急性高血糖对大鼠背根神经节神经元罗丹明荧光强度的影响(英文)

用激光共聚焦技术在急性分离的大鼠背根神经节（DRG）神经元上观察了施加高糖溶液后罗丹明-123（Rhodamine－123）荧光强度的变化，从而推测高血糖对线粒体膜电位的作用及能量代谢的影响。对40个小DRG细胞的观察表明，罗丹明-123荧光强度在细胞的周边最高，而细胞核区的荧光强度最低。当在DRG细胞的培养液（人工脑脊液，ACSF）中滴加30mmol／L的D-葡萄糖溶液后，大部分细胞（8／9）荧光强度迅速降低，在100～400s内，平均降低21．2％±5．4％～22．8％±4．7％。而同体积的ACSF对荧光强度无明显影响（n＝7）。滴加葡萄糖后的罗丹明-123荧光强度变化曲线同滴加ACSF后的曲线相比有显著差异（p＜0．05）。说明急性高血糖可引起初级传入神经元的能且代谢降低。     

大鼠腰骶髓后连合核内5—HT样阳性纤维和终末的来源

采用荧光金（ＦＧ）逆行追踪与免疫荧光组织化学染色相结合技术，对大鼠腰骶髓后连合核（ＤＣＮ）内５－羟色胺（５－ＨＴ）能纤维和终末的分布及其来源进行了观察。结果显示ＤＣＮ内分布有大量５－ＨＴ阳性纤维和终末。将ＦＧ注入到ＤＣＮ后，ＦＧ／５－ＨＴ双标细胞出现于延髓中缝核群中的中缝大核、中缝隐核和中缝苍白核以及外侧旁巨细胞核的腹侧部。结果提示５－ＨＴ对ＤＣＮ内盆内脏感觉信息的传递可能具有调控作用。     

P物质对大鼠新鲜分离DRG神经元NMDA及GABA激活电流的调制作用

实验应用全细胞膜片钳技术在大鼠新鲜分离的背根神经节（ＤＲＧ）神经元胞体膜上观察到Ｐ物质（ＳＰ）对ＮＭＤＡ和ＧＡＢＡ激活电流有调制作用。单独给予ＳＰ（１０－８～１０－６ｍｏｌ／Ｌ）可在ＤＲＧ神经元记录到一幅值较小的，浓度依赖性的无明显去敏感之内向电流。预加ＳＰ３０ｓ后，其对ＮＭＤＡ和ＧＡＢＡ激活电流分别具有明显的增强和抑制作用，而且ＳＰ对ＮＭＤＡ和ＧＡＢＡ激活电流的增强和抑制作用也是剂量依赖性的。如ＳＰ浓度为１０－７ｍｏｌ／Ｌ时，可使ＮＭＤＡ激活电流较之对照增强４６．３±７．２％（ｘ±ｓ，ｎ＝８）；使ＧＡＢＡ激活电流比对照减小３８．９±７．８％（ｘ±ｓ，ｎ＝６）．ＳＰ的此种调制作用可以在同一ＤＲＧ神经元上观察到。     

腺苷对大鼠背根节神经元膜电位及动作电位的影响

在离体灌流的大鼠背根神经节（ＤＲＧ）－脊髓标本上，用微电极进行了胞内记录。在１５７个神经元中，依神经纤维的传导速度将神经元分为Ａ类和Ｃ类，其中Ａ类７５个，Ｃ类８２个。当浴槽中滴加０．５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ的２－氯腺苷（ＣＡＤＯ）后，６６．７％（１０／１５）的Ｃ类细胞发生了去极化；而只有３３．３％（４／１２）的Ａ类细胞发生了去极化，且其去极幅值及持续时间均小于Ｃ类细胞的效应。先加入２．５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ的８－苯茶碱（８—ＰＴ），再给予ＣＡＤＯ，８５．７％（６／７）的Ｃ类细胞的静息电位无变化，只有１４．３％（１／７）的Ｃ类细胞出现了暂短的去极化效应。另外，给予ＣＡＤＯ后，５８．３％（７／１２）的Ｃ类细胞动作电位幅值减少，有些细胞伴有膜的去极化；但Ａ类细胞的动作电位幅度末见明显变化。结果表明：腺苷主要引起ＤＲＧ中Ｃ类细胞去极化，并减小其动作电位。     

