神经节苷脂GM1对大鼠液压伤后脑保护及其相关机理的研究

目的研究大鼠液压脑损伤后神经节苷脂GM1对脑组织含水量、自由基和兴奋性氨基酸(EAAs)的影响。方法雄性SD大鼠采用液压损伤法制备创伤性脑损伤模型。伤后5分钟,三个治疗组以不同剂量单次腹腔注射GM1,测量伤后30分钟脑组织自由基和EAAs浓度以及伤后24小时脑组织含水量。结果3 mg/kg和30 mg/kg剂量组,脑组织自由基和EAAs浓度明显降低,脑组织含水量明显减少。结论伤后早期足量给予GM1能减少自由基生成和降低脑组织EAAs浓度,减轻脑水肿。     

缺氧预处理对颅脑损伤大鼠脑组织MMP-9表达及含水量的影响

目的观察缺氧预处理对颅脑损伤(TBI)大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达和含水量变化。方法 SD雄性大鼠108只,随机分为对照组(n=6)、缺氧预处理组(HPC组,n=6)、TBI组(n=48)、缺氧预处理+外损组(HPCT组,n=48)。采用干湿重法测定脑组织含水量,RT-q PCR、Western blotting分别测定MMP-9 m RNA及蛋白表达水平。结果 TBI组和HPCT组MMP-9 m RNA在伤后3h、6h、12h、1d、3d明显升高(P0.05),MMP-9蛋白表达和脑组织含水量均在伤后3h、6h、12h、1d、3d、7d明显增加(P0.05)。HPCT组中MMP-9 m RNA在伤后3h、6h、12 h、1d、3d,MMP-9蛋白和脑组织含水量在伤后6h、12h、1d、3d、7 d明显低于TBI组(P0.05)。结论缺氧预处理能抑制颅脑损伤脑组织MMP-9表达从而减轻脑水肿,可能是缺氧预处理对颅脑损伤大鼠发挥脑保护作用的机制之一。     

大剂量白蛋白对大鼠液压颅脑伤后神经功能的影响

目的 :探讨白蛋白在治疗大鼠液压颅脑损伤后神经功能恢复的作用及剂量效应。方法 :80只SD大鼠随机分为 4组 ,Ⅰ组 :2g·kg-1、Ⅱ组 :1 2g·kg-1、Ⅲ组 :0 8g·kg-1、Ⅳ组 :0 4g·kg-1,液压打击致伤 ,半小时内经尾静脉注射不同剂量 2 0 %人血白蛋白。伤后1～ 7d记录神经功能恢复情况。结果 :行走功能实验、平衡功能实验及记忆功能实验Ⅰ组均优于其他组 (P <0 0 1)。结论 :伤后早期使用大剂量白蛋白可明显促进大鼠液压颅脑损伤后的神经功能恢复     

急性局灶性脑挫裂伤后大鼠血脑屏障改变的实验研究

目的:研究急性局灶性脑挫裂伤后大鼠血脑屏障的改变及对脑水肿的影响。方法:采用Feeney's自由落体撞击法建立急性局灶性脑挫裂伤模型。每组6只测量伤侧脑组织伊文思蓝(Evans Blue,EB)含量、脑组织含水量。每组3只电镜观察微血管内皮细胞超微结构改变。结果:急性局灶性脑挫裂伤后24h脑组织含水量为(79.79±0.83)%,与正常对照组(78.68±0.63)%相比有明显差异(P<0.01),脑损伤后6h脑组织中EB含量为(362.12±28.16)ug/g,与正常对照组(11.89±2.28)ug/g相比有明显差异(P<0.01);脑损伤后30min,微血管内皮细胞有轻度受损迹象,伤后3h毛细血管腔内有微绒毛形成,伤后6h微绒毛增多,伤后24~72h毛细血管腔明显狭窄。结论:脑含水量的变化与脑组织中EB含量变化不同步,BBB的开放先于脑水肿的形成。BBB的开放与微血管的机械性损伤、内皮细胞吞饮小泡增加、内皮细胞紧密连接中断有关,也与早期缺血、缺氧关系密切。     

