兔血浆中地非三唑(DL111-IT)高效液相色谱荧光检测方法

目的　建立兔血浆中DL111 IT的高效液相色谱荧光检测法。方法　血浆样品和内标格列本脲经氯仿提取后 ,选用DiamonsilODS C18柱 (15 0mm× 4 . 6mm ,5 μm) ,乙腈 - 0 . 0 2 5mol·L-1磷酸氢二铵缓冲溶液 (磷酸调pH 5 .0 ) (6 0 .4 0 ,V/V)为流动相 ,流速 1 0mL·min-1,荧光检测 (λex=2 5 0nm ,λem=332nm)。结果　DL111 IT在浓度 1 .0 0～ 2 0. 0 0ng·mL-1范围内呈良好线性 ,r=0. 9996 ,n =5。高 (2 0 . 0 0ng·mL-1)、中 (10 . 0 0ng·mL-1)、低 (1 .0 0ng·mL-1) 3个质控样本平均提取回收率分别为85 . 3%± 1 .3% ,84 .9%± 2 . 7% ,85 . 8%± 1 .8% ,方法回收率分别为 99 .5 %± 0 . 4 % ,10 2 . 1%± 1. 8% ,10 .1 3%± 2 .4 % ;日内(n =5 )和日间 (n =5 )RSD分别低于 3 .0 %和 7. 0 %。血浆样品检测限为 0 3ng·mL-1(S/N =3) ,定量限为 1ng·mL-1(S/N =10 ,RSD <7 .0 % )。结论　本法准确、灵敏、操作简便 ,为DL111 IT药代动力学研究提供了方法学基础。     

高效液相色谱法测人血浆中阿魏酸哌嗪浓度及其药动学研究

目的建立灵敏的HPLC法测定人血浆中阿魏酸哌嗪浓度,并进行其健康志愿者药动学研究。方法采用液-液萃取,C18柱分离,0·1%冰醋酸-甲醇(60∶40, V/V)洗脱,紫外波长310 nm检测。20名男性健康志愿者口服200 mg阿魏酸哌嗪分散片,测定阿魏酸哌嗪浓度,DAS 2·0软件计算主要药动学参数。结果阿魏酸哌嗪线性范围为5 ~3000 ng·mL-1,提取回收率约为70%,日内和日间变异分别小于8·9%和10·1%。阿魏酸哌嗪主要药动学参数分别为:Cmax1 144·487 ±599·839 ng·mL-1,Tmax0·37 ±0·08 h,t1/20·805 ±0·298 h,AUC0 -4604·019 ±232·874 ng·mL-1·h,AUC0 -∞611·778 ±234·147 ng·mL-1·h。结论建立的HPLC法快速,灵敏,适合阿魏酸哌嗪药动学研究及大样本测定。     

LC-MS/MS法测定全血中他克莫司浓度及对肝移植患者药动学研究

目的:建立LC-MS/MS法测定人全血中他克莫司浓度,以此法研究中国肝移植患者体内的药动学特征。方法:100μL全血标本采用硫酸锌破裂血细胞,加入乙醚液液萃取,分离有机相,以氮气吹干后流动相复溶进样。色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18柱(3.5μm,2.1 mm×100 mm),流动相为2 mmol·L-1乙酸铵水溶液和甲醇(5∶95,v/v),流速0.3 mL·min-1,采用多反应监测进行定量,ESI正离子方式进行检测,他克莫司与内标子囊霉素用于定量分析的检测离子对分别为m/z 821.8→768.6和m/z 809.8→756.7。采用常规监测移植患者的他克莫司标本,比较LC-MS/MS法与MEIA法检测结果。采集19例肝移植患者服用他克莫司后第一周和第三周全血,采用本法测定浓度并计算主药动学参数。结果:本法线性范围为0.46~92 ng·mL-1(r=0.9997),最低检测浓度为0.46 ng·mL-1。低、中、高三个浓度的日内和日间相对标准差(RSD)均<15%,平均提取回收率为(55.46±4.13)%。LC-MS/MS法与MEIA法检测结果具有较好的相关性(r2=0.7701)。肝移植患者第一周及第三周AUC0-12分别为(71.3±39.6)ng·h·mL-1和(116.1±62.2)ng·h·mL-1,AUC0-∞分别为(137.3±90.5)ng·h·mL-1和(183.3±95.5)ng·h·mL-1,Cmax分别为(9.0±5.2)ng·mL-1和(13.5±9.6)ng·mL-1,Tmax分别为(2.2±1.2)h和(4.2±2.7)h,t1/2分别为(9.7±3.5)h和(7.0±2.2)h,C0分别为(3.9±2.6)ng·mL-1和(6.4±3.6)ng·mL-1。结论:本研究所建立的方法快速准确、灵敏、专属性强,适用于他克莫司血药浓度监测和人体药动学研究。     

