慢病毒介导的新型Tet-On系统大鼠GDNF和TH双基因脑内转移对帕金森病大鼠模型的保护作用

目的探讨慢病毒介导的新型Tet-On系统大鼠胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因和酪氨酸羟化酶(TH)双基因直接转移对帕金森病(PD)大鼠的保护作用。方法将携带TH、GDNF基因并含启动子为Palb的四环素应答元件的慢病毒(Lv-TH-GDNF)和四环素反式作用子rtTA2s-M2病毒共同注射到SD大鼠左侧纹状体,用强力霉素(DOX)诱导大鼠目的基因GDNF和TH的表达。1周后在大鼠的同侧纹状体注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)损毁纹状体的DA能神经元。通过旋转行为、黑质TH免疫组化染色以及高效液相色谱-电化学方法(HPLC-ECD)检测纹状体DA含量评估其保护效应;通过RT-PCR、免疫印迹观察Lv-TH-GDNF在脑内的表达。实验与健康对照组、磷酸缓冲液(PBS)对照组进行比较。结果在6-OHDA损伤后4周,Lv-TH-GDNF+rt-TA2s-M2+DOX组大鼠阿扑吗啡诱发的旋转效应均明显低于PBS对照组(P<0.01),损毁侧的的黑质区TH阳性细胞表达强度、纹状体DA含量均明显高于PBS对照组(P<0.01),但二者均低于健康对照组(P<0.01)。RT-PCR、免疫印迹结果显示,与PBS对照组比较,Lv-TH-GDNF+rtTA2s-M2+DOX组大鼠纹状体TH、GDNF基因的表达明显增高(P<0.01)。结论慢病毒介导的新型Tet-On系统大鼠GDNF和TH双基因脑内直接转移,在强力霉素诱导下可减缓6-OHDA诱发的大鼠DA能神经元进行性变性,具有保护作用。     

莱菔硫烷对帕金森病大鼠脑内多巴胺能神经元的保护作用及机制

目的 观察莱菔硫烷(sulforaphane,SF)对帕金森(PD)病大鼠模型脑内黑质多巴胺能神经元的保护作用.方法 健康成年雄性Wistar大鼠背部皮下注射鱼藤酮制备PD大鼠模型,药物治疗组同时给予大鼠腹腔注射EGCG.采用分光光度法检测大鼠脑内丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH),免疫细胞化学和免疫印记检测大鼠中脑黑质及纹状体中络氨酸羟化酶(TH)的表达变化.结果 Western blot结果显示试验组大鼠脑内中脑和纹状体中TH蛋白表达都比对照组有明显降低(P<0.05);莱菔硫烷药物干预后TH蛋白在中脑和纹状体比试验组明显增高(P<0.05),但是较对照组仍有明显减少(P<0.05).实验组大鼠在给予鱼藤酮背部皮下注射后导致大鼠脑内纹状体中脂质代谢产物MDA含量比对照组明显增加(P<0.01).莱菔硫烷药物干预组大鼠脑内纹状体中MDA明显减少(P<0.05),但较对照组仍明显增加(P<0.05).同时我们发现鱼藤酮背部皮下注射可以导致实验组大鼠脑内纹状体中GSH的含量比对照组明显减少(P<0.01);莱菔硫烷药物干预后大鼠脑内纹状体中GSH含量较实验组明显增加(P<0.05),但较对照组仍明显减少(P<0.05).结论 氧化应激在PD发病中起着非常重要的作用,抗氧化治疗能有效减轻大鼠脑内多巴胺能神经元损伤情况,同时改善PD样症状,为PD的治疗提供了新的靶点.     

