ABCG2基因在非小细胞肺癌细胞耐药中的作用和机制探究

目的:分析ABCG2基因在多耐药非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)细胞的表达变化及其可能参与的机制。方法:选择肺癌细胞A549及耐药A549进行细胞培养,分别给予顺铂及依托泊苷化疗药物治疗;取耐药A549细胞分为空白组(不处理)、对照组(给予siRNA对照)及siRNA-ABCG2组(给予siRNA-ABCG2)。采用CCK8法检测各组细胞的药物抑制率,采用Western blot法检测3组细胞中ABCG2蛋白表达情况。结果:2组细胞药物抑制率变化呈剂量依赖性,同剂量中耐药A549组药物抑制率明显低于A549组。耐药A549组细胞ABCG2蛋白表达水平明显高于A549组。3组细胞药物抑制率呈剂量依赖性,其中同剂量的siRNA-ABCG2组药物抑制率明显高于空白组及对照组。siRNA-ABCG2组细胞ABCG2、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平明显低于空白组及对照组,分别使用p-AKT、p-mTOR的激活剂后,可显著降低干扰ABCG2基因后导致的顺铂和依托泊苷抑制率的增加。结论:ABCG2通过调控PI3K/AKT信号通路在耐药A549的耐药性中发挥重要作用,沉默ABCG2基因可改善耐药A549细胞的耐药性,提示ABCG2可作为改善NSCLC细胞对顺铂及依托泊苷化疗药物的耐药性的潜在靶点。     

大黄素对人胆管癌多药耐药细胞QBC_（939）/ADM的耐药逆转作用

目的探讨大黄素（Emodin,EM）对人胆管癌多药耐药细胞QBC939/ADM的耐药逆转作用。方法细胞生长周期、凋亡率采用流式细胞术（FCM）,多药耐药P糖蛋白（P-gP）以免疫组织化学（SP）法检测。结果阿霉素（ADM）、紫杉醇分别与EM联合作用于人胆管癌多药耐药细胞QBC939/ADM的凋亡率比单独作用有显著提高。细胞周期分布显示：ADM、紫杉醇分别与EM联合作用于人胆管癌多药耐药细胞QBC939/ADM,使QBC939/ADM阻滞于G2/M期的细胞数明显增加。EM和紫杉醇联合作用后,人胆管癌多药耐药细胞QBC939/ADM中多药耐药P糖蛋白（P-gP）的表达由72.00%降低到46.00%（P〈0.01）。结论EM对QBC939/ADM细胞的多药耐药性有逆转作用。其作用机理可能与人胆管癌细胞P-gP的表达有关,通过与化疗药物竞争性结合P-gP的结合位点发挥疗效。     

不同方法建立卵巢癌紫杉醇耐药细胞株对临床用药方案的启发

目的：用不同的诱导耐药方法培养紫杉醇耐药细胞株A2780／Taxol，A2780／（DDP＋Taxol），A2780／Taxol-1，以进一步探讨卵巢癌耐药机理，为临床逆转耐药研究提供模型依据。方法：采用逐步增加药物浓度和大剂量冲击两种方法处理细胞，直至细胞能在2．5μg·ml^-1紫杉醇中稳定生长。用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定其耐药性及紫杉醇对各组细胞的抑制率，并在冻存3个月后再次检测耐药性。结果：MTT法检测A2780，A2780／DDP细胞对紫杉醇的药物半数抑制浓度（IC50）分别为（0．23±0．04）μg·ml^-1和（0．26±0．02）μg·ml^-1，采用逐步增加药物浓度诱导法历经九个月时间建立A2780的紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol-l，对紫杉醇的Ic50为（6．63±0．31）μg·ml^-1，耐药倍数为28．83。采用大剂量冲击法以A2780和A2780／DDP为对象建立各自的紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol、A2780／（DDP＋Taxol），检测大剂量冲击法建立的A2780／Taxol，A2780／（DDP＋Taxol）耐药性，发现它们对紫杉醇的耐药倍数分别为19．65，17．96，两者比较无统计学差异（P〉0．05），而两种方法建立的紫杉醇耐药细胞株A2780／Taxol、A2780／Taxol-1的耐药性有统计学差异（P〈0．05）。同时检测A2780／DDP和A2780／（DDP＋Taxol）对顺铂的IC50差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：通过逐步诱导法建立的耐药细胞株比通过大剂量冲击法建立的耐药细胞株耐药性稳定，耐药性显著增高，提示临床用药中应足剂量用药。紫杉醇与顺铂无交叉耐药。在A2780／DDP细胞基础上使用紫杉醇建立双耐药细胞株时，紫杉醇对细胞的顺铂耐药性无影响，不能逆转其顺铂耐药性，所以对顺铂耐药患者多药合用意义不大，单用紫杉醇可能为佳。     