高效液相色谱-质谱法研究依托红霉素颗粒的生物等效性

目的:建立人血浆中红霉素和红霉素丙酸酯的高效液相色谱-质谱测定法,并研究其在健康志愿者的药动学及相对生物利用度.方法:单剂口服依托红霉素颗粒450 mg后,血样经二氯甲烷-正己烷(3∶2)提取,进行LC-MS分析.结果:红霉素丙酸酯的线性范围为19.4～2910.0 ng·mL-1,定量下限为19.4ng·mL-1,提取回收率为87.9%～94.3%;红霉素的线性范围为20.3～1014.0ng·mL-1,定量下限为20.3ng·mL-1,提取回收率为76.0%～84.8%.人体中红霉素丙酸酯的药动学参数为:Cmax为(3 114.8±554.9)ng·mL-1,Tmax为(2.20±0.47)h,t1/2为(2.86±0.69)h,AUC0～t为(14699±2605)ng·h·mL-1,;红霉素的药动学参数为:Cmax为(910.3±213.5)ng·mL-1,Tmax为(1.75 ±0.30)h,t1/2为(3.69±0.94)h,AUC0～t为(4173±1121)ng·h·mL-1.结论:2种依托红霉素素制剂具有生物等效性,本方法灵敏、准确、简便,适用于临床药动学及生物等效性研究.     

高效液相色谱法测定大鼠血浆内厄洛替尼的浓度及其药动学研究

目的 建立以高效液相色谱法测定大鼠血浆中厄洛替尼浓度的方法,并研究其在大鼠体内的药物动力学.方法 色谱柱为Dikma Diamonsil C18,流动相为乙腈-水=60∶40(pH=2.0),流速为1.2 mL· min-1,柱温为35℃;检测波长331nm.结果 厄洛替尼血药浓度在80～4 000 ng·mL-1与峰面积线性关系良好(r=0.997 7),最低检测限为80 ng·mL-1;日内、日间RSD均≤10％,提取回收率在83.77％～85.68％.6只SD大鼠单剂量静脉给予厄洛替尼(10 mg·kg-1)后药动学参数分别为:Cmax=(1.203×103士118.2)ng·mL-1; t1/2=(23.24±2.33)h;AUC0-r=(4.713×103士213.6) ng· h· mL-1;AUC0-∞=(5.363×103±323.6) ng· h· mL-1;MRT=(25.91±2.34)h;Vd=(28.44±1.58)L.结论 本方法简便、准确、灵敏、专属性强,同样适用于人血浆中厄洛替尼浓度的测定及其药动学研究,对于评价厄洛替尼疗效和安全性有重要意义.     

HPLC法测定更昔洛韦在家兔房水内的浓度及其市售滴眼液的药动学研究

目的:建立了HPLC法检测更昔洛韦在家兔房水内药物浓度的方法,并研究更昔洛韦滴眼液在家兔眼内的药动学行为.方法:房水样品用20 %(v/v)高氯酸沉淀蛋白后取上清液直接进样,HPLC法测定.色谱柱使用LiChrospher C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.05 mol·L-1醋酸铵水溶液(0.4:99.6,v/v);流速为 1.0 mL·min-1;柱温为30℃;检测波长为 254 nm.结果:房水样品中药物浓度在 40.0 ng·mL-1～ 400.0 ng·mL-1的范围内呈良好的线性关系,方程为A=84.786c 6254.7,r=0.9994(n=10).低中高3种浓度的方法学平均回收率为97.0%、98.7%和102.4%,高中低3种浓度提取回收率均符合要求.日间和日内精密度均小于5%.最低检测限(LOD)为 20.0 ng·mL-1.家兔药动学参数:T1/2α:(1.95±0.78) h , T1/2β: (26.46±8.84 )h, AUC0→48: (10184±3437)ng·mL-1·h-1, Tpeak:(1.500±0.40)h, Cmax:(258.80±67.60 )ng·mL-1.研究表明,市售更昔洛韦滴眼液药时曲线符合二室模型一级吸收.结论:该方法专属性强、灵敏度高、重现性好,适合于GCV在家兔房水内的药物浓度测定及其在眼内的药代动力学研究.     