依达拉奉对6-OHDA诱导的帕金森病大鼠黑质纹状体神经元的保护作用

目的探讨依达拉奉对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森病(PD)大鼠模型的神经保护作用及其作用机制。方法用6-OHDA制备SD大鼠PD模型,观察依达拉奉对PD模型大鼠行为学改变、酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数和超氧化物歧化酶(SOD)、羟自由基(.OH)的影响。结果依达拉奉呈剂量依赖性减少阿朴吗啡(APO)诱发的大鼠PD模型旋转次数(P<0.01);依达拉奉(3mg/kg×14d,×28d)可阻止模型大鼠TH阳性细胞的减少,增加大鼠黑质纹状体SOD含量(P<0.05),降低.OH含量。结论依达拉奉增加大鼠黑质纹状体SOD含量,降低.OH含量,对6-OHDA诱导的PD动物模型具有神经保护作用。     

二苯乙烯苷对帕金森病模型大鼠行为学及多巴胺能神经元的影响

［摘要］　目的：观察何首乌主要有效成分二苯乙烯苷（TSG）对帕金森病（PD）模型大鼠行为学及脑内黑质多巴胺能神经元的影响。方法：采用6-羟基多巴胺（6-OHDA）单侧脑内黑质致密部（SNC）和中脑腹侧被盖区（VTA）两点注射法制备PD大鼠模型后，灌胃给予TSG低、中、高剂量 (50，100，200 mg&#8226;kg-1)，qd，连续5周。实验同时设正常对照组和美多芭阳性对照组（125 mg&#8226;kg-1），每组10只。用旋转行为检测及Rotarod试验观察各组大鼠的行为学变化，用免疫组化法观察大鼠脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元的表达，用高效液相色谱-电化学法（HPLC-ECD）测定大鼠脑黑质多巴胺（DA）及3,4-二羟基苯乙酸（DOPAC）含量。结果：行为学检测结果表明，模型组大鼠旋转次数及运动协调性均低于正常对照组(P<0.01)，而TSG与美多芭给药可改善大鼠旋转行为及运动协调性。TH免疫组化检测结果显示，TSG处理组脑黑质部位损毁较轻，有较多残存的TH阳性细胞；而模型组黑质大部损毁，几乎无残存的TH阳性细胞；从HPLC-ECD测定结果可以看出，与正常对照组比较，模型组DA及DOPAC含量下降显著(P<0.05)，与模型组相比，TSG处理组脑内DA及DOPAC含量明显增加(P<0.05)。结论：TSG可改善PD大鼠的行为学改变，增加黑质-纹状体多巴胺及其代谢物含量并提高黑质多巴胺能神经元的残存率，提示TSG对PD可能具有一定的神经保护作用。     

百可利联合利福平对鱼藤酮诱导帕金森病大鼠黑质神经元的保护作用

目的本研究通过分析百可利联合利福平对鱼藤酮诱导帕金森病(PD)大鼠黑质神经元保护作用,为临床治疗PD提供指导。方法通过鱼藤酮诱导建立PD大鼠模型,采取随机数表法将模型大鼠分为模型组、百可利组、利福平组和联合组,选择正常大鼠作为对照组。百可利组皮下注射浓度3 g/L百可利(200 mg/kg·d)、利福平组皮下注射浓度3 g/L利福平(3 mg/kg·d)、联合组等剂量皮下注射百可利和利福平,对照组大鼠和模型组大鼠均皮下注射注射相应生理盐水。各组大鼠均分组干预3周。测定各组大鼠神经功能缺损评分、黑质神经元酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数、PI3K、AKT、GDNF和BDNF mRNA及蛋白表达。结果百可利组、利福平组和联合组大鼠神经功能缺损评分明显低于模型组大鼠(P0.01),联合组大鼠神经功能缺损评分明显低于百可利组和利福平组(P0.01),百可利组、利福平组和联合组大鼠神经功能缺损评分随干预时间增加而下降(F_(时间)=9.83,P0.01)。联合组大鼠TH阳性细胞数量高于模型组、百可利组和利福平组(P0.001)。百可利组和利福平组大鼠TH阳性细胞数量高于模型组(P0.001)。联合组、百可利组和利福平组大鼠神经元PI3K、AKT、GDNF和BDNF mRNA及蛋白相对表达高于模型组(P0.01)。联合组大鼠PI3K、AKT、GDNF和BDNF mRNA及蛋白相对表达高于百可利组和利福平组(P0.01)。结论百可利联合利福平能够有效抑制鱼藤酮诱导的PD大鼠神经损伤,其作用机制可能通过增加能够调控神经元细胞增殖PI3K/AKT信号通路和促进神经元功能分化GDNF、BDNF等神经营养因子实现。     