银杏叶提取物对大鼠创伤性颅脑损伤后MMP-2和MMP-9的影响

目的为探讨银杏叶提取物(GBE)对大鼠创伤性颅脑损伤后(TBI)脑水肿及MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响。方法采用Feeney法建立大鼠TBI模型。80只健康雄性成年SD大鼠,采用随机数字表法分为4组(n=20):假手术组(Sham组)、TBI组、TBI+GBE组和TBI+强力霉素(DOX)组。于建模后1、3、7、14 d进行改良神经功能评分(m NSS);采用干湿重法测量损伤区脑组织含水量;免疫荧光和Western blotting测定脑组织中MMP-2、MMP-9蛋白表达变化。结果与Sham组比较,其他3组脑组织含水量和m NSS评分均显著升高(P0.05),脑组织中MMP-2和MMP-9蛋白表达上调(P0.05);与TBI组比较,TBI+GBE组和TBI+DOX组脑组织含水量和m NSS评分显著降低(P0.05),脑组织MMP-2和MMP-9蛋白表达下调(P0.05)。结论 GBE可减轻大鼠TBI后脑水肿,改善损伤后神经功能,其机制可能与抑制伤后脑组织MMP-2、MMP-9的表达相关。     

脑出血大鼠血肿周围白介素-10的表达及其与脑水肿的相关性

目的 探讨脑出血(ICH)大鼠血肿周围白介素-10(IL-10)的表达及其与脑水肿的相关性.方法 130只SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组和ICH组;应用肝素化Ⅶ型胶原酶建立大鼠ICH模型;制模后12 h、24 h、48 h、72 h、7 d及14 d应用Bederson量表评定神经功能缺损程度,干/湿重法测定脑组织含水量,免疫组化方法检测脑组织血肿周围IL-10的表达.结果 (1)ICH组大鼠神经功能缺损评分与脑组织含水量均在ICH 12 h升高,48 h达高峰,7 d后恢复正常.(2)ICH组脑组织IL-10表达ICH 12 h明显升高,14 d达高峰,各时间点间均显著高于正常对照组和假手术组(P＜0.05～0.01).(3)ICH组神经功能缺损评分与脑组织含水量呈正相关(r=0.761,P＜0.01),脑组织IL-10表达与脑组织含水量、神经功能缺损评分呈负相关(r=-0.65,-0.753,均P＜0.01).结论 ICH大鼠血肿周围脑组织IL-10表达逐渐升高,可能参与了ICH后减轻脑水肿、促进神经功能恢复的脑保护作用.     

大鼠液压脑损伤后皮层微血管改变与脑水肿的关系

目的探讨大鼠液压脑损伤后皮层微血管损伤情况及其与伤后脑水肿的关系。方法成年SD大鼠30只,随机分为正常组（n=6）、假手术组（n：6）、损伤组（n=18）,其中损伤组分为伤后6h、24h、72h三亚组,每亚组6只。利用液压冲击法建立大鼠颅脑损伤模型,显微镜下观察直接损伤侧和非直接损伤侧皮层微血管损伤隋况,CD34标记血管内皮细胞评价血管密度改变,干湿重法检测脑组织含水量的变化。结果大鼠皮层微血管损伤后6h可见血管支行迂曲、扩张、充血,伤后24h可见少量血栓形成,损伤后72h可见有较多血栓形成。损伤组CD34阳性细胞数明显低于假手术组和对照组（P〈0．05）,而脑组织含水量明显高于假手术组和对照组（P〈0．05）,而后两组无统计学差异（P〉O．05）。损伤组直接损伤侧皮层微血管损伤较非直接损伤组严重,而且伤后24h较伤后6、72h严重。结论颅脑损伤后脑微血管损伤为全脑性血管损伤,这可能是伤后脑水肿形成的机制之一。     

弥漫性颅脑损伤后脑水肿与血清镁离子变化及意义

目的探讨弥漫性颅脑损伤后脑组织含水量及血清中Mg2 含量的变化规律及意义。方法应用SD雄性大鼠55只,随机分为两组:假手术对照组(n=5)和弥漫性脑损伤组(n=50)。损伤组损伤后不同时间处死大鼠,按Elliott等的方法测定脑组织含水量;应用全自动生化分析仪检测血清中Mg2 浓度。结果弥漫性颅脑损伤后脑组织含水量短期内就增加,伤后6h达较高水平,约130h达高峰,随后缓慢下降,损伤后336h仍然高于正常水平(P<0.05);损伤后的血清中的Mg2 含量迅速下降,约60h达到最低,虽然以后有所恢复,但伤后336h仍低于对照组(P<0.01)。结论①大鼠弥漫性脑损伤后短期内脑组织含水量快速增加,伤后6h就达到较高水平。②大鼠弥漫性脑损伤后血清中Mg2 含量约伤后60h降到最低,以后逐渐回升。③弥漫性脑损伤后补充镁剂应从伤6h就开始,补充时间应不低于两周。     

