氟西汀对癫痫合并抑郁大鼠模型海马自噬的作用

目的探讨氟西汀对癫痫合并抑郁大鼠海马齿状回自噬的影响。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、氟西汀组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组。采用体重、摄食量、旷场试验评定大鼠抑郁水平;采用免疫组化测定大鼠海马齿状回beclin1、LC3-I、m ToR蛋白表达水平,荧光实时定量RT-PCR测定大鼠海马齿状回beclin1、LC3-I、m ToR基因表达水平。结果药物干预后,模型组体重、摄食量、垂直运动次数和水平运动次数明显低于对照组(P 0. 01);氟西汀组、3-MA组经药物治疗后以上指标高于模型组(P 0. 01,P 0. 05)。模型组海马齿状回beclin1、LC3-I表达显著升高,m ToR表达下降,与对照组相比有统计学意义(P 0. 01);氟西汀组、3-MA组大鼠海马齿状回beclin1、LC3-I表达下降,m ToR表达升高,与模型组相比差异有统计学意义(P 0. 01)。结论氟西汀可能通过改善癫痫合并抑郁大鼠海马齿状回区beclin1、LC3-I、m ToR表达,抑制细胞自噬。     

葛根素对大鼠颅脑损伤的保护作用

目的 探讨葛根素对大鼠颅脑损伤（TBI）的保护作用及其机制。方法 将45只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量葛根素组、中剂量葛根素组和高剂量葛根素组,每组9只。采用Feeney氏自由落体法制备TBI大鼠模型。低、中、高剂量葛根素组腹腔注射葛根素,剂量分别为10、25、50 mg/kg。造模后1、3、7 d采用改良神经功能缺损评分（mNSS）评价神经功能。造模后7 d,干湿法测定脑组织含水量;ELISA法检测脑组织丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、过氧化氢酶（CAT）、核因子κB （NF-κB）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、caspase-3水平;免疫印迹法检测Bax、Bcl-2的表达。结果 葛根素能显著降低TBI大鼠mNSS（P<0.05）,显著减轻脑组织水肿（P<0.05）,显著降低脑组织MDA、SOD、GSH、CAT、NF-κB、ICAM-1、IL-6、TNF-α、caspase-3水平（P<0.05）,显著下调Bax表达而上调Bcl-2表达（P<0.05）。结论 葛根素可通过减轻颅脑水肿、抑制氧化应激及炎性反应以及调节Bax/Bcl-2表达从而发挥神经保护作用。     

头孢曲松钠对大鼠蛛网膜下腔出血后认知功能的影响

目的 探讨头孢曲松钠（CEF）对大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）后的认知功能的影响及其机制。方法 将68只成年SD大鼠随机分为4组:正常组（n=12）、对照组（n=24）、CEF低剂量治疗组（n=8）和CEF高剂量治疗组（n=24）。采用枕大池双次注血方法建立大鼠SAH模型。SAH后3 h经小脑延髓池缓慢注射100 μl CEF（高剂量组浓度为100 μmol/L,低剂量组浓度为50 μmol/L）,对照治疗组注射等体积生理盐水。采用Morris水迷宫检测各组动物学习记忆能力;Western blot检测各组大鼠海马 Caspase-3和兴奋性氨基酸转运体2（EAAT2）的表达水平。结果 与对照组相比,CEF治疗组SAH后动物的水迷宫实验中的逃逸时间显著减少（P<0.05）,大鼠海马组织中EAAT2的表达增加（P<0.05）,Caspase-3的表达减少（P<0.05）。结论 CEF对SAH后具有显著的神经保护作用,CEF治疗可能通过上调星形胶质细胞EAAT2的表达逆转SAH诱导的神经损伤。     