联合应用化疗药物对三氧化二砷耐药白血病细胞的毒性实验研究

目的:探讨化疗药物联合应用对三氧化二砷(As2O3)耐药白血病细胞(K562/AS2)的毒性作用。方法:细胞毒实验采用MTT法,二药合用时细胞毒性作用采用ChouTalalay联合指数法分析,细胞表面P糖蛋白(Pgp)和细胞内柔红霉素(DNR)浓度测定采用流式细胞术测定。结果:K562/AS2细胞对三氧化二砷、柔红霉素、鬼臼乙叉苷(VP16)、三尖杉酯碱(H)、米托蒽醌(NVT)和阿糖胞苷(AraC)的耐药倍数分别为7.4、2.9、3.8、3.6、2.8和1.1。K562细胞和K562/AS2细胞的细胞表面Pgp或细胞内任意荧光强度无显著的统计学意义(P>0.05)。As2O3与DNR、VP16、H或NVT联合应用时,对K562、K562/AS2和Pgp表达的白血病细胞(K562/A02)细胞的联合指数均大于1。异搏定与DNR联合应用时,对K562和K562/AS2细胞的联合指数均大于1,但是对K562/A02细胞的联合指数均小于1。结论:K562/AS2细胞对As2O3、DNR、VP16和NVT耐药,其机制与Pgp表达无关。异搏定联合应用DNR可以逆转K562/A02对DNR的耐药性,不能逆转DNR对As2O3耐药细胞的耐药性。As2O3与DN、VP16、H和NVT联合应用时,对K562、K562/AS2和K562/A02细胞的毒性均为拮抗作用。     

小檗碱通过抑制ALDH1活性降低卵巢癌细胞药物转运蛋白的表达逆转紫杉醇耐药

摘要：目的:深入探究小檗碱对紫杉醇耐药性卵巢癌细胞的体外活性影响及其机制。方法:将细胞使用DMSO（Control）、小檗碱组（Berberine）、紫杉醇（Paclitaxel）、紫杉醇+小檗碱（Combined）、HY-B0240（Inhibitor）、HY-B0240+小檗碱（HB）处理,24h后通过MTT法检测各组细胞增殖情况,Transwell检测各组细胞侵袭和迁移,流式细胞术分析细胞凋亡,Westernblot检测增殖、迁移、侵袭和凋亡相关蛋白的表达,并通过免疫荧光分析P-gp（P-糖蛋白）和ALDH1（乙醛脱氢酶1,Acetaldehydedehydrogenase1）的表达。结果:相较于对照组细胞,小檗碱组或联合用药组细胞增殖、迁移、侵袭被进一步抑制,细胞凋亡明显增加（P<0.05）;与小檗碱组相比,小檗碱与ALDH1抑制剂联用后,ALDH1和P-gp蛋白、细胞表型和相关蛋白的表达无明显变化（P>0.05）。结论:小檗碱通过抑制ALDH1活性降低卵巢癌细胞药物转运蛋白的表达逆转紫杉醇耐药。     