螺旋藻多糖对MPTP致多巴胺能神经元损伤的保护

目的探讨螺旋藻多糖(PSP)对MPTP制备的C57BL小鼠帕金森病(PD)模型多巴胺能神经元的保护作用。方法C57BL小鼠分5组:对照组、MPTP组、PSP高、中、低剂量预处理+MPTP组。用免疫组化、RT-PCR和HPLC-ECD方法检测黑质中酪氨酸羟化酶(TH)和多巴胺转运体(DAT)免疫反应阳性表达水平,TH和DAT mRNA表达水平及纹状体中多巴胺(DA)及其代谢产物3,4-二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量。结果模型小鼠黑质中TH和DAT免疫阳性细胞数目减少,TH和DAT mRNA表达水平降低,纹状体中DA、DOPAC和HVA含量降低(P<0.01)。PSP预处理组与模型组相比,TH和DAT免疫阳性细胞数目增加,TH和DAT mRNA表达升高,DA、DOPAC和HVA含量升高(P<0.05)。结论PSP对MPTP所致C57BL小鼠PD模型的多巴胺能神经元有保护作用。     

α-硫辛酸对帕金森病大鼠脑内黑质多巴胺能神经元保护机制研究

目的 探讨α-硫辛酸(LA)对帕金森病(PD)大鼠模型脑内黑质多巴胺能神经元的保护机制.方法 60只3月龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组、实验组和药物干预组,每组20只.对照组大鼠给予背部皮下注射葵花油,实验组和药物干预组背部皮下注射鱼藤酮制备PD模型,药物干预组大鼠同时给予LA腹腔注射;采用Western blot检测大鼠中脑多巴胺能神经元中酪氨酸羟化酶(TH)、转录因子NF-E2相关因子-抗氧化反应元件(Nrf2-ARE)和血红素氧合酶1(HO-1)的表达变化;采用分光光度法检测大鼠脑内纹状体中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量变化.结果 实验组大鼠中脑TH蛋白表达比对照组明显降低(P<0.05);药物干预组中脑TH蛋白在黑质比鱼藤酮组明显增高(P<0.05),但是较对照组仍有明显减少(P<0.05).实验组大鼠Nrf2和HO-1蛋白表达比对照组明显降低(P<0.05);药物干预组Nrf2和HO-1蛋白表达比实验组明显增高(P<0.05),但是较对照组仍有明显降低(P<0.05).与对照组相比,实验组大鼠纹状体组织中脂质代谢产物MDA含量明显增加(P<0.01),药物干预后纹状体中MDA含量明显减少(P<0.05),但较对照组仍明显增高(P<0.05).与对照组相比,实验组大鼠GSH的含量明显减少(P<0.01),药物干预后GSH明显增加(P<0.05),但较对照组仍显著降低(P<0.05).结论 LA能激活Nrf2-ARE信号通路对PD大鼠模型中脑多巴胺能神经元起到有效的神经保护作用,改善PD样症状.     

低分子量硫酸软骨素对MPTP致帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的:观察低分子量硫酸软骨素(CS)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致帕金森病(PD)模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用。方法:将C57BL/6小鼠随机分为对照组、MPTP损伤组以及低分子量CS低、高剂量组(100、400 mg/kg)。对照组和MPTP损伤组小鼠均灌胃等容生理盐水,各给药组小鼠均灌胃相应药物,每天1次,连续17 d。自给药后第11天开始,除对照组外,其余各组小鼠均于给药后腹腔注射MPTP溶液(20 mg/kg),每天1次,连续5 d,以复制PD模型。末次给药后,采用转棒式疲劳仪评价小鼠(每组10只)行为学的改变情况,采用免疫组织化学法和免疫荧光法检测小鼠(每组3只)中脑黑质中多巴胺神经元的损伤情况[酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞百分比、荧光强度百分比],采用高效液相色谱法检测小鼠(每组6只)脑纹状体中多巴胺的含量,采用化学比色法检测小鼠(每组6只)中脑黑质中氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)]水平。结果:与对照组比较,MPTP损伤组小鼠在转棒上的滞留时间显著缩短,中脑黑质中TH阳性细胞明显减少、荧光强度明显减弱,其阳性细胞百分比和荧光强度百分比,脑纹状体中多巴胺的含量以及中脑黑质中SOD、GSH-Px的活性均显著降低,MDA的含量显著升高(P<0.01)。与MPTP损伤组比较,低分子量CS各剂量组小鼠在转棒上的滞留时间显著延长,中脑黑质中TH阳性细胞明显增加、荧光强度明显增强,其阳性细胞百分比、荧光强度百分比以及脑纹状体中多巴胺的含量均显著升高,且高剂量组上述指标均显著长于或高于低剂量组(P<0.05或P<0.01);低分子量CS各剂量组小鼠中脑黑质中SOD、GSH-Px的活性均显著升高,低分子量CS高剂量组小鼠中脑黑质中MDA的含量显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:预防性给予低分子量CS可剂量依赖性地减轻MPTP致PD模型小鼠中脑黑质中多巴胺能神经元的损伤,增加其脑纹状体中多巴胺的分泌。这种作用可能与抑制脂质过氧化反应、提高组织的抗氧化能力相关。     

