毛蕊花糖苷对大鼠肝微粒体中6种CYP酶的体外抑制作用

目的 考察毛蕊花糖苷对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP)酶的体外抑制作用.方法 采用探针底物法,在大鼠肝微粒体中加入0.1、0.3、1、3、10、30μmol/L的毛蕊花糖苷,与探针底物非那西丁、美芬妥因、双氯芬酸、香豆素、右美沙芬、睾酮(分别为CYP1A2、CYP2C19、CYP2C9、CYP2A6、CYP2D6...     

大鼠肝微粒体CYP3A1/2和CYP2C9/10参与甘草次酸羟化代谢

目的:对参与18α-甘草次酸(GA)羟化代谢的细胞色素P450(cytochromeP450,CYP)亚型进行研究。方法:采用大鼠肝微粒体体外代谢GA的孵育方法和高效液相色谱(HPLC)技术,通过分析甘草次酸在肝微粒体中形成的单羟化代谢物的酶促动力学,分析其酶学模型,然后用不同的CYP同工酶选择性抑制剂和底物进行抑制实验,初步选出介导甘草次酸单羟化代谢所涉及的CYP同工酶。结果:大鼠肝微粒体羟化代谢GA呈反应时间(10～40min),底物浓度(25～200μmol/L)和蛋白浓度(0.25～1.0g/L)依赖性。GA代谢为22α-羟-GA和24-羟-GA的Vmax分别为(7.9±1.4)μmol.min-1.g-1和(3.4±1.0)μmo1.min-1.g-1,Km分别为(33±9)μmol/L和(68±18)μmol/L。抑制性研究可见:TAO和Ery剂量依赖性抑制22α-羟-GA形成,最大抑制率分别为82.4%和45.7%,而Sul无显著抑制作用;Sul剂量依赖性抑制24-羟-GA形成,抑制率依次为26.8%、45.3%和69.5%,而TAO和Ery的抑制作用不显著。红霉素N-脱甲基酶活性与22α-羟化代谢速率高度相关(r=0.864,P<0.01,n=10),与24-羟化代谢速率无明显相关(r=0.310,P>0.05,n=10)。结论:大鼠肝微粒体CYP3A1/2和CYP2C9/10分别参与了GA的C-22α和C-24羟化代谢。     

常春藤皂苷元对体外人肝微粒体中5种常见细胞色素P450酶的抑制作用研究

目的 考察常春藤皂苷元对人肝微粒体中的5种细胞色素P450（CYP450）酶的抑制作用。方法 采用Cocktail探针药物法,在肝微粒体中加入常春藤皂苷元与混合探针底物[包含非那西丁（CYP1A2探针底物）、双氯芬酸钠（CYP2C9探针底物）、苯乙妥英（CYP2C19探针底物）、右美沙芬（CYP2D6探针底物）和咪达唑仑（CYP3A4探针底物）]共同孵育60 min。采用超高效液相色谱-质谱联用法（UPLC-MS/MS）,以甲苯磺丁酰胺为内标,定量检测底物的代谢物含量,并计算常春藤皂苷元和特异性抑制药对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9和CYP3A4的半数抑制浓度(IC₅₀)。结果 常春藤皂苷元对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6与CYP3A4的IC₅₀值均大于50μmol·L^-1,对CYP2C9及CYP2C19的IC₅₀值分别为4.94μmol·L^-1和18.00μmol·L^-1。结论 常春藤皂苷元对肝微粒体中CYP...     

黄连解毒汤对人细胞色素P450酶6个亚型的体外抑制作用研究

目的:研究黄连解毒汤对人肝微粒体6个亚型CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的体外抑制作用。方法:采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)同时测定对乙酰氨基酚、6α-羟基紫杉醇、4-羟基双氯芬酸、4-羟基美芬妥英、右啡烷、1-羟基咪达唑仑和6β-羟基睾酮,分别代表CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的活性;黄连解毒汤提取物和7种混合探针底物在人肝微粒体中共同孵育,并计算其IC50值表示对CYP450酶的抑制程度。结果:在人肝微粒体体外孵育体系中,黄连解毒汤对CYP2D6的IC50值为3.54μg/mL,对CYP1A2的IC50值为10.8μg/mL,对CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP3A4_T和CYP3A4_M亚酶的IC50值依次为67.7、299、530、199和607μg/mL。结论:在正常剂量下,黄连解毒汤对人肝微粒体CYP2D6和1A2可能有抑制作用,对人肝微粒体CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4无明显抑制作用。     