老龄和低龄大鼠脑出血后脑水肿的研究

目的对比研究老龄和低龄大鼠尾状核出血后血肿周围组织血-脑脊液屏障(BBB)破坏的时机和脑水肿的严重程度。方法将50μl自体动脉血注入老龄(16个月龄,n=28)和低龄(2个月龄,n=28)Wistar大鼠尾状核,30min和24h后进行MRI(T_2*WI、T_2WI、DWI)观察,同时对发病后6h、12h、24h血肿周围和对侧皮质脑组织对伊文氏蓝的通透性、脑组织含水量、神经功能障碍程度进行对比观察。结果发病6h后老龄和低龄大鼠均出现BBB的破坏,12h和24h时老龄纽破坏较低龄组更为严重;24h时老龄组脑组织含水量、神经功能缺损、T_2WI显示的病灶体积(包括血肿和水肿)均明显大干低龄组。结论老龄大鼠脑出血后神经功能损害、血肿周围组织水肿、BBB破坏均较低龄大鼠严重。     

COX-2在大鼠脑出血损伤机制中的实验研究

目的观察大鼠脑出血后环氧合酶2(COX-2)蛋白动态表达情况与血肿周围脑组织含水量的相互关系,及COX-2抑制剂对ICH大鼠脑水肿和神经功能的影响,探讨COX-2在ICH损伤机制中的作用。方法应用立体定向技术将自体血注入大鼠壳尾核制备脑出血模型,160雄性SD大鼠分为正常对照组、假手术组、脑出血组和尼美舒利治疗组。后3组每组50只,分6h、12h、24h、72h、7d五个时间点进行神经功能障碍评分,测定血肿周边脑组织含水量,免疫组织化学染色观察COX-2蛋白动态表达。结果脑出血组COX-2表达高于正常对照组(P<0.05),治疗组COX-2表达明显低于ICH组(P<0.05)。治疗组脑组织含水量明显低于ICH组(P<0.05)。治疗组各时间点神经功能评分明显高于ICH组(P<0.05)。ICH组COX-2蛋白表达与血肿周围脑组织含水量相关(r=0.911,P<0.001)。结论ICH后COX-2蛋白表达升高促进脑水肿形成,加重神经功能缺失。尼美舒利能抑制COX-2蛋白表达,减轻脑水肿,改善ICH后大鼠神经功能。     

大鼠颅脑爆震伤模型的建立

目的建立稳定、可靠的大鼠颅脑爆震伤模型。方法 SD大鼠96只随机分为8、10、12cm组和对照组(n=24),将大鼠麻醉后分别放置距电雷管(600mgTNT当量)垂直距离8 cm、10 cm、12 cm处进行爆炸,于伤后24h行头颅MRI检查,6h、24h、3d、7d行检测损伤区光、电镜下病理变化。结果 8 cm组大鼠几乎在当天全部死亡,10 cm组大鼠存活时间也较短,少有存活7天,12 cm组大鼠存活时间在7天以上,且伤后24小时MRI提示挫伤区存在血肿及挫裂伤,病理学提示皮质、脑膜、脑室周围、神经元胞体、线粒体等均出现不同程度水肿。结论 600mgTNT电雷管在距离大鼠头部垂直12 cm处可制作稳定的大鼠颅脑爆震伤模型。     

促红细胞生成素抑制大鼠创伤性脑水肿形成

目的探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对大鼠创伤性脑水肿的影响及其的潜在分子机制。方法取SD大鼠90只,随机分为假手术组,创伤组和EPO组。创伤组:制作改进式Feeney's脑创伤模型;EPO组:伤后给大鼠腹腔注射重组人促红细胞生成素(5000 IU/kg)。伤后24 h,72 h和120 h,使用平衡木法评定各组大鼠行为学评分。伤后72 h时,检测各组大鼠脑含水量,脑组织胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)的磷酸化水平、水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)mRNA和蛋白表达水平。结果在伤后各时间点,EPO组大鼠神经功能障碍的行为学评分也较创伤组有明显降低(均P<0.05)。伤后脑组织含水量由假手术组的78.76%±0.65%上升至创伤组的81.26%±0.40%(P<0.01),EPO组脑含水量则降低至79.71%±0.59%(与创伤组比较P<0.01)。与假手术组比较,创伤组ERK磷酸化的水平在伤后72 h明显上升(P<0.01),EPO组伤后ERK磷酸化水平则明显低于创伤组(0.369±0.046 vs.0.815±0.127,P<0.01);AQP4 mRNA和蛋白在伤后的表达水平均较假手术组明显增高(均P<0.01),EPO组AQP4 mRNA和蛋白的表达水平较创伤组均显著下降(均P<0.01)。结论EPO可抑制大鼠脑创伤后ERK信号通路的过度激活及下游AQP4的过表达,减轻大鼠的创伤性脑水肿。     