重症肌无力患者细胞免疫及免疫调节 与临床疗效关系的分析

目的探讨周围血中ＮＫ细胞、Ｔ细胞亚群、细胞膜白细胞介素－２受体（ｍＩＬ－２Ｒ）阳性细胞与重症肌无力（ＭＧ）发病及临床疗效的关系。方法用流式细胞仪计数３９例ＭＧ患者ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５和ＣＤ５６抗体阳性细胞的百分率，应用许氏临床评分法对病情的严重程度和转归进行评定。结果ＭＧ患者的ｍＩＬ－２Ｒ（ＣＤ２５）阳性细胞无明显改变。ＣＤ３阳性细胞在肾上腺皮素激素治疗前、后无明显改变。ＮＫ细胞（ＣＤ５６）和ＣＤ４阳性细胞在治疗前均明显高于正常（Ｐ＜００１），治疗２个月后均明显下降（Ｐ＜０．０１，０．０５）。ＣＤ８阳性细胞治疗前后明显降低和增高（Ｐ＜００５）。结论ｍＩＬ－２Ｒ阳性细胞百分率不能直接反映ＭＧ的免疫功能紊乱，并对ＮＫ细胞和Ｔ细胞亚群的变化无直接调节作用。ＮＫ细胞增高，可能为其功能下降的代偿性变化。ＣＤ４增高，ＣＤ８下降提示免疫功能紊乱，符合自身免疫性疾病的特点。     

日本猕猴背根节表达阿片μ受体细胞的定量分析

使用免疫组织化学和组织化学结合标记技术,对阿片μ受体样免疫反应阳性物质（ＭＯＲ－Ｌｉ）和ＢＳＩ－Ｂ４植物凝集素组织化学结合标记物在日本猕猴背根节（ＤＲＧ）细胞内的定位形式和特点进行了比较研究。用Ｌｅ－ｉｃａ Ｑ５００ＭＣ图像分析系统,对２６７９个ＭＯＲ－Ｌｉ细胞进行计数和测量表明,９８．７７％（２６４６／２６７９）阳性细胞为直径小于５０μｍ的小细胞亚群;只有１．２３％（３３／２６７９）阳性细胞的直     

人脑胶质瘤细胞多药耐药性的形成及其耐药特性的研究

目的探讨人脑胶质瘤细胞多药耐药性（ＭＤＲ）的形成规律及其耐药特性。方法采用长春新碱（ＶＣＲ）在体外对人脑胶质瘤ＢＴ３２５细胞持续诱导获得了表现为ＭＤＲ特征的人脑胶质瘤细胞模型．以ＭＴＴ法测定胶质瘤细胞增殖，透射电镜行超微结构研究，通过流式细胞仪，检测培养的胶质瘤细胞与３２例术后胶质瘤新鲜组织标本中Ｐ－糖蛋白的表达。结果耐药的胶质瘤细胞ＢＴ３２５／ＶＣＲ对长春新碱的耐受程度为其亲本细胞的２４倍，对阿霉素、威猛交叉耐药，对５－氟脲嘧啶敏感。透射电镜下见ＢＴ３２５／ＶＣＲ细胞常染色质明显，线粒体丰富，粗面内质网增多。研究表明ＢＴ３２５／ＶＣＲ表现为Ｐ－糖蛋白介导的典型ＭＤＲ。胶质瘤新鲜组织标本中，Ｐ－糖蛋白表达阳性率为３７５％（１２／３２），同肿瘤的恶性程度呈正相关（Ｐ＜０．０１）。结论长春新碱能够诱导人脑胶质瘤细胞产生Ｐ－糖蛋白介导的典型ＭＤＲ。胶质瘤中多药耐药基因产物Ｐ－糖蛋白表达的阳性率同肿瘤的恶性程度呈正相关。应用流式细胞仅能早期发现耐药细胞，具有临床推广价值。     