格列吡嗪血药浓度测定及中国健康人体药动学研究

目的建立反相高效液相色谱法测定人血浆中格列吡嗪浓度的方法, 以及研究格列吡嗪片在中国健康人体的药物动力学. 方法以Kiomasal C18(4.6 mm×125 mm 5 μm)为分析柱,乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液(38∶62,v/v) 为流动相,流速为1.0 mL·min-1,二极管阵列检测器(DAD)检测波长为225 nm,艾司唑仑为内标,测定血浆中格列吡嗪的浓度.结果在浓度20.4～2 040 ng· mL-1,格列吡嗪和内标峰的面积比值与浓度呈良好的线性关系(r=0.999 3).格列吡嗪高、中、低3个浓度的平均回收率分别为(105.2±4.4)%、(92.9±5.0)%、(109.4±8.4)%;日内、日间RSD均小于10%.药物动力学研究表明,格列吡嗪体内过程符合一室模型,体内药物tmax、cmax、t1/2(Ke) 、AUC0～24分别为(1.6±0.3) h、(728.5±229.7)ng·mL-1、(3.3±0.9)h、(4 130.5±1 383.0)ng·h· mL-1. 结论方法简便、快速准确、重现性好,可用于格列吡嗪的药动学研究.     

高效液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)法测定人血浆中多潘立酮的浓度

目的:建立高效液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)法测定人血浆中多潘立酮的浓度.方法:采用Waters公司SymmetryTM C18(3.9 mm×150 mm,5 μm)色谱柱;流动相为 20 mmol·L-1乙酸铵-甲醇(15∶85);流量为 0.6 mL·min-1;采用多反应离子监测(MRM)检测.结果:多潘立酮在0.3～50.0 ng·mL-1浓度范围内有良好的线性关系;最低检测浓度为 0.3 ng·mL-1;日内、日间RSD均小于15%;准确度均在±15%范围内.结论:本方法简单、快速、灵敏、准确,可用于人血浆中多潘立酮浓度的检测.     

高灵敏度HPLC法测定血浆中昂丹司琼含量及口崩片的生物利用度

目的建立高灵敏度HPLC法测定血浆中昂丹司琼含量,并研究盐酸昂丹司琼口崩片的生物利用度.方法采用液-液萃取,氰基柱分离,检测波长为310 nm,格拉司琼为内标.随机交叉设计,20名健康志愿者单剂量口服盐酸昂丹司琼口崩片或普通片8 mg,考察其药代动力学与生物利用度.结果定量限为0.25 ng·mL-1,昂丹司琼和内标的提取回收率约为85%和90%,线性范围为0.5±50 ng·mL-1,相关系数介于0.997 1-0.999 9.批内与批间精密度分别介于1.78%～2.38% 和3.88%～5.19%.浓度分别为2、10、30 ng·mL-1的质控样品的回收率分别为104.7%±4.4%、102.2%±1.1%、99.51%±2.34%.口崩片的AUC0-t、AUC0-∞、Cmax、Tmax和T1/2分别为230.2±78.0 ng·h·mL-1、265.2±101.5 ng·h·mL-1, 35.67±8.94 ng·mL-1、1.51±0.79 h、 5.00±1.41 h.方差分析表明口崩片和普通片的药动学参数无显著性差异,90%可信限介于生物等效范围之内.结论建立了高灵敏度HPLC法测定昂丹司琼的含量,并应用于盐酸昂丹司琼口崩片药动学和生物利用度评价.     