艾洛替尼耐药的卵巢癌SKOV3细胞系的建立及其耐药特性

目的通过体外建立艾洛替尼(Erl)耐药的人浆液性卵巢癌细胞系SKOV3/Erl,并探讨其耐药机制,为卵巢癌靶向性治疗的耐药性研究提供细胞模型及依据。方法 采用逐步递增联合大剂量冲击法诱导细胞,取对数生长期的SKOV3细胞,从Erl 1μmo.lL-1开始处理,以Erl 2,4,8,16和25μmo.lL-1反复换液传代,最终维持浓度为10μmo.lL-1,共诱导10个月。取SKOV3和SKOV3/Er1细胞,加入不同浓度艾洛替尼、紫杉醇、米托蒽醌、表柔比星、拓扑替康、长春新碱和甲氨蝶呤等药物,作用72 h,磺酰罗丹明B染色法检测耐药倍数。流式细胞术检测SKOV3细胞和SKOV3/Er1细胞的细胞周期。Western印迹法检测Erl刺激对敏感和耐药细胞中表皮生长因子受体(EGFR)相关信号通路产生的变化;流式细胞术检测SKOV3/Er1细胞表面ATP结合盒(ABC)转运蛋白中P糖蛋白(Pgp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的表达以及Toll样受体4(TLR4)的表达;检测脂多糖(LPS)刺激对紫杉醇耐受的SKOV3/Erl细胞的敏感度。结果 Erl对SKOV3细胞的IC50为(9.54±1.04)μmol.L-1,而对SKOV3/Erl细胞的IC50为(21.63±1.05)μmo.l L-1,耐药倍数约为2.26,诱导成功的SKOV3/Erl对紫杉醇、长春新碱、米托蒽醌和甲氨蝶呤的耐药倍数均在3倍以上。与SKOV3细胞相比,SKOV3/Erl细胞G0/G1期比例上升,S期比例下降,G2/M期几乎无变化。Erl刺激后,与SKOV3细胞相比,SKOV3/Erl细胞中p-HER1,p-ERK与p-AKT水平上调。SKOV3/Erl细胞膜上Pgp,BCRP和MRP1表达有微弱上调,而TLR4显著上调;脂多糖可强烈刺激SKOV3/Erl细胞增殖,并且对紫杉醇杀伤起到保护作用,而亲本细胞则相对不敏感。结论 成功建立了对Erl耐受的人卵巢癌耐药细胞SKOV3/Erl。其表现出的多药耐药机制可能与TLR4蛋白表达上调有关。     

金诺芬逆转非小细胞肺癌奥希替尼获得性耐药的作用北大核心CSCD

目的探讨金诺芬(auranofin,ANF)逆转非小细胞肺癌(non-small cell cancer,NSCLC)细胞奥希替尼(osimertinib,Osi)获得性耐药的作用。方法利用Osi敏感性NSCLC细胞株H1975和PC9,建立Osi获得性耐药的NSCLC细胞株H1975/OR和PC9/OR;通过CCK-8法在FDA批准的1470种药物分子库中高通量筛选Osi获得性耐药的逆转剂,Compusyn软件计算Osi与ANF联用时的药物联合指数;CCK-8、EdU细胞增殖、流式细胞术、Transwell实验检测Osi、ANF及两者联用对Osi获得性耐药NSCLC细胞生长增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响;RNA-seq检测联合用药与单独用药后耐药株中差异变化的mRNA,目的基因和蛋白表达量用qRT-PCR和Western blot进行验证。结果与Osi敏感性H1975和PC9细胞相比,H1975/OR和PC9/OR在Osi处理后生长增殖能力明显升高,凋亡率明显降低,其耐药指数分别为70.31和136.99;在FDA批准的1470种药物分子库中,只有ANF可同时增强Osi对两种耐药细胞株的杀伤作用;1μmol·L^(-1)ANF与2μmol·L^(-1)Osi联用时,对NSCLC细胞Osi获得性耐药的逆转作用最为显著,可明显抑制耐药细胞株的生长增殖与侵袭、迁移能力,提高细胞凋亡率;联合用药后HSPB8和LC3-II/LC3-I上调导致自噬增多。结论ANF与Osi联用增强Osi对NSCLC耐药细胞的敏感性,其机制与HSPB8的上调导致自噬增多有关。     

