手性柱液质联用法同时测定人体尿液中 泮托拉唑对映体浓度*

目的：建立同时测定人体尿液中左旋泮托拉唑和右旋泮托拉唑浓度的Chiral-LC-MS/MS方法。方法：以乙腈作为蛋白质沉淀剂,对尿液中的泮托拉唑对映异构体进行Chiral-LC-MS/MS分析。色谱柱：CHIRALPAK IE柱(4.6 mm × 150 mm,5 μm),柱温为30°C,流动相为乙腈-10 mM乙酸铵(含0.1%乙酸)(72：28,v/v),泮托拉唑对映异构体在9.0 min内可达到基线分离。使用电喷雾离子化(ESI)正离子模式,泮托拉唑和内标((R)-Pantoprazole-d6)的多反应监测(MRM)扫描离子对分别为m/z 384.1→200.1和390.1→206.0。结果：该方法无明显的介质效应,左旋泮托拉唑和右旋泮托拉唑在标准曲线范围内线性关系良好,标准曲线的线性范围均为2.500 ~5000 ng/mL,批内、批间准确度和精密度均小于15%。在泮托拉唑对映体的储存、处理和分析过程中没有发现两者间的手性转化,测定过程中各化合物稳定性符合要求。结论：建立了简单、高选择性的Chiral-LC-MS/MS方法,可用于同时测定人体尿液中的泮托拉唑对映体的浓度。     

α1—酸糖蛋白手性柱拆分泮托拉唑对映体

目的:建立泮托拉唑对映体拆分和对映体光学纯度测定方法。方法:用α1-酸糖蛋白手性固定相,考察了缓冲液的种类和pH、有机改性剂的种类和比例、流速及柱温对泮托拉唑对映体拆分的影响。采用Chiral-AGP柱(150 mm×4.6 mm,5μm,配有手性AGP预柱),以10 mmol·L-1醋酸铵缓冲液(pH 5.5)-乙腈(93:7)为流动相,在流速为0.9 mL·min-1,检测波长为290 nm,柱温为20℃的条件下拆分泮托拉唑对映体。结果:用α1-酸糖蛋白手性固定相能完全分离泮托拉唑对映体,分离度达1.77,并测定了泮托拉唑对映体过量百分率。结论:流动相pH和有机改性剂含量是影响对映体分离的重要因素,可以以调节流速和柱温来提高柱效、改善分离。     

右旋泮托拉唑在人体内构型转化的研究右旋泮托拉唑在人体内构型转化的研究

目的研究右旋泮托拉唑在健康人体内的构型转化。方法志愿者单剂量口服右旋泮托拉唑肠溶胶囊后,采集血浆样品,用HPLC法测定血浆中泮托拉唑两对映体总浓度,再用α₁-酸糖蛋白手性柱分离泮托拉唑对映体,测定其色谱峰面积比值,计算得到右旋和左旋泮托拉唑血浆浓度。结果左旋泮托拉唑的平均AUC_0-t不超过泮托拉唑AUC_0-t的1.5%。结论中国健康志愿者口服右旋泮托拉唑后,在体内不发生构型转化。     

Chiral-LC-MS/MS法同时测定人血浆中兰索拉唑对映体的浓度

目的:建立Chiral-LC-MS/MS法同时测定人血浆中S-兰索拉唑和R-兰索拉唑的浓度.方法:以乙腈作为蛋白质沉淀剂,对血浆中的兰索拉唑对映异构体进行Chiral-LC-MS/MS分析.色谱柱:Chiralpak IC柱(4.6 mm×150 mm,5μm),柱温为30℃,流动相为10 mmol·L-1醋酸铵(含0.05%醋酸)-乙腈(50:50,v/v),兰索拉唑对映异构体在9.0 min内可达到基线分离.采用AB QTRAP 5500质谱仪,使用电喷雾离子化(ESI)正离子模式,兰索拉唑和内标(埃索美拉唑)的多反应监测(MRM)扫描离子对分别为m/z 370.1→252.1和346.1→198.1.结果:该方法无明显的基质效应,S-兰索拉唑和R-兰索拉唑在标准曲线范围内线性关系良好,标准曲线的线性范围均为20.00~10000 ng·mL-1,准确度在±15%,批内和批间精密度均小于10%.在兰索拉唑对映体的储存、 处理和分析过程中没有发现两者间的手性转化,测定过程中各化合物稳定性符合要求.结论:建立了简单、高选择性的Chiral-LC-MS/MS方法,可用于同时测定人血浆中的兰索拉唑对映体的浓度.     