逆转录病毒载体介导中国单疱病毒TK基因转导脑胶质瘤细胞

目的：研究载中国单疱病毒胸苷激酶基因逆转录病毒重组体（ＲＶ－ＨＳＶ－ＴＫｃ）和羟甲基无环鸟苷（ＧＣＶ）体外转染和杀伤脑胶质瘤效果，探索应用该系统基因治疗脑胶质瘤。方法：ＲＶ－ＨＳＶ－ＴＫｃ重组体病毒感染胶质瘤细胞，Ｇ４１８筛选转染阳性胶质瘤细胞克隆。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测抗Ｇ４１８胶质瘤细胞中的ＴＫｃ基因表达。药物敏感实验观察ＴＫｃ胶质瘤细胞对ＧＣＶ的毒性反应。结果：１．０ｍｇ／ｍｌＧ４１８筛选１０～１４天获抗性胶质瘤细胞克隆；Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交显示抗Ｇ４１８细胞ＴＫｃ基因明显表达；ＴＫｃ胶质瘤细胞对ＧＣＶ高度敏感，其ＥＤ５０为：Ｃ６ＴＫｃ０．０２μｇ／ｍｌ，Ｕ２５１ＴＫｃ０．００６μｇ／ｍｌ，Ｕ８７ＴＫｃ０．００４μｇ／ｍｌ，ＴＫｃ胶质瘤细胞对ＧＣＶ的敏感性是非转基因胶质瘤细胞的５００倍以上。结论：载中国ＴＫｃ基因逆转录病毒重组体可有效转染脑胶质瘤细胞并使其对ＧＣＶ高度敏感，该系统可望用于脑胶质瘤的基因治疗。     

神经生长因子在胎脑组织保存和移植中的应用

大鼠胚胎脑组织放入神经生长因子溶液或ＤＭＥＭ培养液中保存１－６天，观察不同时间细胞存活率，ＮＧＦ组均高于ＤＭＥＭ组。将这两种液体中保存５天的组织分别植入两组成年大鼠脑内，６－８周后组织学观察发现，ＮＧＦ组移植成活４／１０，对照组移植物成活３／９。     

新生期注射谷氨酸单钠对刺激下丘脑弓状核镇痛作用的影响

下丘脑弓状核（ＡＲＣ）是脑内β－内啡肽（β－ＥＮＤ）能神经元胞体集中的一个主要核团。新生期注射谷氨酸单钠（ＭＳＧ）能选择性地损毁ＡＲＣ中的神经元胞体而不累及路过纤维，是研究ＡＲＣ中神经元生理功能的一个良好模型。本实验利用这个实验模型研究刺激ＡＲＣ的镇痛效应。结果发现在这种ＭＳＧ处理的大鼠，刺激ＡＲＣ不再出现明显的镇痛效应（用电刺激鼠尾－嘶叫法测定）。这时脑室内注射β－ＥＮＤ（５μｇ／１０μｌ）能使刺激ＡＲＣ的镇痛效应恢复；若脑室注射多巴胺（ＤＡ，５μｇ／１０μｌ）不仅没有恢复作用，反而能削弱正常大鼠刺激ＡＲＣ的镇痛效应。实验结果提示，经ＭＳＧ处理的大鼠之所以不出现明显的镇痛效应，可能是由于ＡＲＣ中丧失了β－ＥＮＤ能神经元的结果，ＤＡ能神经元在其中不起重要作用。     

大鼠脑针刺损伤引起的碱性成纤维细胞生长因子变化与5‘—甲基？…

系统观察大鼠ＣＮＳ针刺损伤后表达ｂＦＧＦ、ＦＧＦ受体（ＦＧＦＲ）和ＧＦＡＰ的细胞种类、时相以及相互影响，探讨ＦＧＦＲ抑制剂－－５’－ＭＴＡ对体内反应生形胶质化的影响。将７５只ＳＤ雄性大鼠均分１５组：伤后０．５ｈ￣３０ｄ处死的实验组与对照组。将２０只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠均分２大组。甲组伤后４ｄ处死（５只加药鼠），乙组伤后８ｄ经（５只加药鼠）；其中非加药鼠作相应单纯损伤对照组。ＨＥ染色和免疫组化染色观     

重症肌无力患者周围血中CD4+T淋巴细胞亚群的研究

目的研究ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞的功能亚群在重症肌无力（ｍｙａｓｔｈｅｎｉａｇｒａｖｉｓ，ＭＧ）发病中的作用。方法采用免荧光双标记技术和流式细胞仪对３９例ＭＧ患者和１８例健康对照者周围血中ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞的两个亚群（ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ－）的百分率进行测定。结果ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋亚群的百分率在ＭＧ组和ＡＣｈＲＡｂ阳性组明显低于对照组和ＡＣｈＲＡｂ阴性组；而ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ－细胞的百分率在ＭＧ组和ＡＣｈＲＡｂ阳性组显著高于对照组和ＡＣｈＲＡｂ阴性组。结论表明ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞的两个功能不同亚群在ＭＧ患者体内发生了异常改变，与ＡＣｈＲＡｂ的产生有关。     