P-糖蛋白在3期非小细胞肺癌中的表达及其与化疗耐药的关系

目的探讨Ⅲ期非小细胞肺癌（None—small cell lung cancer NSCLC）组织中P糖蛋白（P—glycoprotein P—gP）的表达及其与肿瘤化疗耐药的关系。方法应用免疫组化法检测P糖蛋白在70例Ⅲ期NSCLC组织的表达,同时通过行肿瘤细胞化疗敏感性及耐药测定,进一步分析药敏试验结果与P糖蛋白表达的相关性。结果在70例Ⅲ期NSCLC中P糖蛋白阳性率为41．7％;在顺铂（DDP）、足叶乙甙（VP-16）、紫杉醇耐药组P—gp阳性表达率较敏感组显著升高。结论Ⅲ期NSCLC组织P—gP表达可导致肺癌原发性耐药;P—gP介导的多药耐药（Muhidrug resistance MDR）是DDP、VP-16、紫杉醇耐药的重要因素。     

PARP1基因抑制对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响

目的研究PARP-1基因在卵巢癌化疗耐药发生中的作用以及PARP-1小干扰RNA对紫杉醇耐药卵巢癌细胞增殖的影响。方法使用紫杉醇刺激紫杉醇耐药卵巢癌细胞SKOV3/TAX及敏感细胞SKOV3,应用小干扰RNA(siRNA)技术抑制PARP-1基因的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法检测紫杉醇单独以及联合PARP siRNA对卵巢癌细胞增殖的影响。结果 SKOV3/TAX细胞中PARP-1表达高于SKOV3细胞;紫杉醇可以减少SKOV3细胞中PARP-1的表达和抑制细胞的增殖,而对SKOV3/TAX细胞无明显作用;PARP-1 siRNA可以明显增强紫杉醇对卵巢癌细胞增殖的抑制作用,逆转SKOV3/TAX细胞对紫杉醇的耐药性。结论 PARP-1在卵巢癌细胞表达水平与耐药性密切相关;PARP-1基因抑制可以增强紫杉醇对SKOV3增殖的抑制,逆转SKOV3/TAX对紫杉醇的耐药性。     

厚朴酚通过改变Bax/Bcl-X_L表达和激活caspase诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的研究厚朴酚诱导HeLa细胞凋亡机制。方法MTT法测定厚朴酚对HeLa和人正常胚肺HEL299细胞的细胞毒作用。通过显微镜,荧光染色观察细胞形态学变化,用琼脂糖凝胶电泳检测DNA片断化。用Western印迹法分析药物对蛋白质表达的影响。结果厚朴酚明显抑制HeLa细胞的增殖,诱导HeLa细胞调亡。对HEL299细胞的细胞毒作用弱于HeLa细胞。Caspase3,8,9,10及家族抑制剂可明显抑制厚朴酚诱导的凋亡。激动型Fas抗体CH11对厚朴酚诱导的HeLa细胞死亡有协同作用。Western印迹结果显示厚朴酚作用12h后Bax/BclXL表达比率升高,caspase3前体及其底物ICAD和PARP发生降解,磷酸化p53和p53蛋白表达增加。结论厚朴酚(80μmol·L-1)通过改变Bax/BclXL的表达激活caspase途径诱导HeLa细胞凋亡。     

两种化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌的疗效比较

非小细胞肺癌（non—small cell lungcancer,NSCLC）占肺癌的80％左右,就诊时约75％已属晚期,5年总生存率仅为10％-15％。目前,化疗在晚期NSCLC中扮演重要角色,20世纪90年代涌出了第3代细胞毒性药物（如紫杉醇、长春瑞滨、多西紫杉醇、吉西他滨）,其与铂类药物联合,使晚期NSCLC的生存期得到明显提高。我们应用紫杉醇（PTX）联合顺铂（PDD）（TP方案）和长春瑞滨（NVB）联合顺铂（NP方案）治疗晚期非小细胞肺癌61例,取得较好的效果,现报告如下。     