丹参注射液对人肝微粒体酶CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6体外抑制作用的研究

目的 评价丹参注射液在体外对人肝微粒体酶CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6活性的影响。方法 将丹参注射液与CYP450酶3种亚型(CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6)的特异性探针底物甲苯磺丁脲、奥美拉唑、右美沙芬与大鼠肝微粒体进行孵育,采用LC-MS/MS法测定对应3种代谢产物4-羟基甲苯磺丁脲、5-羟基奥美拉唑、右啡烷的浓度,求算出IC₅₀。结果 丹参注射液对CYP2C9、CYP2C19和CYP2D6的IC₅₀值均>50 μg/mL。结论 丹参注射液对人肝微粒体酶CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6没有抑制作用。     

注射用丹参总酚酸(冻干)对人CYP450酶和P-糖蛋白体外抑制作用及对大鼠CYP1A2和CYP3A体内诱导作用(英文)

目的探讨注射用丹参总酚酸(冻干)(SLI)对人CYP450酶和P-糖蛋白体外抑制作用以及对大鼠CYP1A2和CYP3A体内诱导作用。方法①应用P450-GloTMCYP450检测试剂盒,通过化学发光法测定SLI和经典抑制剂对细胞色素P4501A2(CYP1A2),CYP2D6,CYP3A4,CYP2C19和CYP2C9的IC50值,通过比较SLI和经典抑制剂对相应细胞色素P450亚型的IC50值来判断SLI对人CYP450酶的体外抑制作用。②Wistar大鼠分别iv给予SLI 3,10和30 mg·kg-1和诱导剂苯巴比妥钠20 mg·kg-1,采用探针底物法,通过比较代谢产物的生成速率来评价SLI对大鼠CYP1A2和CYP3A的诱导作用。③应用ATP酶检测试剂盒,通过化学发光法测定ATP酶活性来评价SLI是否为P-gp的底物或抑制剂。结果①CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6和CYP3A4抑制剂的IC50与SLI对其的IC50进行比较(CYP1A2:0.12μmol·L-1vs 840μmol·L-1;CYP2C9:3.362μmol·L-1vs 704μmol·L-1;CYP2C19:3.236μmol·L-1vs 306μmol·L-1;CYP2D6:0.117μmol·L-1vs 2660μmol·L-1;CYP3A4:0.078μmol·L-1vs 1780μmol·L-1)。②与空白对照组(86.4±6.3)nmol·g-1.min-1相比,SLI 3,10和30 mg·kg-1组CYP1A2活性分别为83.4±6.6,82.5±4.0和(83.4±6.6)nmol·g-1.min-1。与空白对照组(16.1±0.9)nmol·g-1.min-1比较,SLI 3,10和30 mg·kg-1组CYP3A活性分别为15.7±0.6,15.9±0.7和(15.9±1.0)nmol·g-1.min-1,无显著性差异。③以临床血药浓度为依据设计的一系列浓度的SLI 0.0002,0.0006,0.002,0.006,0.017,0.052,0.156和0.468 g.L-1的ATP酶活性分别与空白对照组进行比较(5.8,5.3,5.8,5.5,5.8,5.2,,5.8,5.3,vs 5.75μmol·g-1.min-1),无显著性差异。结论SLI临床给药剂量既不能体外抑制人CYP1A2,CYP2D6,CYP3A4,CYP2C19和CYP2C9酶活性,也不能诱导大鼠CYP1A2和CYP3A,同时也不是P-gp的体外抑制剂或底物。     