手性Chiralcel OD-RH柱拆分3种质子泵抑制剂对映体

目的建立了以纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)为手性固定相拆分兰索拉唑、雷贝拉唑和泮托拉唑对映体的高效液相色谱法(HPLC)。方法考察了流动相中有机改性剂的种类和比例、pH、流速和柱温等对对映体分离的影响。结果拆分兰索拉唑、雷贝拉唑的流动相为水-甲醇(15:85);拆分泮托拉唑的流动相为磷酸盐缓冲液(pH6.0,20mmol.L-1)-乙腈(70:30)。结论兰索拉唑、雷贝拉唑和泮托拉唑对映体均可以在Chiralcel OD-RH手性柱上实现完全分离。     

注射用左旋泮托拉唑钠和泮托拉唑钠在氯化钠注射液中的稳定性研究

目的：以HPLC法对注射用左旋泮托拉唑钠和泮托拉唑钠在氯化钠注射液中的稳定性进行研究。方法：色谱柱：Chiral Pak IC柱（4.6 mm×150 mm,5μm）;流动相：10 mmol·L-1乙酸铵（含0.05%乙酸）-乙腈（35∶65）;流速：0.6 mL·min-1;检测波长：288 nm;柱温：30℃;进样体积：1μL。结果：注射用左旋泮托拉唑钠在氯化钠注射液中未发生左旋及右旋泮托拉唑间的手性转换;注射用左旋泮托拉唑钠和泮托拉唑钠在室内放置12 h稳定性良好,但在日光下放置后含量下降。结论：临床上使用注射用左旋泮托拉唑钠和泮托拉唑钠溶于氯化钠注射液时,须避免户外日光直射。     

键合型直链淀粉手性固定相分离5种质子泵抑制剂对映体

目的使用HPLC手性固定相法实现5种质子泵抑制剂对映体的分离。方法考察手性固定相种类,流动相中有机改性剂的种类和比例,缓冲盐的种类和浓度,碱性添加剂,流速及柱温等因素对分离的影响。结果通过不断优化色谱分离条件,最终确定5种药物的分离条件:色谱柱为Chiralpak ID柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温为25℃,流速为0.6 mL·min~(-1),分离泮托拉唑、雷贝拉唑对映体的流动相为水-乙腈(60∶40,v/v),分离奥美拉唑对映体的流动相为水-乙醇(20∶80,v/v),分离兰索拉唑对映体的流动相为5 mmol·L~(-1)醋酸铵水溶液-乙腈(60∶40,v/v),分离艾普拉唑对映体的流动相为20 mmol·L~(-1)碳酸氢铵水溶液-乙腈(55∶45,v/v)。在上述条件下,5种质子泵抑制剂对映体均达到完全分离。结论键合型直链淀粉手性固定相对5种质子泵抑制剂对映体均实现完全分离。     

泮托拉唑有关物质及对映体的分离

目的建立泮托拉唑有关物质及对映体分离的方法。方法采用Inertsil C18色谱柱，磷酸盐缓冲液-乙腈(67：33)为流动相，检测波长为288nm，分离泮托拉唑的有关物质。采用Kromasil CHI-TBB色谱柱，异丙醇-正己烷-三乙胺-醋酸(10：90：0．15：0．05)为流动相，检测波长为288nm，以联二萘酚作为拆分剂，运用包结拆分法获得光学纯的泮托拉唑。结果采用所选色谱系统，泮托拉唑有关物质能得到良好的分离；能获得光学纯的泮托拉唑。结论所选方法分离度大。柱效稳定。     