香芹酚对大鼠急性脊髓损伤的保护作用

目的 探讨香芹酚对大鼠脊髓损伤（SCI）后神经功能的影响及其机制。方法 将60只雄性SD大鼠（200~250 g）随机分为5组:假手术组（n=12）、SCI组（n=12）、香芹酚组（n=36）,香芹酚组根据香芹酚剂量分为低、中、高剂量3个亚组,每亚组12只。低、中、高剂量香芹酚组SCI后30 min腹腔注射香芹酚,剂量分别为10、20、40 mg/kg,每日一次;假手术组和SCI组每日腹腔注射等量生理盐水。采用Allen法建立大鼠SCI模型;假手术组只行椎板切除手术。SCI后24、48、72 h,采用BBB评分评估大鼠神经功能;SCI后72 h,采用ELISA法检测损伤脊髓组织丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、过氧化氢酶（CAT）、caspase-3活性;Western-blot法检测损伤脊髓组织Bax,Bcl-2蛋白表达水平。结果 SCI后,大鼠BBB评分均明显降低（P<0.05）,损伤脊髓组织水肿指数以及MDA、caspase-3和Bax水平均明显增高（P<0.05）,而SOD、GSH、CAT、Bcl-2水平均明显降低（P<0.05）;香芹酚能明显改善大鼠BBB评分（P<0.05）,明显降低水肿指数以及MDA、caspase-3和Bax水平（P<0.05）,而显著增加CAT、SOD、GSH、Bcl-2水平（P<0.05）。结论 香芹酚可通过减轻脊髓水肿、抑制氧化应激反应以及抗凋亡作用而对SCI大鼠发挥神经保护作用。     

白藜芦醇对蛛网膜下腔出血后神经炎症的作用和机制研究

目的 研究白藜芦醇对蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）后血肿区脑组织神经炎症的作用和机制。方法 将48只成年雄性SD大鼠随机分为三组：假手术组,SAH组和SAH+白藜芦醇处理组,每组16只。采用枕大池两次注血法构建SAH模型。SAH组和SAH+白藜芦醇组在构建模型前15 min和构建模型后5min分别给予生理盐水或白藜芦醇各一次。于构建模型后72小时利用NSS评分评估大鼠的神经功能,然后处死大鼠并获取保存脑组织。利用ELISA检测脑组织内促炎因子IL-1,IL-6、TNF-α和抗炎因子IL-4,IL-10、TGF-β的表达水平,利用RT-PCR检测小胶质细胞M1型特征性基因IL-1β、CD32和M2型特征性基因CD206、Arginase-1的表达水平。结果 与假手术组相比,SAH组大鼠神经功能下降（P<0.05）,脑组织中促炎因子IL-1,IL-6、TNF-α和抗炎因子IL-4,IL-10、TGF-β的表达水平升高（P<0.05）,小胶质细胞M1型特征性基因IL-1β、CD32和M2型特征性基因CD206、Arginase-1的表达水平也升高（P<0.05）。与生理盐水处理组相比,白藜芦醇处理组神经功能损伤程度下降（P<0.05）,脑组织中促炎因子IL-1,IL-6、TNF-α表达水平降低、抗炎因子IL-4,IL-10、TGF-β的表达水平升高（P<0.05）,小胶质细胞M1型特征性基因IL-1β、CD32表达水平降低、M2型特征性基因CD206、Arginase-1的表达水平升高（P<0.05）。结论 白藜芦醇通过促进SAH后小胶质细胞由M1型向M2型转换,从而减轻了神经炎症和神经功能损伤。     

SNAI2与E-cadherin参与LRIG1对U251细胞侵袭与转移的抑制作用

目的 探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1（LRIG1）对人脑胶质瘤U251细胞侵袭与转移及U251细胞SNAI2、E-cadherin表达的影响。方法 传代培养U251细胞,随机分为空白对照组、LRIG1空载体组、LRIG1过表达组、LRIG1低表达组、LRIG1低表达阴性对照组,应用脂质体介导的基因转染技术分别转染PBS、PEGFP-N1-U251质粒、PEGFP-LRIG1-U251质粒、LRIG1-siRNA、LRIG1-NC-siRNA。应用PCR、Western blot检测细胞LRIG1、SNAI2、E-cadherin mRNA和蛋白表达水平,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞转移能力。结果 LRIG1过表达组U251 SNAI2表达下调（P<0.05）,E-cadherin表达上调（P<0.05）,细胞侵袭与转移能力明显下降（P<0.05）。LRIG1低表达组U251细胞SNAI2表达上调（P<0.05）,E-cadherin表达下调（P<0.05）,细胞侵袭与转移能力明显提高（P<0.05）。结论 上调LRIG1可抑制U251细胞侵袭与转移,而敲除LRIG1可明显促进U251细胞侵袭与转移,SNAI2及E-cadherin可能参与其调节过程。     

缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

目的 探讨缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血的保护作用及其机制。方法 将30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血组和缺血预处理组,每组10只。使用改良线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型。采用Longa-Bederson（LB）评分法评估缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血后神经功能的影响,采用TTC染色方法分析大鼠海马区梗死面积,采用TUNEL染色法分析大鼠海马区细胞凋亡,使用气相色谱方法分析缺血预处理后大鼠海马区域丙酮酸含量。结果 缺血预处理组大鼠LB评分[（1.67±0.21）分}明显优于缺血组[（3.17±0.31）分;P<0.05]。缺血预处理组大鼠海马区梗死面积[（154±8.1）mm2]明显少于缺血组[（221.20±5.86）mm2;P<0.05]。缺血预处理组大鼠海马区域丙酮酸含量[（3.70±0.20）μmol/g]明显高于缺血组[（2.58±0.17）μmol/g;P<0.05]。结论 缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血具有显著神经保护作用,其机制可能与明显减少大鼠脑组织梗死、增加海马丙酮酸含量、减少细胞凋亡有关。     

NaHS抑制Nox4 和 p22p hox的表达保护小鼠脑缺血再灌注损伤

目的 探讨NaHS对小鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制。方法 将105只C57小鼠随机分成假手术组（15只）、模型组（45只）和NaHS组（45只）,后两组按时间点24 h、48 h、72 h再分为3个亚组,每亚组15只。采用线栓法阻塞左侧大脑中动脉制作脑缺血再灌注损伤模型。NaSH组造模前30 min、造模后24、48 h各腹腔注射NaHS一次,100 μmol/kg;假手术组和模型组注射等体积生理盐水。采用Berderson改良量表评估神经功能,采用TTC染色法测量脑梗死体积,分别用PCR和免疫印迹法检查缺血脑组织还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4和p22-phox mRNA和蛋白表达水平。结果 与假手术组比,造模后24、48、72 h,模型组脑梗死体积均明显增高（P<0.05）,神经功能均显著变差（P<0.05）,缺血脑组织NOX4和p22-phox mRNA和蛋白表达水平均明显增高（P<0.05）,造模后48 h达高峰。而与模型组比,造模后24、48、72 h,NaHS组脑梗死体积均明显降低（P<0.05）,神经功能均显著改善（P<0.05）,缺血脑组织NOX4和p22-phox mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。结论 NaHS可能通过抑制Nox4 和 p22p hox的表达保护小鼠脑缺血再灌注损伤;伤后48 h可能是脑缺血再灌注损伤发展的一个关键点。     

抑制Hedgehog信号通路对人脑胶质瘤肿瘤干细胞体外增殖的影响

目的 探讨抑制Hedgehog信号通路对人脑胶质瘤肿瘤干细胞（GSCs）体外增殖的影响。方法 收集我院手术切除的胶质母细胞瘤标本,进行分离、培养和鉴定GSCs,应用环靶明抑制Hedgehog信号通路,采用免疫组化染色检测GSCs Hedgehog信号通路相关蛋白的表达,使用CCK-8试剂盒测定GSCs的增殖活性。结果 胶质母细胞瘤标本分离出来的细胞球表达CD133及Nestin;而且表达Hedgehog信号通路关键蛋白Sonic Hedgehog和Smo。环靶明对GSCs增殖的抑制率随浓度的升高显著增高（P<0.05）,而且随作用时间延长显著增高（P<0.01）。结论 Hedeghog信号通路的特异性抑制剂环靶明能够显著抑制体外培养GSCs的增殖。     

CUX-1在胶质瘤中的表达及其对临床病理和预后的意义

目的 探究转录因子CUX-1在胶质瘤中的表达及其对临床病理和患者预后的意义。方法 在TCGA数据库中对CUX-1在肿瘤和正常脑组织中的差异性表达及其对患者总体生存期的影响进行生物信息学分析。运用蛋白印迹、免疫组化实验检测CUX-1在不同级别胶质瘤中的表达,同时分析其与临床病理指标及患者预后的关系。结果 生信分析结果表明CUX-1在胶质瘤中表达显著上调,且CUX-1高表达明显缩短患者生存期。蛋白印迹、免疫组化结果证明CUX-1随肿瘤WHO分级的升高而上调（P<0.05）,且CUX-1与胶质瘤WHO分级及增殖指标Ki67、P53mut显著相关（P<0.05）。Kaplan-Meir分析示CUX-1低表达患者生存期显著长于高表达者（P<0.01）。结论 CUX-1在胶质瘤中显著上调,且与肿瘤增殖密切相关,同时CUX-1高表达提示患者预后较差。综上,CUX-1有望作为胶质瘤预后的分子标志物和治疗的潜在靶点。     