树豆酮酸A对人肝微粒体中5种常见细胞色素P450酶的体外抑制作用研究

目的:研究树豆酮酸A对人肝微粒体中的5种细胞色素P450(CYP)酶的体外抑制作用。方法:采用Cocktail探针药物法,在人肝微粒体中加入50.0、15.0、5.0、1.5、0.5、0.15、0.05μmol/L的树豆酮酸A,与混合探针药物[包含非那西丁、右美沙芬、奥美拉唑、睾酮、甲苯磺丁脲(分别为CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9的探针药物)]共同孵育60 min。在另设空白组和阳性对照组[α-萘黄铜、奎尼丁、(+)-N-3-苄基香酚、酮康唑、磺胺苯吡唑(分别为CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9的特异性抑制剂)]的基础上,以葛根素为内标,采用超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS)分析相应代谢产物(对乙酰氨基酚、右啡烷、5-羟基奥美拉唑、6β-羟基睾酮、羟基甲苯磺丁脲)的含量。以ACQUITY UPLC■BEH C18为色谱柱,以0.01%甲酸水溶液-0.01%甲酸乙腈为流动相(梯度洗脱),柱温为40℃,流速为0.4 mL/min,进样量为2μL;采用电喷雾电离源,以多反应监测模式进行正负离子扫描,数据采集范围为m/z 100~1200,碰撞气为氩气,雾化气为氮气,锥孔气流量为50 L/h,脱溶剂气流量为800 L/h,正、负离子模式下毛细管电压分别为2.0、1.5 k V,离子源温度分别为120、110℃,脱溶剂的温度分别为400、450℃。使用Graphpad Prism 5.0软件进行非线性回归分析并计算半数抑制浓度(IC₅₀)。结果:上述各代谢产物检测浓度的线性范围分别为0.26~8.35、0.36~34.56、0.10~3.09、3.67~117.37、0.15~4.88μmol/L(R^2>0.99),定量下限分别为0.26、0.36、0.10、3.67、0.15μmol/L。阳性对照组特异性抑制剂对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9酶的IC50均在文献报道的可接受范围内。树豆酮酸A对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4酶的IC50值均大于50μmol/L,对CYP2C9、CYP2C19酶的IC50值分别为4.94、18.00μmol/L。结论:树豆酮酸A对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4酶没有抑制作用,对CYP2C9、CYP2C19酶有一定的抑制作用。     

斯皮诺素对人肝微粒体细胞色素P_(450)酶的体外抑制作用

目的:研究斯皮诺素对人肝微粒体细胞色素P_(450)(CYP_(450))酶7种亚型(CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2D6、CYP1A1、CYP2C19和CYP3A4)的体外抑制作用。方法:以200.00、100.00、50.00、25.00、12.50、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39μmol/L的斯皮诺素与人肝微粒体共同孵育,分别以他克宁、安非他酮、盐酸阿莫地喹、双氯芬酸钠、美芬妥英、氢溴酸右美沙芬和咪达唑仑作为上述7种亚型CYP_(450)酶的特异性探针药物。采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法测定7种探针药物的代谢产物生成量,计算斯皮诺素对人肝微粒体中7种亚型CYP_(450)酶的半数抑制浓度(IC50)。结果:斯皮诺素对人肝微粒体7种亚型CYP_(450)酶的IC50分别为1 714、1 158、226.1、2 288、80.59、101.1、1 119μmol/L,均大于50μmol/L。结论:斯皮诺素对人肝微粒体CYP_(450)酶的上述7种亚型均无抑制作用,引发药物代谢性相互作用的可能性较小。     