慢病毒介导新型Tet-On系统调控大鼠GDNF和TH双基因表达对帕金森病大鼠的实验研究

目的观察改良Tet-On系统修饰慢病毒(Lv-TH-GDNF)目的基因的表达调控及纹状体内直接转移对帕金森病(PD)大鼠的作用。方法 1用Lv-TH-GDNF与rt TA2s-M2病毒感染He La细胞,免疫印迹法检测强力霉素(Dox)对TH、GDNF基因表达的调控。2用Lv-TH-GDNF与rt TA2sM2病毒共同注射到PD大鼠患侧纹状体,Dox诱导目的基因表达。通过观察阿扑吗啡(APO)诱导旋转行为、黑质多巴胺能神经元数量、患侧纹状体DA、DOPAC含量评估Lv-THGDNF治疗效应;通过移植侧纹状体内TH与GDNF蛋白量评估外源基因在体内的表达。结果 1在体外He La细胞实验,仅Dox阳性组见TH、GDNF蛋白条带。2在动物体内实验,病毒移植4周后,与PBS对照组相比,仅病毒+Dox组大鼠旋转行为明显改善(P<0.01),损伤侧黑质致密部TH阳性细胞数、纹状体DA、DOPAC含量及TH和GDNF蛋白量明显增高(P<0.01)。结论新型Tet-On系统修饰的Lv-THGDNF目的基因表达受四环素类抗生素调控,在体外实验未见基础活动,且纹状体内直接转移对PD大鼠有一定治疗作用。     

益智仁挥发油抗帕金森模型小鼠黑质神经元凋亡的作用研究

目的:研究益智仁挥发油对帕金森(PD)模型小鼠黑质致密部尼氏小体、酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响和神经元凋亡的对抗作用。方法:实验分为6组,即正常对照(等容生理盐水)、模型(等容生理盐水,ig生理盐水第6天起同时复制模型,连续7d,每天1次)、司来吉兰(10mg·kg-1,ig司来吉兰第4天起同时复制模型,连续7d,每天1次)和益智仁挥发油高、中、低剂量(2.5、0.833、0.278mL·kg-1,ig益智仁挥发油第6天起同时复制模型,连续7d,每天1次)组。ip1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)复制C57BL小鼠PD模型。采用尼氏染色法观察尼氏小体表达;SABC免疫组化染色法观察益智仁挥发油对TH表达的影响;TUNEL染色法检测黑质神经元凋亡。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠黑质神经元的尼氏小体、TH表达阳性细胞数明显减少,神经元凋亡显著增加;与模型组比较,益智仁挥发油高、中剂量组小鼠黑质神经元内尼氏小体显著增多;益知仁挥发油高、中、低剂量组TH表达阳性细胞数显著增多,而凋亡细胞数量显著减少。结论:益智仁挥发油能对抗PD模型小鼠黑质神经元细胞凋亡。     