Notch信号通路在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤恢复期的表达变化

目的探讨局灶性脑缺血再灌注损伤恢复期Notch信号通路的表达变化。方法构建SD大鼠大脑中动脉模型(MCAO)。将大鼠分为:对照组(12只),急性期组(24只),恢复期组(24只);急性期组分为3 d和7 d两个亚组,恢复期组分为15d和30d两个亚组。采用RT-PCR和Western blot测定Notch信号分子的mRNA和蛋白的表达变化。结果与对照组大鼠相比,脑缺血再灌注后第3天Delta-like 1、Delta-like 3、Delta-like 4和Jagged 1的mRNA表达水平明显升高(P 0. 05);第30天的表达水平显著低于对照组(P 0. 05)。Notch 1和Notch 2的mRNA表达水平在脑缺血再灌注后第3天显著升高(P 0. 05);第30天,Notch 1(P 0. 05)、Notch 2(P 0. 05)、Notch 3(P 0. 05)和Notch 4(P 0. 01)的mRNA表达水平均显著低于对照组。脑缺血再灌注后第3天Hes-1(P 0. 01)和Hey-1(P 0. 05)的表达水平较对照组均明显升高;第30天,Hes-1和Hey-1的表达水平低于对照组(P 0. 05)。NICD1和NICD2在大脑局灶性缺血后第3天半暗带区的表达水平显著上升(P 0. 05);第30天的表达水平显著下降(P 0. 05)。结论大鼠脑缺血再灌注损伤恢复期可能通过抑制Notch信号通路的表达,起到神经保护作用。     

Hippocampal cell proliferation regulation by repeated stress and antidepressants

A recent hypothesis suggests reduced hippocampal neurogenesis in depression. Here, we examined cell proliferation in the dentate gyrus and the subventricular zone of rats given repeated stress, a paradigm that prolongs learned helplessness behavior, and whether antidepressants modulate the learned helplessness-associated altered cell proliferation. Decreased cell proliferation, number of clusters, and cells/cluster were noted in the dentate gyrus, but not in the subventricular zone, of learned helplessness rats. Both fluoxetine and desipramine reversed the learned helplessness behavior and increased the cell proliferation and the number of clusters in learned helplessness rats; only fluoxetine did so significantly. Both fluoxetine and desipramine significantly increased the number of cells/cluster. Our results suggest modified hippocampal neurogenesis in prolonged depression and in the mechanism of antidepressant action.     

表皮生长因子协同体对大脑中动脉闭塞性脑梗死急性期的保护性作用研究

目的研究表皮生长因子协同体(EGFC)对大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)急性期的作用,为其临床转化提供理论基础和实验依据。方法选取SD大鼠随机分为Sham组、MCAO组、低剂量EGFC组(2μg)、中剂量EGFC组(20μg)、高剂量EGFC组(200μg)。制备MCAO模型,缺血2 h后再灌注,3 h后腹腔给药,24 h后处死,采用TTC染色测定梗死体积;测定脑组织含水量,计算湿干比; ELISA检测脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子的表达水平。结果与MCAO组相比,不同剂量EGFC组梗死体积均减小,当给予EGFC 200μg时,差异有统计学意义(P 0. 01)。与MCAO组相比,不同剂量EGFC组脑组织含水量均降低,且差异有统计学意义(P 0. 05)。ELISA检测炎性因子,与Sham组相比,MCAO组和低剂量EGFC组中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量明显升高,差异具有统计学意义(P 0. 01);与MCAO组相比,中、高剂量EGFC组3种炎症因子的含量均降低,差异均有统计学意义(P 0. 05);与低剂量EGFC组相比,中、高剂量EGFC组3种炎症因子的含量均降低,差异均有统计学意义(P 0. 05,P 0. 01)。结论 EGFC对MCAO大鼠脑组织具有保护作用,且在一定范围内,随着给药剂量的增加,保护作用也增强。     