多烯紫杉醇联合奥沙利铂治疗老年晚期非小细胞肺癌疗效观察

目的观察多烯紫杉醇联合奥沙利铂治疗老年晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的临床疗效和毒副反应。方法30例老年NSCLC（Karnofsky评分≥60分,预计生存期≥3个月）患者采用多烯紫杉醇75 mg/m^2静脉滴注,第1天;奥沙利铂130 mg/m^2,静脉滴注,第2天;进行治疗。3周为1个周期,均治疗2个周期。结果30例NSCLC患者中,完全缓解2例、部分缓解14例、稳定7例、进展7例,总有效率53.3%（16/30）。主要毒副作用为骨髓抑制、胃肠道反应、肌肉及关节疼痛。结论多烯紫杉醇联合奥沙利铂治疗晚期非小细胞肺癌疗效较好,毒性可耐受,有利于提高患者的生活质量,延长生存期,尤适于老年耐药患者。     

化疗药体外干预诱导人乳腺癌细胞产生耐药性的研究

目的研究化疗药物高浓度冲击法和低浓度干预对乳腺癌细胞MDA-MB-231多药耐药性的影响。方法采用化疗药物紫杉醇、阿霉素高浓度冲击和紫杉醇低浓度短期干预MDA-MB-231细胞,SRB法检测细胞药敏性改变;HE染色检测细胞形态;免疫细胞化学检测P-gp蛋白表达变化;RT-PCR检测MDR1基因表达。结果阿霉素高浓度冲击后细胞未存活,紫杉醇高浓度冲击后细胞能存活并最终稳定生长(MDA-MB-231/a),SRB法检测IC50发现该细胞药敏性与野生型细胞(MDA-MB-231/w)无差异;紫杉醇低浓度短期干预后(MDA-MB-231/b)SRB法检测发现该细胞对多种化疗药的IC50比野生型略有提高;免疫细胞化学显示MDA-MB-231/aP-gp表达与野生型无差异,MDA-MB-231/bP-gp表达略有提高;RT-PCR检测发现MDA-MB-231/b中MDR1基因表达高于MDA-MB-231/w。结论化疗药物高浓度冲击法无法获得MDA-MB-231的耐药细胞,低浓度短期干预可以略微提高细胞的耐药性,提示低浓度持续诱导法可以获得MDA-MB-231的耐药细胞。     

洛匹那韦逆转LLC/cMOAT细胞多药耐药的作用

目的研究洛匹那韦对LLC/cMOAT细胞株多药耐药的逆转作用及其可能机制。方法采用四甲基偶氮唑盐方法（MTT）检测洛匹那韦对细胞株LLC/CMV和LLC/cMOAT细胞生存的影响,并检测阿霉素（ADM）、长春新碱（VCR）、环磷酰胺（CTX）、顺铂（DDP）对上述细胞株的半数抑制浓度（IC50）。应用流式细胞术检测洛匹那韦处理后细胞内化疗药物阿霉素相关的荧光强度变化。结果 LLC/cMOAT细胞对ADM、VCR、DDP有不同程度的耐药,对CTX未产生耐药;洛匹那韦在浓度小于10.0μmol·L^-1,对LLC/cMOAT细胞无明显细胞毒性作用;用2.5μmol·L^-1洛匹那韦处理后,LLC/cMOAT细胞对VCR和DDP的敏感性增高,浓度提高至5.0μmol·L^-1,敏感性明显提高;用洛匹那韦处理后LLC/cMOAT细胞内ADM的蓄积增加,并表现为浓度依赖;细胞周期检测分析显示,使用洛匹那韦处理0、4、8、16 h后,G1期细胞百分比由（42.65±3.75）%分别增至（56.77±2.37）%、（68.13±4.30）%、（70.25±5.12）%,与0 h G1期细胞数比较差异显著（P〈0.05）;使用洛匹那韦处理细胞48 h后,凋亡率增高且呈时间和浓度依赖性。结论洛匹那韦可以部分逆转LLC-cMOAT的多药耐药,这种逆转可能与增加细胞内化疗药物蓄积,诱导细胞G1期阻滞,增强细胞凋亡有关。     