神经减压缓解糖尿病大鼠触诱发痛的机制研究

目的探讨周围神经减压术缓解糖尿病大鼠触诱发痛的机制。方法将健康成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为5组,分别为Ⅰ组(正常对照,n=10)、Ⅱ组(糖尿病模型,n=20)、Ⅲ组(糖尿病模型+乳胶管置入,n=10)、Ⅳ组(糖尿病模型+乳胶管置入+神经减压,n=10)及Ⅴ组(糖尿病模型+乳胶管置入+单纯术区显露,n=10)。糖尿病模型采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射,神经减压法即去除坐骨神经乳胶管。建模后3 d,采用up-down法检测各组大鼠的缩足阈值,保留Ⅱ~Ⅴ组中出现触诱发痛的大鼠。采用透射电镜观察5组大鼠坐骨神经的形态,分别对有髓和无髓神经纤维进行测量。进一步采用蛋白质免疫印迹(WB)和免疫荧光实验对5组大鼠脊髓后角γ-氨基丁酸B型(GABAB)受体的表达进行定量和定位检测。结果术后3周,STZ注射结合乳胶管置入(Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组)较单纯性STZ注射(Ⅱ组)大鼠触诱发痛的发生率高[分别为86.7%(26/30)、55.0%(11/20),χ^2=6.254,P=0.012]。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组的缩足阈值[分别为(4.06±1.28)g、(3.09±1.43)g、(4.02±1.96)g、(4.15±1.87)g]均低于Ⅰ组[(13.41±1.88)g,均P<0.05];术后5周,Ⅳ组的缩足阈值高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ组(均P<0.05)。电镜观察结果显示,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组有髓和无髓神经纤维的面积、密度均较Ⅰ组减小(均P<0.05),有髓神经纤维的g比例较Ⅰ组增加(均P<0.05);Ⅳ组有髓纤维的面积和密度均大于Ⅱ、Ⅴ组(均P<0.05)、g比例低于Ⅱ、Ⅴ组(均P<0.05)。WB结果显示,神经减压术后3周,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组GABAB受体的表达量均较Ⅰ组下降(均P<0.05),而Ⅳ组高于Ⅴ组(P<0.05)。免疫荧光结果显示,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组中GABAB受体在脊髓背角内神经丝蛋白(NF)-200+区和NF-200+神经元的表达均较Ⅰ组下调(均P<0.05)。结论周围神经减压术可缓解糖尿病大鼠触诱发痛,主要通过去除有髓神经纤维的压迫、解除GABAB受体下调介导的中枢敏化,从而恢复脊髓兴奋性升高的病理状态。     

脑损伤后N-乙酰天冬氨酰谷氨酸肽酶抑制的神经保护

目的 探索颅脑损伤后N-乙酰天冬氨酰谷氨酸(NAAG)肽酶抑制的神经保护效应.方法 将20只SD大鼠随机分成4组后制作中度液压颅脑损伤模型.伤后3个时间点(即时,8 h,16 h)分别经腹腔注射新型NAAG肽酶抑制剂ZJ-43(各组剂量:0,50,100,150 mg/kg).伤后24 h处死动物取脑组织行Fluoro-Jade B组织荧光染色以及GFAP免疫组化染色.通过立体细胞计数着重观察大鼠海马CA2/3区退变神经元及正常胶质细胞的数量变化.结果 ZJ-43能显著减少颅脑损伤后的神经元退变(P＜0.01),其中小剂量处理组(50 mg/kg)保护作用最佳,还能同时显著减少儋颅脑损伤后的胶质细胞丢失(P＜0.05).结论 阻断NAAG肽酶活性能有效放大内源性递质NAAG的神经保护作用,从而阻断谷氨酸兴奋毒性的病理进程,有望成为治疗颅脑损伤的新策略.     