帕金森病小鼠和大鼠模型黑质纹状体中胆绿素还原酶B的表达

目的探讨胆绿素还原酶B(biliverdin-Ⅸβreductase,BVRB)在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phe-nyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)帕金森小鼠模型和6-羟基多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)帕金森大鼠模型黑质-纹状体内的表达。方法通过高效液相色谱的方法检测纹状体内多巴胺及其代谢产物的含量,通过免疫印迹的方法检测黑质纹状体内酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达,以确认模型的成功建立。对黑质纹状体BVRB的表达进行免疫印迹分析。结果与正常对照组相比,MPTP小鼠及6-OHDA大鼠模型纹状体内多巴胺及其代谢产物的含量均明显下降(P<0.01),黑质纹状体内TH表达水平也明显下降(P<0.05),而黑质纹状体BVRB的表达水平在两种模型中均明显增高(P<0.05)。结论黑质纹状体BVRB的高表达可能与帕金森病的氧化应激机制相关。     

毛钩藤碱对6-羟基多巴胺诱导的帕金森病模型大鼠神经保护作用及机制研究

目的 探讨毛钩藤碱对帕金森病(Parkinson′s disease, PD)模型大鼠的神经保护作用及机制。方法 采用右侧中脑黑质致密部注射6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine, 6-OHDA)制备大鼠PD模型,将建模成功的PD大鼠随机分为模型组、美多芭组、毛钩藤碱低剂量和高剂量组,同时设置正常对照组,每组12只。给予相应药物灌胃干预,每天1次,连续1个月。采用旋转试验、转棒试验和Morris水迷宫试验检测大鼠行为学变化;HE染色法观察大鼠右侧中脑黑质病理学变化;高效液相色谱法(HPLC)检测大鼠右侧纹状体中多巴胺(dopamine, DA)水平;免疫组化法检测大鼠右侧中脑黑质中多巴胺能神经元标志物酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)表达;ELISA法检测大鼠右侧中脑黑质IL-6、IL-1β和TNF-α水平;Western blot检测大鼠右侧中脑黑质中NF-κB p65、NF-κB抑制因子α(IκBα)、p-IκBα等蛋白表达水平。结果 毛钩藤碱能显著改善PD大鼠行为学障碍及中脑黑质损伤,升高纹状体DA含量及中脑黑质中TH阳性神经元数量和Iκ...     

丙戊酸钠对帕金森病小鼠多巴胺能神经元及胶质细胞源性神经营养因子表达的影响

帕金森病(Parkinson's disease ,PD)是一种神经系统退行性疾病,主要表现为中脑黑质致密部多巴胺能神经元的丧失,纹状体多巴胺含量下降[1],至今尚无有效的治疗手段.丙戊酸钠(valproate,VPA) 是临床上作为治疗双相精神障碍的药物,能有效控制患者的躁狂和抑郁症状[2].胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF)最初从大鼠胶质瘤细胞系B49条件培养液中分离纯化,对大鼠中脑多巴胺能神经元有特异性营养作用[3].为探讨VPA对小鼠帕金森病中脑黑质多巴胺能神经元及纹状体GDNF表达的影响,本研究拟用C57BL小鼠1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyfidine,MPTP)法建立帕金森病模型,通过中脑黑质致密部(SNc)酪氨酸羟化酶(TH)的免疫组织化学染色及原位杂交方法观察纹状体GDNF表达,有望为PD寻求更有效的治疗手段,并对VPA更广泛的临床应用提供依据.     

大花罗布麻对MPTP型小鼠的多巴胺能神经保护作用研究

目的观察大花罗布麻叶中槲皮素-3-O-槐糖苷和黄酮富集物对MPTP型帕金森症(Parkinson's disease,PD)小鼠模型的多巴胺能(dopaminergic,DA)神经保护作用。方法以C57/bl6小鼠为研究对象,采用MPTP腹腔注射30mg.kg-1连续5d制备PD模型,口服灌胃给予槲皮素-3-O-槐糖苷25mg.kg-1和大花罗布麻叶黄酮富集物250mg.kg-1,造模前7d开始给药。给药结束后进行自主活动和爬杆实验测试动物行为变化,荧光法测定纹状体中多巴胺含量,石蜡切片观察黑质神经细胞病理变化,分析大花罗布麻对多巴胺能神经的保护作用。结果槲皮素-3-O-槐糖苷25mg.kg-1预先给药1wk,能提升MPTP型PD小鼠的运动能力,提高纹状体中多巴胺含量,减轻黑质神经的损伤,增加酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性细胞表达数量。结论槲皮素-3-O-槐糖苷能减轻MPTP对PD小鼠的DA神经损伤。     