泮托拉唑有关物质及对映体的分离

目的　 建立泮托拉唑有关物质及对映体分离的方法。 方法 　采用InertsilC1 8色谱柱 ,磷酸盐缓冲液 乙腈 (6 7∶33)为流动相 ,检测波长为 2 88nm ,分离泮托拉唑的有关物质。采用KromasilCHI TBB色谱柱 ,异丙醇 正己烷 三乙胺 醋酸 (10∶90∶0 15∶0 0 5 )为流动相 ,检测波长为 2 88nm ,以联二萘酚作为拆分剂 ,运用包结拆分法获得光学纯的泮托拉唑。 结果 　采用所选色谱系统 ,泮托拉唑有关物质能得到良好的分离 ;能获得光学纯的泮托拉唑。 结论 　所选方法分离度大 ,柱效稳定     

左旋泮托拉唑镁对动物实验性十二指肠溃疡的影响

目的研究左旋泮托拉唑镁对动物实验性十二指肠溃疡的影响。方法应用大鼠半胱胺型十二指肠溃疡模型、大鼠醋酸烧灼型十二指肠溃疡模型 ,观察左旋泮托拉唑镁口服对十二指肠溃疡的预防与治疗作用。结果左旋泮托拉唑镁能明显降低大鼠半胱胺型十二指肠溃疡的溃疡指数 ;连续 7d给予 1 5、3 0、9 0mg·kg-1·d-1的左旋泮托拉唑镁可显著促进大鼠醋酸烧灼型十二指肠溃疡的愈合 ,右旋与消旋泮托拉唑镁也可促进溃疡的愈合 ,但作用较左旋体弱。结论左旋泮托拉唑镁的抗实验性十二指肠溃疡作用强于右旋与消旋泮托拉唑镁。     

HPLC-MS/MS法测定人血浆中华法林对映体浓度及其临床应用

目的:建立HPLC-MS/MS法测定深静脉血栓患者血浆中华法林对映异构体的浓度。方法:以华法林-d5为内标,经甲醇沉淀蛋白后,采用CHIRALPAK?AS-3R手性色谱柱(4.6 mm×150 mm,3μm)分离样品,流动相为甲醇-含0.1%甲酸的醋酸铵水溶液(95∶5)。采用质谱检测系统,电喷雾离子源(ESI源),负离子扫描,多反应监测模式(MRM)监测m/z 307.0→160.8(华法林)及m/z 313.0→160.8(华法林-d5)。采集77名深静脉血栓患者稳态血样后,以HPLC-MS/MS法测定血浆中华法林对映异构体的浓度,并计算S-华法林与R-华法林浓度的比值(CS/R)。结果:华法林的2个对映异构体质量浓度在5~1 500 ng·mL-1内线性关系良好,定量下限为5 ng·mL-1。R-华法林批内和批间精密度的RSD为5.0%~8.1%和8.3%~13.4%,提取回收率85.9%~97.7%;S-华法林批内和批间精密度的RSD为6.2%~7.0%和6.8%~15.0%,提取回收率82.4%~93.9%。2个异构体均无基质效应影响,不同条件下的稳定性试验均满足要求。77名患者体内R-华法林与S-华法林稳态血浆药物质量浓度分别为(458.52±226.55)ng·mL-1和(239.63±152.83)ng·mL-1,其血浆药物浓度比值的平均值约为0.53±0.34。结论:本方法快速、简便、可靠,适用于深静脉血栓患者体内华法林对映异构体血药浓度的检测,能够指导临床合理用药。     

气相色谱法拆分醒脑静注射液中龙脑对映体及含量测定

目的:采用气相色谱法拆分醒脑静注射液中龙脑对映体,并通过对映体的分离测定含量。方法:采用CYCLOSIL-B(30m×0.25 mm×0.25μm)手性毛细管色谱柱、FID检测器,以内标法测定醒脑静注射液中左旋龙脑和右旋龙脑的含量。结果:龙脑对映体在CYCLOSIL-B手性毛细管色谱柱上具有较好的分离效果,其分离度为2.04。左旋龙脑和右旋龙脑线性范围分别为0.048～0.960和0.050～1.008 mg·mL-1(r≥0.9991);冰片投料为天然冰片的样品中右旋龙脑平均回收率(n=6)为98.4%,RSD为1.8%;冰片投料为艾片的样品中左旋龙脑的平均回收率(n=6)为99.1%,RSD为1.9%。结论:所建立的方法简单、准确、可靠,能用于醒脑静注射液的质量控制。     