MicroRNA-200a/TFAM通路调控紫杉醇对乳腺癌细胞的化疗敏感性

目的　探讨MicroRNA-200a/TFAM 在MCF-7 细胞对紫杉醇化疗敏感性中的作用。方法　分别采用实时荧光定量PCR、蛋白印迹法检测不同浓度紫杉醇处理MCF-7 细胞后miR-200a、TFAM 蛋白的表达差异;转染miR-200a（或antimiR-200a）联合紫杉醇处理MCF-7 细胞后,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和5- 溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）观察细胞增殖活力的变化;转染pcDNA3.1-TFAM 质粒联合紫杉醇处理MCF-7 细胞后,MTT 和BrdU 法检测细胞增殖活力的变化。结果　在MCF-7 细胞中,miR-200a 的表达量随紫杉醇浓度增加逐渐升高,而TFAM 的表达量随紫杉醇浓度升高逐渐下降。紫杉醇与miR-200a 共同作用于MCF-7 细胞,可增强紫杉醇对细胞增殖的抑制作用;紫杉醇与anti-miR-200a 共同作用于MCF-7 细胞时,可减弱紫杉醇对细胞增殖的抑制作用;而紫杉醇与TFAM 共同孵育MCF-7 细胞时,可减弱紫杉醇对细胞增殖的抑制作用。结论　miR-200a 及TFAM 参与调控紫杉醇对MCF-7 细胞的化疗敏感性。     

基于调控细胞凋亡的肿瘤化疗增敏策略

肿瘤多药耐药(multidrug-resistance,MDR)是肿瘤治疗中面临的一大难题。肿瘤对化疗药物产生耐药性的机制十分复杂,除癌细胞膜药物外排泵(Pgp等)过度表达所致外,细胞凋亡敏感性的异常变化也是其主要机制之一。文章综述了肿瘤凋亡通路异常改变引起耐药性的研究进展以及通过调整紊乱的凋亡通路克服MDR的策略。     

自噬水平与白血病K562/ADM细胞耐药的关系研究

目的采用阿霉素(adriamycin,ADM)“逐步提高药物浓度+间歇性诱导”的方式体外诱导建立稳定耐受15μmol·L^-1 ADM的白血病K562/ADM细胞,观察该细胞对其它化疗药物的敏感性以及细胞自噬水平与耐药的关系。方法MTT法检测细胞对几种化疗药物的敏感性;用透射电镜、荧光显微镜观察细胞自噬形态学改变;Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测自噬和耐药相关蛋白的表达水平。结果K562/ADM细胞除了对ADM产生明显耐药外,还对多种化疗药物如:吡柔比星、柔红霉素、5-FU和长春新碱等有交叉耐药,但对三氧化二砷较敏感。K562/ADM细胞内自噬体数量、MDC荧光强度以及LC3Ⅰ/Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平均高于亲本细胞。用3-MA抑制自噬可明显增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性,同时也能有效抑制K562/ADM细胞内耐药相关蛋白的表达。结论K562/ADM细胞出现多药耐药现象,且耐药性与细胞自噬水平有密切关系。     