评价HPPH对细胞色素P450酶体外代谢活性的影响

目的:评价HPPH在体外对大鼠及人肝微粒CYP450酶的6种亚型酶活性的影响,预测使用HPPH可能出现的药物相互作用。方法:将注射用HPPH与CYP450酶的6种亚型的特异性探针底物非那西汀(CYP1A2)、甲苯磺丁脲(CYP2C9)、S-美芬妥因(CYP2C19)、右美沙芬(CYP2D6)、氯唑沙宗(CYP2E1)、咪达唑仑(CYP3A4)和睾酮(CYP3A4)与大鼠及人肝微粒进行孵育反应,采用HPLC-MS/MS法测定对应的7种代谢产物(对乙酰氨基酚、羟基甲苯磺丁脲、4-羟基美芬妥因、O-去甲基右美沙芬、6-羟基氯唑沙宗、1′-羟基咪达唑仑、6β-羟基睾酮)的浓度。结果:在本实验条件下,HPPH浓度为1.00~50.00μmol·L-1时,未发现其对大鼠的CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4产生抑制作用。在本实验条件下,HPPH浓度为0.50~10.00μmol·L-1时,未发现其对人CYP1A2产生抑制作用;但对人CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1均存在抑制作用;对人CYP3A4,对底物咪达唑仑存在抑制作用,对底物睾酮未发现抑制作用。结论:HPPH对CYP450酶的抑制作用存在种属差异,在人体内HPPH与CYP450酶作用有待体内实验进一步证明。     

瓜蒌皮注射液对人肝微粒体CYP450酶4种亚型的影响

目的研究瓜蒌皮注射液对人肝细胞色素P450(CYP450)酶4种亚型CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9和CYP2D6的体外抑制作用。方法瓜蒌皮注射液8个不同浓度(2%、1%、0.2%、0.05%、0.01%、0.005%、0.002%、0.000 5%)的工作液分别与4种CYP450酶亚型的探针底物混合,即非那西丁(CYP1A2)、安非他酮(CYP2B6)、双氯芬酸(CYP2C9)、右美沙芬(CYP2D6),用维拉帕米作为内标,在人肝微粒体中孵育,采用高效液相色谱法检测4种探针底物的剩余浓度,计算半数抑制浓度(IC_(50))。结果瓜蒌皮注射液对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9和CYP2D6的IC_(50)值均大于临床常用量。结论正常用量下,瓜蒌皮注射液对人CYP450酶的4亚型无明显影响。     

CYP2C19基因型和CYP2C9对人肝微粒体中氟西汀N-去甲基代谢的影响(英文)

目的:本实验旨在研究CYP2C19基因型人肝微粒体中氟西汀N-去甲基代谢的酶促动力学特点并鉴定参与此代谢途径的细胞色素P-450酶。方法:测定基因型CYP2C19肝微粒体中去甲氟西汀形成的酶促动力学。鉴定氟西汀N-去甲基酶活性与细胞色素P-450 2C9,2C19,1A2和2D6酶活性的相关性,同时应用各种细胞色素P-450酶的选择性抑制剂和化学探针进行抑制实验,从而确定参与氟西汀N-去甲基代谢的细胞色素P-450酶。结果:去甲氟西汀生成的酶促动力学数据符合单酶模型,并具有Michaelis-Menten动力学特征。当底物浓度为氟西汀25μmol/L和100μmol/L时,去甲氟西汀(N-FLU)的生成率分别与甲磺丁脲3-羟化酶活性显著相关(r_1=0.821,P_1=0.001;r_2=0.668,P_2=0.013),当底物浓度为氟西汀100μmol/L时,N-FLU的生成率与S-美芬妥因4’-羟化酶活性显著相关(r=0.717,P=0.006)。PM肝微粒中磺胺苯吡唑和醋竹桃霉素对氟西汀N-去甲基代谢的抑制作用显著大于EM(73％vs 45％,P<0.01)。结论:在生理底物浓度下,CYP2C9是催化人肝微粒体中氟西汀N-去甲基代谢的主要CYP-450酶;而高底物浓度时,以CYP2C19的作用为主。     