正负离子切换液相色谱-串联质谱法同时测定人血浆中头孢他啶和他唑巴坦

目的:建立灵敏、专属的液相色谱-串联质谱法同时测定人血浆中头孢他啶和他唑巴坦,并用于临床药代动力学研究。方法:血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,以乙腈-5 mmol.L-1醋酸铵-甲酸(20∶80∶0.16,v/v/v)为流动相,使用VenusilASB-C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离。采用电喷雾电离源,多反应监测模式(MRM),以正负离子切换同时测定头孢他啶和他唑巴坦,切换时间在进样后3.8 min。头孢他啶采用正离子检测,用于定量的离子反应分别为m/z 547→468(头孢他啶),m/z 364→208(内标头孢羟氨苄),头孢他啶和内标头孢羟氨苄的保留时间分别为3.0 min和2.8 min;他唑巴坦采用负离子检测,用于定量的离子反应分别为m/z 299→138(他唑巴坦),m/z 232→140(内标舒巴坦),他唑巴坦和内标舒巴坦的保留时间分别为4.4 min和4.9 min。结果:头孢他啶和他唑巴坦的线性范围分别为0.250～250μg.mL-1和0.0250～25.0μg.mL-1,日内、日间精密度(RSD)均小于10.8%,准确度(RE)在-7.6%～2.1%之间。本法被成功应用于健康受试者静脉滴注不同剂量头孢他啶/他唑巴坦钠(6∶1)注射液(头孢他啶/他唑巴坦含量分别为1 g/0.167 g,2 g/0.333 g,4 g/0.667 g)的药动学研究。结论:该方法专属性强,灵敏度高,操作简便,适用于注射用头孢他啶/他唑巴坦临床药代动力学研究。     

HPLC-MS/MS法测定人血浆中右旋雷贝拉唑和左旋雷贝拉唑浓度及其人体药动学研究

目的:利用手性色谱柱建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法同时测定人血浆中右旋雷贝拉唑(dexrabeprazole,DLBLZ)和左旋雷贝拉唑(levrabeprazole,LLBLZ)的浓度,并用于注射用右旋雷贝拉唑钠的人体药动学研究。方法:采用AB Sciex API4000液质联用仪,ESI离子源,大赛璐CHIRALPAK?IC(250 mm×4.6 mm,5μm)手性色谱柱,流动相为乙腈-10 mmol·L^-1醋酸铵(75∶25,v/v),流速为1 m L·min-1,以同位素氘代右旋雷贝拉唑(D-DLBLZ)为内标,血浆样品经乙腈沉淀蛋白后取上清液进样2μL分析。入选40例健康志愿者参与注射用右旋雷贝拉唑钠人体药动学研究。结果:建立的HPLC-MS/MS法在1.00~1500μg·L^-1范围内DLBLZ线性关系良好,在1.50~1500μg·L^-1范围内LLBLZ线性关系良好。对两待测物进行全面的方法学验证,结果显示标准曲线、选择性、最低定量限、精密度与准确度、回收率、基质效应和稳定性等均满足检测要求。结论:本实验室建立的HPLC-MS/MS法选择性强、灵敏度高、手性拆分分离度好,适用于人血浆中DLBLZ和LLBLZ的浓度测定,并成功应用于注射用右旋雷贝拉唑钠的人体药动学研究。     