HPLC-UV法测定人血浆中雷贝拉唑的浓度

目的:建立一种稳定可靠的HPLC-UV法测定血浆中雷贝拉唑的药物浓度。方法:以对羟基苯甲酸乙酯为内标,二氯甲烷-异丙醇(90∶10,V/V)为提取溶媒,流动相为0.1 mol.L-1醋酸铵(pH7.5)-乙腈-甲醇(64∶31∶5,V/V/V),检测波长290 nm。结果:在线性范围2.5~2030.0ng.mL-1内低、中、高浓度雷贝拉唑的回收率分别为:81.5%、80.7%、73.5%;低、中、高浓度的批内RSD分别为:8.2%、2.8%、4.2%;批间RSD分别为:10.5%、2.9%、3.8%。冻融试验结果表明低、中、高浓度的变异均小于10%。结论:此方法灵敏度高、稳定性好、特异性高、干扰少,可以很好地满足多种剂型雷贝拉唑药代动力学和生物等效性研究的要求。     

二甲基氨基偶氮苯诱导大鼠肝癌中组胺H_1受体的基因表达

目的　探讨大鼠肝癌中组胺H1受体基因的mRNA表达情况。方法　采用二甲基氨基偶氮苯 (DAB)诱发大鼠肝癌模型 ,以逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)半定量法研究肝癌组织、远癌肝组织与正常肝组织中组胺H1受体基因的mRNA表达 ,并将其PCR产物进行测序。结果　组胺H1受体mRNA在肝癌组织中的表达明显低于远癌肝组织 (P <0 0 1)和对照组肝组织 (P <0 0 1) ,且肝癌中组胺H1受体mRNA的碱基发生点突变。结论　组胺H1受体基因的转录减少以及H1受体基因的点突变可能与DAB诱导的大鼠肝癌形成有关。     

促红细胞生成素对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨促红细胞生成素对过氧化氢氧化损伤人视网膜色素上皮细胞的保护作用及其机制。方法采用600μmol.L-1的过氧化氢造成体外培养的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤模型。实验设计分为5组:对照组,过氧化氢模型组,过氧化氢+10 kIU.L-1EPO组,过氧化氢+20 kIU.L-1EPO组和过氧化氢+40 kIU.L-1EPO组。MTT法检测细胞活性,测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞法测定细胞的凋亡率。结果过氧化氢模型组RPE细胞的活性明显降低,不同浓度的EPO药物干预组的细胞活性较模型组明显升高,并随着EPO浓度的升高而升高。过氧化氢模型组RPE细胞SOD活性降低,MDA的含量增加;而EPO药物干预组SOD活性较模型组明显升高,MDA含量减少,差异有显著性。过氧化氢模型组RPE细胞的凋亡率升高,而不同浓度的EPO药物干预组降低RPE的凋亡率,凋亡率随着EPO浓度的升高而降低。结论促红细胞生成素对过氧化氢诱导的人RPE细胞的氧化损伤有保护作用,其机制可能与抑制氧化反应、提高抗氧化酶活性、减少细胞凋亡有关。     

五步蛇毒对大鼠海马组胺受体H_1 mRNA和蛋白质表达的影响

目的研究五步蛇毒对大鼠海马组胺受体H1mRNA及蛋白质表达的影响。方法用半定量RT-PCR和Western blot方法,检测腹腔注射五步蛇毒后不同时相大鼠海马组胺受体H1mRNA及蛋白质表达的变化。结果五步蛇毒处理后,大鼠海马组胺受体H1mRNA及蛋白质的表达在各时相点均发生变化,且其mRNA和蛋白质表达均为先下调后上调。结论五步蛇毒对大鼠脑区海马组胺H1受体mRNA和蛋白质表达都有影响。H1受体mRNA和蛋白质表达的改变对大脑的生理功能有一定的影响,可能是该蛇毒致脑功能障碍的分子基础之一。     