糖皮质激素对重症肌无力患者周围血IL－2活性及sIL－2R水平的影响

检测了４２例重症肌无力（ＭＧ）患者周围血单个核细胞（ＰＢＭＣ）白细胞介素－２（ＩＬ－２）活性及血清可溶性白细胞介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）水平，重点观察了１４例ＭＧ患者在糖皮质激素（ＧＣ）治疗后ＩＬ－２活性及ｓＩＬ－２Ｒ水平变化。结果显示，ＭＧ患者ＰＢＭＣＩＬ－２活性显著低于正常对照组，而血清ｓＩＬ－２Ｒ水平显著高于正常对照组，且ＭＧ患者ＩＬ－２活性与ｓＩＬ－２Ｒ水平之间呈显著负相关；应用ＧＣ治疗后，ＩＬ－２活性显著升高，ｓＩＬ－２Ｒ水平显著下降。提示ＭＧ患者ＩＬ－２活性变化与ｓＩＬ－２Ｒ水平密切相关，ＧＣ可通过影响ＩＬ－２活性及ｓＩＬ－２Ｒ水平而发挥免疫治疗作用。     

多巴胺和谷胱甘肽对PC12细胞凋亡的影响

目的研究帕金森病（ＰＤ）黑质多巴胺神经元的死亡机制。方法用脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）标记法，借助荧光显微镜观察多巴胺（ＤＡ）和还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）对ＰＣ１２细胞凋亡的影响。结果发现ＤＡ可诱发ＰＣ１２细胞凋亡，适中浓度时（０．４５ｍｍｏｌ／Ｌ）ＰＣ１２细胞凋亡数最多（凋亡率为４８．７％±６．３％）；抗氧化剂还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）可部分阻止ＤＡ诱发的ＰＣ１２细胞凋亡（Ｐ＜０．０１）。结论凋亡参与了ＰＤ的病变过程，采用适当的抗氧化剂对于ＰＤ治疗具有积极的意义。     

基因工程重组TGF-α-PE40融合蛋自治疗人脑胶质瘤的实验研究

目的评价基因工程重组ＴＧＦ－α－ＰＥ４０融合蛋白在体外、体内对人脑胶质瘤的治疗作用。方法体外使用改良ＭＴＴ法测定ＴＧＦ－α－ＰＥ４０融合蛋白对体外培养的恶性胶质瘤细胞生长抑制作用，同时检测各细胞株表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）的表达情况；体内利用Ｕ２５１裸鼠移植瘤模型观察不同剂量的融合蛋白对移植瘤体积增长的影响。结果　ＴＧＦ－α－ＰＥ４０融合蛋白对体外培养恶性胶质瘤细胞有明显的生长抑制作用，其作用依赖于肿瘤细胞ＥＧＦＲ的表达；对裸鼠移植瘤，２５０ｕｇ／ｋｇ组用药后２１日内瘤体积无明显增长，抑瘤率为４６．４％。结论ＴＧＦ－α－ＰＥ４０融合蛋白可以选择性地抑制表达ＥＧＦＲ的胶质瘤的生长。     

迪谢内/贝克肌营养不良患者视网膜眼电图改变特征

目的 研究迪谢内／贝克肌营养不良（ＤＭＤ／ＢＭＤ）患者视网膜眼电图（ＥＲＧ）的改变特征，探讨ＥＲＧ对ＤＭＤ／ＢＭＤ的诊断价值及ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ在视网膜信号传导上的作用。方法 对２２例临床确诊的ＤＭＤ／ＢＭＤ患者进行详细的眼科检查和ＥＲＧ检测，采用ＥＲＧ国际测量标准记录结果。结果 全部患者眼科检查无明显异常。２２例患者中１６例（７２．７％）出现异常ＥＲＧ改变；其中１５例为暗适应蓝光ｂ波波幅下降或（和）消失（Ｐ〈０．００１）。１３例暗适应白光ｂ波波幅下降或（和）替伏期延长（Ｐ〈０．００１）。１２例ｂ／ａ波波幅比≤（Ｐ〈０．００１）。１６例振荡电位ＯＰｓ１～４波波幅下降。结论 ＥＲＧ可作为ＤＭＤ／ＢＭＤ诊断和症状的一项有价值的检查。ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ及同源蛋白在视网膜电信号的传导上起着重要作用。     