长期低剂量皮下注射鱼藤酮制作大鼠帕金森病模型

目的研究长期低剂量皮下注射鱼藤酮制作Lew is大鼠帕金森病模型。方法Lew is大鼠随机分为正常对照组和模型组,以1.0 mg.kg-1.d-1的剂量皮下注射鱼藤酮,早晚2次注射,连续给药30 d,每周停药1 d。给药结束后,心脏灌注多聚甲醛固定,断头取脑,免疫组化和尼氏染色检测黑质(SN)多巴胺神经元损伤情况,并在共聚焦显微镜下观察α-synuc le in的聚集。结果模型组大鼠3只出现震颤。SN处酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数也出现不同程度的减少,尼氏染色显示SN神经元减少,并伴有胶质细胞增生,黑质多巴胺能细胞胞浆内有-αsynuc le in阳性聚集体,模型成功率约为58%。结论长期皮下注射鱼藤酮(1.0 mg.kg-1.d-1)可复制大鼠帕金森病病理模型。     

尼莫地平对帕金森病大鼠模型多巴胺能神经元的保护作用

目的 观察尼莫地平对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森病(Parkinson disease,PD)大鼠多巴胺能神经元的保护作用.方法 脑立体定位注射6-OHDA建立大鼠PD模型,从行为学、病理、免疫组化方面观察尼莫地平干预后PD大鼠旋转行为、黑质细胞的变化.结果 (1)行为学观察:尼莫地平预先给药组PD大鼠模型成功率低于PD模型组.对照组、尼莫地平组治疗前后行为学无明显变化;左旋多巴组、尼莫地平与左旋多巴联合给药组治疗后旋转行为较给药前明显减慢(P＜0.05).(2)酪氨酸羟化酶(TH)组阳性细胞计数:第二阶段各组间TH阳性细胞计数无统计学差异,各组用药前后TH阳性细胞计数亦无统计学差异.结论 尼莫地平预先干预可降低PD模型成功率,即对PD的预防可能有一定作用;但模型成功后给予尼莫地平未能改善PD大鼠行为学和病理形态学的变化.     

白藜芦醇抗帕金森病黑质细胞凋亡的实验性研究

目的　研究帕金森病(PD)动物模型黑质细胞的凋亡情况及白藜芦醇对神经的保护作用。方法　成年健康SD大鼠100只,分为5组,每组20只。PD模型组应用脑立体定位仪注入6-羟基多巴胺和0.2 %抗坏血酸生理盐水混合液至中脑黑质,诱发PD模型;白藜芦醇实验组应用脑立体定位仪注入6-羟基多巴胺和白藜芦醇混合液;正常对照组应用脑立体定位仪注入0.2 %抗坏血酸生理盐水混合液,术后观察SD大鼠旋转行为,及应用TH免疫组化和Tunel法观察白藜芦醇对黑质神经元的保护作用。结果　TH染色可见白藜芦醇实验组黑质部位损毁较轻、有较多的残存TH阳性细胞。6-羟基多巴胺模型组TH染色黑质大部毁损,几乎无残存的TH阳性细胞。旋转试验结果,白藜芦醇实验组大鼠旋转次数平均206圈/ 30分;6-羟基多巴胺模型组模型鼠旋转次数平均314圈/ 30分;两者存在统计学差异(P<0.05 )。术后第2天检测黑质细胞凋亡情况,白藜芦醇实验组黑质细胞凋亡较少,细胞棕黑色,可见凋亡小体;6-羟基多巴胺模型组黑质细胞凋亡数量较多。结论　白藜芦醇具有神经保护作用。     