脑胶质瘤环磷腺苷效应元件结合蛋白的表达

目的探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白(c AMP-response element binding protein,CREB)在不同级别脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测CREB在5例颅脑损伤减压术后脑组织切片,55例不同分化程度脑胶质瘤组织切片中的表达,并采用Western blot、RT-PCR检测CREB在10例颅脑损伤减压术后脑组织标本,30例不同分化程度脑胶质瘤组织中的表达。结果免疫组化法测得CREB的阳性表达率分别为对照组2/5,Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤10/15,Ⅲ级胶质瘤11/12,Ⅳ级胶质瘤28/28,免疫组化显示数据总体上有统计学差异(H=28.183,P0.05)。RT-PCR法检测2~(-ΔΔCt)值,对照组:1.00±0.00,Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤:1.35±0.07,Ⅲ级胶质瘤:2.88±0.11,Ⅳ级胶质瘤:3.75±0.20。脑胶质瘤组织中CREB的表达均高于对照组脑组织,且各级别癌组织间有统计学意义(F=1.208,P0.05)。Western blot法测得对照组:0.311±0.014,Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤:0.469±0.026,Ⅲ级胶质瘤:0.641±0.028,Ⅳ级胶质瘤:0.896±0.024,各组间有统计学差异(F=1.123,P0.05)。结论 CREB在不同分化程度脑胶质瘤组织中均存在过表达现象,与肿瘤的分化程度呈正相关,可能在胶质瘤发生发展过程中起着重要的调节作用。     

金尔伦治疗急性颅脑损伤的剂量效应研究

目的探讨金尔伦(盐酸纳洛酮)在治疗大鼠液压脑损伤后神经功能恢复和病理损害程度的剂量效应.方法将104只SD大鼠随机分为4组,伤后早期分别腹腔注射0.03 mg/Kg(小剂量组)、0.3 mg/Kg(中剂量组)、3 mg/Kg(大剂量组)金尔伦和等量生理盐水(对照组),连续7 d.结果中、大剂量组动物伤后脑神经功能恢复、脑水肿减轻程度及光、电镜检查显著优于对照组及小剂量组.结论伤后早期使用中剂量和大剂量金尔伦(盐酸纳洛酮)对大鼠液压颅脑损伤有明显的治疗效果.     

大鼠颅脑创伤后肝细胞生长因子表达变化的实验研究

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)在颅脑创伤后的表达趋势,为颅脑创伤治疗中的HGF干预策略提供前期研究基础. 方法 96只wistar大鼠按随机数字表法分为实验组和假手术组,实验组为液压冲击中度颅脑创伤大鼠,并分为伤后2h、6h、12h、24 h、72h、168 h、336 h组,假手术组不致伤,每组再分为两个亚组.每亚组6只,一组行HE及免疫组化染色,观察伤后病理变化及HGF的表达部位和表达量,另外一组用RT-PCR的方法 观察创伤后HGF mRNA表达情况.结果 在创伤后的大鼠大脑皮层组织中,HGF在蛋白水平以及基因水平都出现表达增高的情况.创伤边缘区HGF阳性细胞数从伤后24 h开始增多,168 h达高峰,336 h有所下降,但仍高于伤前水平,差异有统计学意义(P<0.05).HGF mRNA表达量从创伤后72 h开始增加,168 h达高峰,与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论 HGF作为神经营养因子和血管生长因子,可能参与了颅脑创伤后神经元的保护和组织的修复、再生.     

环氧合酶-2抑制剂对脑外伤大鼠大脑皮质水通道蛋白9表达的影响

目的 探讨环氧合酶-2抑制剂（塞来昔布）对脑外伤大鼠大脑皮质水通道蛋白9（AQP9）表达的影响.方法 SD大鼠150只,随机分为假手术组、脑外伤组和塞来昔布组,各50只.采用Feeney＇s自由落体法制作脑外伤模型,采用干湿重法测定脑含水量,免疫组化和Western blot方法检测大鼠大脑皮质水通道蛋白9的表达.结果 脑外伤后3h含水量明显上升,6h时皮质含水量最高,24 h明显下降,而相同时间点的塞来昔布组大鼠含水量则明显较低（P＜0.05）.免疫组化和Western blot结果显示,相同时间点的脑外伤组大鼠大脑皮质AQP9蛋白表达量明显高于假手术组（P＜0.05）,而给予塞来昔布处理后AQP9蛋白的表达明显降低（P＜0.05）.结论 塞来昔布能够通过降低AQP9蛋白表达参与脑外伤水肿的调节.