罗通定和羟考酮体外代谢的相互作用

目的体外实验考察罗通定(RTD)和羟考酮(OCD)对细胞色素P450(CYP)同工酶的抑制和诱导作用,分析预测两药合用时潜在的药物代谢性相互作用。方法将混合人肝微粒体与RTD,OCD或阳性抑制剂与CYP探针底物孵育30min,用高效液相色谱-质谱法测定孵育液中特异性探针底物代谢产物的生成率、得到各同工酶的相对活性并计算相应的CYP同工酶的IC50值,评价两药对CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6和CYP3A4的潜在抑制作用。RTD(20,200和2000μg·L-1)、OCD(2,20和200μg.L-1)或阳性诱导剂与原代SD大鼠肝细胞孵育72h后加入特异性探针底物再孵育60min、测定细胞孵育液中探针底物的清除率、计算得到相对酶活性,通过与阳性诱导剂组的比较评价RTD和OCD对CYP1A和CYP3A的诱导作用。结果OCD对CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6和CYP3A4均无诱导和抑制作用。RTD对CYP2D6有一定的抑制作用,IC50值为3.72μmol·L-1,除此之外对其他的CYP同工酶无诱导和抑制作用。结论RTD是CYP2D6的一个中等程度的抑制剂,在体内血浆水平相当或高于其IC50值(3.72μmol·L-1)时,RTD对OCD经CYP2D6酶介导的O-去甲基化代谢途径有一定的抑制作用,但是在临床常用剂量水平上RTD和OCD临床合用产生明显的代谢性相互作用的可能性很小。     

补骨脂素和异补骨脂素对体外细胞色素P450酶活性的抑制和诱导作用

目的探讨补骨脂素(PSO)和异补骨脂素(IPSO)对细胞色素P450(CYP)活性的抑制和诱导作用。方法将人肝微粒体或鼠肝微粒体与PSO或IPSO以及CYP特异性探针底物共孵育30 min,分别以非那西丁O-脱乙基、甲苯磺丁脲4-羟基化、美芬妥因-4-羟基化、右美沙芬O-脱甲基化和咪达唑仑1'-羟基化为同工酶CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6(大鼠2D2)和CYP3A4(大鼠3A1/2)代谢活性的标志,用HPLC-MS/MS法检测相应代谢产物的生成量并计算相应的IC50值,评价PSO和IPSO对5种CYP同工酶的潜在抑制作用。将PSO和IPSO或阳性诱导剂与"三明治"培养大鼠肝原代细胞共孵育72 h后,再加入CYP探针底物孵育1 h,检测相应代谢产物的生成量,与阳性诱导剂组比较,评价二者对CYP1A和CYP3A的诱导作用。结果 PSO和IPSO对人肝微粒体和鼠肝微粒体的CYP1A2均有较强的抑制作用,在人肝微粒体中的IC50值分别为0.17和0.13μmol·L-1;在鼠肝微粒体中的IC50值分别为0.47和0.36μmol·L-1。二者对人肝微粒体的CYP2D6也有中等强度的抑制作用,IC50值分别为3.59和9.51μmol·L-1。PSO和IPSO 100μmol·L-1可分别将大鼠肝细胞的CYP3A活性提高1.18和0.96倍,有一定的诱导作用。结论 PSO和IPSO能显著抑制CYP1A2酶活性,对CYP3A有一定的诱导作用。     

混合探针底物法测定五味子成分对大鼠肝脏细胞色素P450同工酶的影响

研究大鼠多次口服五味子成分和体外对肝脏细胞色素P450酶(CYP450)6种同工酶的影响。采用超速离心法制备正常及多次口服五味子醇/水提物的大鼠肝微粒体并与探针药进行体外温孵,应用液相色谱?串联质谱分析方法测定CYP450的6种同工酶特异性探针底物非那西丁(CYP1A2)、右美沙芬(CYP2D2)、双氯芬酸钠(CYP2C6)、美芬妥英(CYP2C11)、氯唑沙宗(CYP2E1)、咪达唑仑(CYP3A1/2)在大鼠肝微粒体的代谢产物生成(对乙酰氨基酚、右啡烷、4-羟基双氯芬酸钠、4-羟基美芬妥英、6-羟基氯唑沙宗、1-羟基咪达唑仑)以反映各CYP450同工酶活性。五味子醇提物(28～120μg.mL-1)体外对大鼠肝微粒体CYP450的6个同工酶均有不同程度的抑制作用。大鼠多次口服五味子醇提物(1.5 g.kg-1,qd×7d)对肝脏CYP3A1/2和CYP2E1有显著诱导作用,对CYP2D2和CYP2C11有明显抑制作用,而对CYP2C6和CYP1A2无明显影响。五味子水提物(100～500μg.mL-1)体外对大鼠肝脏CYP450同工酶亦有抑制作用;体内多次给药(1.5 g.kg-1,qd×7d)对肝脏CY...     