自噬及Rab9在阿尔茨海默病神经元变性过程中的作用

目的以12月龄的APPswe/PS1d E9双转基因小鼠为对象,研究自噬及Rab9在阿尔茨海默病神经元变性过程中的作用。方法以同窝同龄同性别野生型小鼠脑组织为对照,采用免疫荧光检测12月龄APPswe/PS1d E9转基因小鼠脑组织中Aβ1-16、LC3B和Rab9的表达;采用Western Blot对脑组织中LC3B-Ⅰ、LC3B-Ⅱ和Rab9蛋白表达进行定量分析。结果 12月龄APPswe/PS1d E9双转基因小鼠的皮质及海马区域有大量典型"有致密核心"的老年斑分布。12月龄的APPswe/PS1 d E9双转基因小鼠脑内LC3 B和LC3 B-Ⅱ的表达较对照组明显增多,差异具有统计学意义(LC3 B:0.819±0.034 vs.0.390±0.047,P=0.0005;LC3 B-Ⅱ:0.162±0.004 vs.0.067±0.001,P0.0001)。12月龄的APPswe/PS1 d E9双转基因小鼠脑内Rab9呈粗颗粒状,聚集为"半月形",分布于核周区,与在对照组小鼠脑内分布的形态不同;但两组在Rab9表达水平上差异无统计学意义(0.481±0.071 vs.0.508±0.064,P0.05)。结论阿尔茨海默病神经元变性过程中存在自噬诱导的增加和Rab9的功能和/或分布异常。     

卡马西平对成年癫大鼠海马齿状回BrdU/NeuN表达水平及其对空间记忆的影响

目的研究卡马西平对成年癫大鼠海马齿状回新生神经元的影响及其与空间记忆之间的关系。方法采用氯化锂和匹罗卡品联合诱导大鼠癫模型,利用5-溴脱氧尿苷嘧啶与神经元核性蛋白双标记观察海马齿状回内源性神经前体细胞分化为成熟神经元的情况;利用行为学分析评价大鼠的空间记忆。结果 (1)卡马西平可增加癫大鼠海马齿状回新生成熟神经元的数量(P<0.05);(2)卡马西平对癫大鼠的空间记忆有明显改善作用(P<0.01)。结论卡马西平增加癫大鼠海马齿状回新生成熟神经元形成,是其改善癫大鼠空间记忆的可能机制之一。     

大黄素对海人酸致痫小鼠海马神经细胞的保护作用

目的探讨大黄素对海人酸诱导的小鼠癫痫持续状态后海马神经细胞的保护作用。方法 90只ICR雄性小鼠随机分为对照组、癫痫持续状态组、大黄素治疗组(分为100、200和400 mg/kg组),每组18只。采用海人酸建立小鼠癫痫持续状态模型。通过HE染色和TUNEL染色观察大黄素对癫痫鼠海马神经细胞的形态学变化和凋亡情况;比色法测定谷苷胱肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)的活力; RT-PCR和Western blot检测海马组织中IL-1β、TNF-α、caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果大黄素(200和400 mg/kg组)可显著减轻癫痫所致的海马神经细胞的损伤和凋亡,提高GSH和SOD的活性,降低MDA的活性(P 0. 05);同时抑制海马中IL-1β、TNF-α及caspase-3mRNA和蛋白的表达量(P 0. 05)。结论大黄素对小鼠癫痫持续状态后海马神经细胞具有抗氧化、抗炎和抗凋亡等神经保护作用,其作用机制可能与提高GSH和SOD的活性,降低MDA的含量,并抑制IL-1β、TNF-α及caspase-3的表达有关。     

蛋白酶抑制剂H89对神经元细胞氧糖剥夺再灌注后高尔基体形态及细胞凋亡的影响

目的探讨蛋白酶抑制剂H89对神经元细胞经氧糖剥夺再灌注损伤后高尔基体形态和细胞凋亡的影响。方法将体外常规培养的小鼠海马神经元细胞HT22分为对照组、模型组和H89干预组。模型组与H89干预组按再灌注时间点分6h、12h和24h三个亚组。采用MTT法检测细胞存活率;Hoechest33258荧光染色法评估细胞凋亡;细胞免疫荧光技术观察高尔基体形态;Western blot技术检测GM130与GAAP蛋白表达。结果 H89干预组较模型组细胞活力有所上升,其中12h时间点(OD值0.1467±0.0090)与同期模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。H89干预组较模型组细胞凋亡率有所下降,但差异均无统计学意义(P0.05)。H89干预组在6h和12h时间点高尔基体碎裂程度较同期模型组稍有减轻。H89干预组GM130表达水平较模型组无显著升高(P0.05)。GAAP表达水平仅在24h时间点(灰度比值0.4066±0.0288)显著升高(P0.05)。结论 H89干预不能减轻神经元细胞经氧糖剥夺再灌注损伤后的高尔基体碎裂和细胞凋亡。