤维化的影响,并进一步探讨肺纤维化可能的发病机制。方法：SD大鼠随机分为正常对照组、PQ模型组及虾青素干预组。模型组及干预组大鼠腹腔注射百草枯造模后,干预组第2天起给予虾青素灌胃,对照组及模型组给予相应溶剂。分别于给药后第7、14、28 天处死大鼠,测定大鼠血清中羟脯氨酸（hydroxyproline,HYP）、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）1、MMP2、MMP9和基质金属蛋白酶组织抑制剂（tissue inhibitor of matrix metalloproteinase1, TIMP1）的含量,取固定部位肺组织切片行HE、Masson染色进行病理学观察,免疫组化法测定转化生长因子-β1（TGF-β1）的含量,对病理图像进行形态学测量分析。结果：①HE染色及Masson染色结果显示：干预组纤维化炎症程度明显低于模型组;②模型组大鼠中毒后羟脯氨酸较正常组增高（P<0.05）,虾青素干预后,大鼠鼠肺血清羟脯氨酸水平较模型组降低（P<0.05）;③PQ模型组在肺纤维化区域TGF-β1弱阳性表达,虾青素干预后,TGF-β1表达含量下降,第28天最为明显,差异有统计学意义（P<0.05）;④模型组与干预组MMP1、MMP2、MMP9表达含量均较正常对照组升高。MMP1、MMP2、MMP9在PQ中毒后表达量逐渐升高,第14天达到高峰后下降,但第28天含量仍高于对照组。与模型组相比,干预组MMP2、MMP9含量均有下降,第14、28天显著,其差异有统计学意义（P<0.05）。TIMP1在干预期间与模型组及对照组无显著差异。结论：虾青素能够减弱肺纤维化大鼠肺组织病理的胶原沉积、减少肺组织中羟脯氨酸的含量、降低肺血清中MMP2、MMP9的含量,抑制肺组织中TGF-β1的分泌,从而减轻PQ引起的大鼠肺纤维化。