自噬参与老龄大鼠对Rotenone神经毒性的易感性

目的探讨自噬是否参与老龄SD大鼠多巴胺(DA)能神经元对Rotenone神经毒性的易感性。方法♂SD大鼠,分别构建3、12、20mon组,每个月龄组又随机分为自然增龄组和Rotenone处理组,以Rotenone1.0mg·kg-1.d-1背部皮下注射,连续给药30d,每周停药1d,构建SD大鼠Rotenone染毒模型。大鼠黑质连续切片,进行酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫组化染色;Western blot检测黑质部位微管相关蛋白轻链-3(LC3)蛋白表达水平;透射电镜观察黑质神经元中自噬体形成和溶酶体激活。结果在自然增龄组,大鼠黑质TH阳性细胞计数以12mon组为最高;Rotenone处理后各月龄组TH阳性细胞计数均比相应自然增龄组降低(P<0.01),且20mon组降低最为明显。Western blot结果显示,自然增龄组大鼠黑质部位LC3表达在20mon组比3mon组下降(P<0.01),Rotenone处理后各月龄组大鼠黑质部位LC3表达均比相应自然增龄组上调(P<0.01)。透射电镜显示Rotenone处理后大鼠黑质神经元可见自噬小体和溶酶体数目增多。结论自噬参与老龄大鼠DA能神经元对Rotenone神经毒性的易感性。     

白藜芦醇抗帕金森病黑质细胞凋亡的实验性研究

目的　研究帕金森病(PD)动物模型黑质细胞的凋亡情况及白藜芦醇对神经的保护作用。方法　成年健康SD大鼠1 0 0只,分为5组,每组2 0只。PD模型组应用脑立体定位仪注入6 羟基多巴胺和0 . 2 %抗坏血酸生理盐水混合液至中脑黑质,诱发PD模型;白藜芦醇实验组应用脑立体定位仪注入6 羟基多巴胺和白藜芦醇混合液;正常对照组应用脑立体定位仪注入0 . 2 %抗坏血酸生理盐水混合液,术后观察SD大鼠旋转行为,及应用TH免疫组化和Tunel法观察白藜芦醇对黑质神经元的保护作用。结果　TH染色可见白藜芦醇实验组黑质部位损毁较轻、有较多的残存TH阳性细胞。6 羟基多巴胺模型组TH染色黑质大部毁损,几乎无残存的TH阳性细胞。旋转试验结果,白藜芦醇实验组大鼠旋转次数平均2 0 6圈/ 30分;6 羟基多巴胺模型组模型鼠旋转次数平均31 4圈/ 30分;两者存在统计学差异(P <0 . 0 5 )。术后第2天检测黑质细胞凋亡情况,白藜芦醇实验组黑质细胞凋亡较少,细胞棕黑色,可见凋亡小体;6 羟基多巴胺模型组黑质细胞凋亡数量较多。结论　白藜芦醇具有神经保护作用。     

益智仁挥发油对帕金森病模型小鼠脑内纹状体和黑质损伤的影响

目的观察益智仁挥发油(VOA)脑保护作用的机制。方法C57BL小鼠随机分为正常对照组、帕金森病(PD)模型组、司来吉兰10mg·kg-1阳性对照组,VOA0.278,0.833和2.5mL·kg-1组。除正常对照和模型组外,各给药组分别预先ig给予VOA或司来吉兰,每天1次,连续12d。第6天开始,除正常对照组外,各组ip给予1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)30mg·kg-1,每天1次,连续7d,制备PD小鼠模型。末次给药后第2天处死小鼠,荧光分光光度法测定小鼠脑内纹状体高香草酸(HVA)和5-羟色胺(5-HT)含量,比色法检测纹状体内超氧化物岐化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量,SABC免疫组化法测定黑质致密部神经细胞内Bcl-2和天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶3(caspase 3)的表达。结果与正常对照组比较,模型组小鼠脑内纹状体HVA,5-HT和GSH含量显著下降,SOD活性下降,MDA含量明显升高;黑质致密部Bcl-2和caspase 3免疫阳性细胞数增加。预先给予VOA0.833和2.5mL·kg-1可明显抑制MPTP所诱导的HVA和GSH含量及SOD活性的降低,并抑制MDA含量升高,2.5mL·kg-1可明显抑制5-HT含量降低。VOA0.833和2.5mL·kg-1可增加黑质致密部Bcl-2免疫阳性细胞数,减少caspase 3免疫阳性细胞数。VOA2.5mL·kg-1的作用与司来吉兰的作用相近。结论VOA的脑保护作用可能与其增加脑内纹状体单胺类神经递质释放、减轻氧化应激反应以及减少黑质致密部神经元凋亡等因素有关。