吡咯里嗪类非甾体抗炎药ML-3000衍生物对人P450同工酶的体外抑制作用

目的研究吡咯里嗪类ML-3000及其两种NO供体衍生物ML-4000和ML-5000对人P450同工酶CYP2D6、CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4的体外抑制作用。方法采用Gentest公司的高通量P450酶抑制剂筛选试剂盒（High throughput Inhibitor Screening Kit）,测定ML-3000、ML-4000和ML-5000对五种P450同工酶CYP2D6、CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4的体外抑制作用。结果 ML-3000、ML-4000和ML-5000抑制CYP3A4的IC50分别为7.07、0.40、2.82μmol/L,对其他4个酶（CYP1A2、CYP2D6、CYP2C9和CYP2C19）的IC50均大于10μmol/L。结论 3种化合物对CYP3A4活力均有抑制作用,其中ML-4000的抑制能力最强。3种化合物对其他4个酶基本没有抑制作用。     

体外“鸡尾酒法”研究5-羟基雷公藤内酯醇对人肝微粒体CYP450酶亚型的抑制

目的：评价（5R）-5-羟基雷公藤内酯醇（T8）在体外对人肝微粒体CYP450酶7种主要亚型CYP3A／5、CYP2D6、CYPlA2、CYP2C9、CYP2C19、CYP286和CYP2C8的直接抑制作用和时间依赖性抑制作用,为临床药物一药物相互作用研究提供指导。方法：本实验分别利用IC50和IC50偏移进行评价。结果：T8对上述7种亚型的直接抑制IC50都高于100μmol／L,时间依赖性抑制研究中没有出现IC50偏移。结论：T8对7种主要的CYP450酶亚型没有直接抑制和时间依赖性抑制作用。临床上发生由于T8抑制上述7种亚型的CYP450酶导致的药物一药物相互作用的可能性较小。     

甲基原薯蓣皂苷对人肝微粒体中7种CYP450酶活性的影响

目的研究甲基原薯蓣皂苷对CYP450酶的7种亚型酶活性的影响。方法将MPD和CYP450酶7种亚型的特异性探针底物咖啡因(CYP1A2)、右美沙芬(CYP2D6)、甲苯磺丁脲(CYP2C9)、s-美芬妥因(CYP2C19)、氯唑沙宗(CYP2E1)、香豆素(CYP2A6)及咪达唑仑(CYP3A4)与人肝微粒体进行孵化反应,采用HPLC和LC-MS/MS法测定对应的7种代谢产物(1,7-二甲基黄嘌呤、去甲右美沙芬、4-羟基甲苯磺丁脲、4-羟基美芬妥因、6-羟基氯唑沙宗、7-羟基香豆素和1-羟基咪达唑仑)的浓度,通过与对照组比较,确定MPD对以上7种酶活性的影响。结果MPD在1~10μmol.L-1时对7种酶均无明显抑制作用,在100μmol.L-1时对CYP2D6有抑制趋势,但对其他6种酶无抑制作用,均无统计学意义(P>0.05)。结论MPD在与以上6种酶(CYP1A2、CYP2E1、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9和CYP2A6)代谢的药物联合用药时,发生药物相互作用的可能性较小。     

丝裂霉素C在体外和体内对大鼠肝脏CYP2D1/2,CYP2C11和CYP1A2活性的影响

目的研究丝裂霉素C(MMC)在体外和体内对大鼠肝脏CYP2D1/2,CYP2C11和CYP1A2活性的影响。方法用诱导剂和抑制剂分别在体内和体外调节大鼠肝脏P450同工酶活性，并用HPLC检测3种同工酶各自底物的特定代谢产物，以计算同工酶活性。结果在体外, MMC可以使地塞米松诱导的大鼠肝脏微粒体CYP2D1/2,CYP2C11和CYP1A2活性分别抑制(19±6)%(P<0.05),(85±10)％(P<0.01)和(36±6)%(P<0.05)，并使β-萘黄酮诱导的CYP1A2活性降低(58±6)%(P<0.01)。在体内，以20% LD₅₀的剂量连续3 d或6 d腹腔注射MMC 对大鼠肝脏CYP2D1/2，CYP2C11和CYP1A2活性的影响无统计学差异。结论在体外MMC可以抑制大鼠肝微粒体CYP2D1/2，CYP2C11和CYP1A2的活性，但在体内对这3种细胞色素P450同工酶活性的影响无统计学差异。     