HPLC-MS/MS法检测人血浆中游离花生四烯酸浓度

目的:建立测定人血浆中花生四烯酸浓度的液相色谱串联质谱法。方法:以奥美拉唑为内标,待测血浆经乙酸乙酯萃取后,采用Agilent SB-C18(2.1 mm×100 mm,3.5μm)色谱柱,以水-甲醇(10∶90,v/v)为流动相,流速0.2 mL.min-1,柱温25℃;采用电喷雾离子源(ESI)负离子模式将样品离子化,多反应监测(MRM)模式下对花生四烯酸(m/z 303.2→259.2)和奥美拉唑(m/z 344.2→191.1)进行测定。结果:花生四烯酸在497.88～4997.24 ng.mL-1范围内线性关系良好(r=0.9989)。低、中、高浓度的平均回收率均大于70%,批内与批间RSD均小于10%。结论:本方法简单、快速、灵敏,适用于大样本量血浆中游离花生四烯酸的分析研究。     

Simultaneous determination of warfarin enantiomers and its metabolite in human plasma by column-switching high-performance liquid chromatography with chiral separation

A simple and sensitive column-switching high-performance liquid chromatographic method for the simultaneous determination of warfarin enantiomers and their metabolites, 7-hydroxywarfarin enantiomers, in human plasma is described. Warfarin enantiomers, 7-hydroxywarfarin enantiomers, and an internal standard, diclofenac sodium, were extracted from 1 mL of a plasma sample using diethyl ether-chloroform (80:20, v/v). The extract was injected onto column I (TSK precolumn BSA-C8, 5 microm, 10 mm x 4.6 mm inside diameter) for cleanup and column II (Chiralcel OD-RH analytical column, 150 mm x 4.6 mm inside diameter) coupled with a guard column (Chiralcel OD-RH guard column, 10 mm x4.6 mm inside diameter) for separation. The mobile phase consisted of phosphate buffer-acetonitrile (84:16 v/v, pH 2.0) for clean-up and phosphate buffer-acetonitrile (45:55 v/v, pH 2.0) for separation. The peaks were monitored with an ultraviolet detector set at a wavelength of 312 nm, and total time for chromatographic separation was approximately 25 minutes. The validated concentration ranges of this method were 3 to 1000 ng/mL for (R)- and (S)-warfarin and 3 to 200 ng/mL for (R)- and (S)-7-hydroxywarfarin. Intra- and interday coefficients of variation were less than 4.4% and 4.9% for (R)-warfarin and 4.8% and 4.0% for (S)-warfarin, and 5.1% and 4.2% for (R)-7-hydroxywarfarin and 5.8% and 5.0% for (S)-7-hydroxywarfarin at the different concentrations. The limit of quantification was 3 ng/mL for both warfarin and 7-hydroxywarfarin enantiomers. This method was suitable for therapeutic drug monitoring of warfarin enantiomers and was applied in a pharmacokinetic study requiring the simultaneous determination of warfarin enantiomers and its metabolite, 7-hydroxywarfarin enantiomers, in human volunteers.     

高效液相色谱流动相添加剂法拆分亚叶酸钙

目的：利用高效液相色谱手性流动相添加剂法拆分亚叶酸钙对映异构体。方法：通过探讨色谱柱、柱温、手性配合剂、流动相的pH值对手性拆分的影响,确定乙腈-苯丙氨酸溶液（8 mmol L-苯丙氨酸、4 mmol硫酸铜,加水1000 mL,氢氧化钠试液调节pH至3.5）（10∶90）为手性流动相, Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）拆分亚叶酸钙对映体,检测波长为300 nm,柱温20℃。结果与结论：建立的方法简单易行,可用于药品质量控制与体内代谢立体选择性的研究。     

高效液相色谱串联质谱法测定人体血浆中阿那曲唑的浓度

目的建立液质联用法来检测人体血浆中阿那曲唑的浓度。方法血浆样品经MTBE萃取后,选用来曲唑为内标。色谱柱为Thermo Hypurity C18柱(2.1 mm×150 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸(60∶40);流速为0.20 mL.min-1;采用ESI+MRM进行离子方式监测;源电压:3.6 kV;源温度:100℃;阿那曲唑和来曲唑的离子选择通道分别为:m/z294.69→225.41,286.25→217.60。结果阿那曲唑的线性范围为0.214~214 ng.mL-1,最低检测浓度为0.214 ng.mL-1,方法回收率在80%~120%,日内、日间RSD均<15%。结论本方法简单、灵敏,可以准确检测人体血浆中阿那曲唑的浓度。