和厚朴酚脂质体的制备及其体内外抗乳腺癌作用研究

目的 制备和厚朴酚脂质体（HK-Lipsomes）,探讨其对小鼠乳腺癌细胞（4T1细胞）的体内外生长抑制作用。方法 将蛋黄卵磷脂、胆固醇、mPEG2000-DSPE2000、和厚朴酚按照质量比3：1：1：1,以注入法制备成和厚朴酚脂质体。通过Zetasizer nano ZS测定和厚朴酚脂质体的粒径,透射电镜观察和厚朴酚脂质体的形态。用噻唑蓝（MTT）比色法评价和厚朴酚脂质体对4T1细胞的细胞毒性。建立小鼠4T1乳腺癌肿瘤模型,以紫杉醇注射液为阳性对照,考察腹腔给药后和厚朴酚脂质体对肿瘤的抑制作用。结果 制备得到的和厚朴酚脂质体的平均粒径为（113.8±0.2）nm,多分散指数（0.209±0.005）,电位为（-30.7±2.4）mV,透射电镜观察和厚朴酚脂质体为球型。和厚朴酚溶液和脂质体对4T1细胞的IC₅₀值分别为（43.74±2.38）μg/mL和（12.52±2.24）μg/mL。和厚朴酚脂质体高（60 mg/kg）、中（40 mg/kg）、低（20 mg/kg）剂量组的抑瘤率分别为85.19%、60.95%和37.83%,呈剂量相关性。结论 实验使用较为简便的制备方法成功制备粒径较小、包封率高的和厚朴酚脂质体。荷瘤小鼠体内实验显示抑瘤效果良好。     

Wnt信号通路转录上调EGFR促进非小细胞肺癌 吉非替尼耐药

目的 探讨Wnt信号通路和表皮生长因子受体（EGFR）在非小细胞肺癌（NSCLC）吉非替尼耐药中的作用 及其机制。方法 运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和免疫印迹实验（Western blot）检测EGFR在亲代HCC827细 胞与吉非替尼耐药细胞（HCC827/R）中的表达;免疫组化染色检测耐药前后3对NSCLC肿瘤组织中EGFR的表达。 双荧光素酶报告基因实验（Luciferase）检测亲代 HCC827 细胞与耐药 HCC827/R 细胞 Wnt 信号通路活化情况;在 Jaspar数据库中预测EGFR基因启动子区上TCF/LEF转录因子结合位点;染色质免疫共沉淀实验（Chip）和Luciferase 实验检测转录因子对基因表达的调控;功能阻断实验检测Wnt信号通路/EGFR途径介导吉非替尼耐药的作用。结 果 与亲代HCC827细胞相比较,HCC827/R细胞的EGFR在mRNA和蛋白水平表达均明显增高（P＜0.05）。免疫组 化染色结果显示在 3 例吉非替尼耐药前后 NSCLC 配对肿瘤组织样品中有 2 例耐药后 EGFR 表达较耐药前增加。 Luciferase实验结果显示,与亲代细胞比较,Wnt/β-catenin信号通路在耐药HCC827/R细胞中异常活化（P＜0.05）。生 物信息学分析预测到EGFR基因启动子区-1476~-1468区域存在Wnt/β-catenin信号通路下游转录因子TCF3/TCF4 结合位点,Chip和Luciferase实验证实Wnt/β-catenin信号通路可转录上调EGFR表达。功能阻断实验结果显示当利 用Wnt3a刺激亲代HCC827细胞的同时敲低EGFR,吉非替尼对细胞的抑制率较单独利用Wnt3a刺激细胞时的细胞 抑制率得到恢复（P＜0.05）。结论 Wnt/β-catenin信号通路转录上调EGFR促进NSCLC的吉非替尼耐药,其为提高 NSCLC吉非替尼靶向治疗效果提供了新的实验依据。     

急性白血病的多药耐药及逆转

多药耐药或多药抗性（MDR）系指肿瘤细胞或白血病细胞对结构和作用靶位不同的多种化疗药物有交叉耐药性,为化疗失败主要原因之一。按MDR发生机制有以下几点:（1）细胞膜上能量外排泵介导的 MDR,以 mdr-1/Pgp、MRP为代表;（2）胞质酶介导的MDR,以GST为代表;（3）胞核核孔蛋白介导的MDR,