中药有效成分对细胞色素P450酶的抑制活性评价

目的评价10个中药有效成分对人肝微粒体5种CYP同工酶(CYP1A2、2C9、2C19、2D6和3A4)的抑制活性,为临床合理用药提供参考。方法在混合人肝微粒体孵育体系中,分别以非那西丁O-脱乙基、甲苯磺丁脲4-羟基化、奥美拉唑5-羟基化、右美沙芬O-脱甲基化和咪达唑仑1'-羟基化反应为5种同工酶代谢活性的标志,用阳性抑制剂对试验体系进行验证。应用LC-MS检测受试物对探针底物代谢产物生成量的影响,得到抑制率并计算IC50。结果柚皮素是CYP2C19的强抑制剂和1A2的中等抑制剂(IC50为0.43和4.79μmol.L-1)。异鼠李素是CYP1A2、2C9和2C19的中等抑制剂,IC50分别为5.36、1.40和3.28μmol.L-1。大黄酸对CYP1A2和3A4的IC50分别为8.32和2.50μmol.L-1,为中等抑制剂。喜树碱是CYP2C9和2C19的中等抑制剂(IC50为2.01和2.48μmol.L-1)。金雀花碱、小檗碱和齐墩果酸抑制CYP2C9、2D6和2C19的IC50分别为8.13、4.69和3.56μmol.L-1,为中等抑制剂。结论柚皮素、异鼠李素、金雀花碱、盐酸小檗碱、喜树碱、大黄酸和齐墩果酸对CYP同工酶有不同程度的抑制作用,在临床应用时应注意可能的药-药相互作用。     

雷公藤多苷对大鼠与人肝微粒体CYP3A酶活性的体外抑制作用

目的:建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定大鼠和人肝微粒体中1′-羟基咪达唑仑的含量,研究雷公藤多苷对体外大鼠与人肝微粒体细胞色素P45(0CYP)3A酶活性的抑制作用。方法:将不同质量浓度的雷公藤多苷(0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、50.0、100.0μg/ml)分别与大鼠和人肝微粒体(0.4 mg/ml)共同孵育20 min后终止反应,采用LC-MS/MS法测定孵育液中咪达唑仑的代谢产物1′-羟基咪达唑仑的浓度以评价CYP3A酶活性并计算酶活性抑制率,采用Graph Pad Prism 5.0软件进行拟合并计算半数抑制浓度(IC50)。色谱柱为Agilent Eclipse XBD-C18,流动相为水-甲醇(梯度洗脱),流速为0.3 ml/min,柱温为30℃,进样量为2μl。采用电喷雾电离(ESI),定量离子为m/z 342.01→324.1(1′-羟基咪达唑仑)、m/z 383.01→337.2(内标氯雷他定)。结果:1′-羟基咪达唑仑检测浓度在0.01~3μmol/L范围内与其和内标物峰面积比值呈良好线性关系;精密度试验RSD均小于10%,提取回收率为97.92%~101.65%,方法回收率为96.70%~104.10%,稳定性试验RSD均小于10%。雷公藤多苷对大鼠和人微粒体中CYP3A的IC50分别为(48.610±1.32)μg/ml和(4.754±1.12)μg/ml;在0.5~100.0μg/ml范围内雷公藤多苷对CYP3A酶活性有抑制作用,且与质量浓度呈正相关。结论:所建立的LC-MS/MS法可用于检测大鼠和人肝微粒体中1′-羟基咪达唑仑的含量。雷公藤多苷对体外大鼠和人肝微粒体药物代谢酶CYP3A均存在抑制作用,且对人肝微粒体CYP3A的抑制作用明显强于大鼠。