神经生长因子在胎脑组织保存和移植中的应用

大鼠胚胎脑组织放入神经生长因子（ＮＧＦ）溶液或ＤＭＥＭ培养液中保存１～６天，观察不同时间细胞存活率，ＮＧＦ组均高于ＤＭＥＭ组。将这两种液体中保存５天的组织分别植入两组成年大鼠脑内，６～８周后组织学观察发现，ＮＧＦ组移植成活４／１０，对照组移植物成活３／９．尽管两组移植物成活率比较差别不显著（Ｐ＞０．０５），但是移植物生存质量ＮＧＦ组明显优于对照组。     

SOD对脑缺血—再灌注损伤大鼠纹状体谷氨酸转运体功能的影响

目的 探讨超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）对缺血－再灌注损伤（Ｉ－Ｒ）大鼠纹状体谷氨酸转运体功能（ＧＴＦ）的影响。方法 采用大鼠三血管夹闭、松夹制作脑Ｉ－Ｒ损伤模型。利用脑组织突触膜颗粒对＾３Ｈ－Ｌ－谷氨酸摄入量的测定及分光光度法观察ＧＴＦ的改变,同时测定组织丙二醛（ＭＤＡ）的含量及ＳＯＤ活性的变化。     

重症肌无力B细胞免疫应答涉及乙酰胆碱受体的全部亚单位

用酶联免疫斑点（Ｅｌｉｓｐｏｔ）法计数乙酰胆碱受体（ＡＣｈＲ）及其α－、β－、γ－和δ－４种亚单位的特异性ＩｇＧ抗体分泌细胞，评价重症肌无力（ＭＧ）患者外周血Ｂ细胞免疫应答。与其他神经疾病（ＯＮＤ）组相比，ＭＧ组存在显著高水平的ＡＣｈＲ及其４种亚单位的抗体分泌细胞，ＭＧ组４种ＡＣｈＲ亚单位的抗体分泌细胞平均值为１０／１０５～１５／１０５外周血单个核细胞（ＭＮＣ），ＯＮＤ组为０．６／１０５～１．４／１０５ＭＮＣ（Ｐ＜０．０００１）。ＭＧ组ＡＣｈＲ抗体分泌细胞数总是高于任何一种亚单位抗体分泌细胞数，且对α－亚单位的Ｂ细胞免疫应答占有明显优势，这可能是α－亚单位存在主要免疫源区（ＭＩＲ）的间接证据。     

糖皮质激素对大鼠大脑皮层突触体高亲和摄取L—谷氨酸的快速,非基因组效应

本研究采用大鼠大脑皮层突触体，观察糖皮质激素（ＧＣ）对于Ｎａ＋依赖高亲和摄取３Ｈ－Ｌ谷氨酸（孵育４ｍｉｎ）的影响。发现ＧＣ包括皮质酮硫酸盐（Ｂ－ＳＯ４）、氢化可的松琥珀酸盐（Ｆ－ｓｕｃ）、地塞米松磷酸盐（ＤＥＸ－ＰＯ４）及皮质酮（Ｂ）均促进突触体摄取谷氨酸，且呈一定浓度依赖性。Ｂ－ＳＯ４１０－５ｍｏｌ／Ｌ时，谷氨酸摄取较对照组增加２５．６％，Ｂ－ＳＯ４、Ｆ－Ｓｕｃ及Ｂ最低有效剂量均为１０－７ｍｏｌ／Ｌ，ＤＥＸ－ＰＯ４最低有效剂量为１０－６ｍｏｌ／Ｌ。孵育２ｍｉｎ后即见Ｂ－ＳＯ４（１０－６ｍｏｌ／Ｌ）促进突触体摄取谷氨酸，孵育４ｍｉｎ后Ｂ－ＳＯ４的作用达高峰。１０－６ｍｏｌ／Ｌ睾酮及孕酮也有促进摄取谷氨酸的作用，而去氧皮质酮及１７β－雌二醇硫酸盐对突触体摄取谷氨酸没有显著影响，ＧＣ的作用有一定甾体特异性。ＧＣ胞内受体阻断剂ＲＵ４８６本身对谷氨酸摄取没有影响，但可部份阻断Ｂ的促进作用。由于已从神经元上离断下来的突触体不再受基因组机制影响，本实验中ＧＣ快速促进突触体摄取谷氨酸是非基因组机制介导的，其详细机制及潜在生理意义有待进一步探讨。