决明子中降血脂有效成分的提取分离

本文从决明子的降血脂有效成分中提取分离得到三种单体H_1、H_2、H_3。根据这三种单体的定性反应结果和红外光谱数据,认为它们可能是羟基蒽醌的葡萄糖甙。     

三肽化合物酪丝亮肽(YSL)对腹水型肝癌H_(22)小鼠免疫调节作用实验研究

目的观察三肽化合物酪丝亮肽(tyroserleutide,YSL)对腹水型肝癌H22小鼠的抗肿瘤作用,观察YSL对荷瘤小鼠T淋巴细胞转化及NK细胞杀伤活性的影响。方法建立腹水型肝癌H22小鼠动物模型,观察YSL对腹水型肝癌H22小鼠生存时间的影响;以MTT法检测YSL对荷瘤小鼠T淋巴细胞转化及NK细胞杀伤活性的影响。结果YSL能够明显延长腹水型肝癌H22小鼠生存时间;YSL在5μg.kg-1和50μg.kg-1时可以促进腹水型肝癌H22小鼠T淋巴细胞的转化;YSL在0.5、5和50μg.kg-1时增强荷瘤小鼠NK细胞杀伤活性。结论YSL可以延长腹水型肝癌H22小鼠的生存时间;促进荷瘤鼠的T淋巴细胞转化及NK细胞杀伤活性。     

δ阿片受体激活对过氧化氢损伤的心肌细胞的保护作用

目的研究δ阿片受体激活剂D-丙(2)-D-亮-(5)-脑啡肽(DADLE)对过氧化氢(H2O2)损伤的心肌细胞的保护作用及其机制。方法分离乳大鼠心肌细胞,培养48h后分为正常对照、H2O2(200μmol.L-1)、H2O2+DADLE(1μmol.L-1)、H2O2+DADLE+纳曲吲哚(10μmol.L-1)和H2O2+DADLE+U0126(10nmol.L-1)组,继续培养48h。用[3H]TdR掺入法检测心肌细胞增殖反应,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡百分率,乳酸脱氢酶(LDH)活性测定试剂盒测定培养上清LDH活性,硫代巴比妥酸显色法测定细胞内丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western蛋白印迹法检测细胞外信号调节激酶磷酸化(p-ERK)水平。结果①与正常对照组比较,H2O2组心肌细胞[3H]TdR掺入值明显降低,细胞凋亡率升高;培养上清LDH活性和MDA含量明显增加,SOD活性和Ap-ERK/AERK的比值降低。②与H2O2组比较,DADLE可使心肌细胞[3H]TdR掺入值升高,细胞凋亡率下降;培养上清LDH活性和MDA含量降低,SOD活性和Ap-ERK/AERK的比值升高。③分别加入δ阿片受体拮抗剂纳曲吲哚和ERK拮抗剂U0126,DADLE对上述指标的逆转作用被抑制。结论δ阿片受体激活对H2O2损伤的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与其增强心肌细胞的抗氧化功能及促进ERK磷酸化有关。     

盐酸强力霉素在几种溶剂体系中的溶解度测定

利用盐酸强力霉素在不同比例的乙醇—水溶剂中的溶解过程所出现pH值的改变,测定它在该溶液中的溶解度。把此数据与观察法、差重法所测得的数据相比较基本吻合,而以pH值法求得的较为准确。 盐酸强力霉素在乙醇—水溶剂中的溶解平衡为一级弱酸电离平衡。其溶解度随溶液中水组分的增加而增大,并随温度的升高而增大;在乙醇—盐酸溶液中用差重法测得的溶解度规律是随盐酸含量的增加,溶解度减小,温度升高溶解度增大;在盐酸—乙醇—水溶剂中,溶解度规律是随盐酸的含量增加,溶解度减小。     

冠心病患者血浆硫化氢含量变化

目的观察冠心病患者血浆硫化氢水平变化,探讨硫化氢在冠心病发病中的临床意义。方法选取冠心病患者45例,将其分为稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组和心肌梗死组,各15例;选择健康体检者15名为对照组。血浆硫化氢检测采用分光光度法检测。结果冠心病患者组血浆硫化氢水平为(37．08+10．36)μmol/L低于对照组的(50．98+6．23)μmol/L(P＜0．01);冠心病稳定型心绞痛、不稳定型心绞痛组和心肌梗死组血浆硫化氢水平分别为(47．73±3．87)μmol/L、(37．38±4．60)μmol/L、(26．87±7．56)μmol/L,各组间均有显著性差异(P＜0．01)。结论冠心病患者组血浆硫化氢水平与健康人对比相对较低,并与病变程度相关,而提示内源性硫化氢不足可能参与冠心病的病理过程。     

反向激动剂的药理效应特征

反向激动剂指一种新分类概念。与阻断激动剂效应的拮抗剂不同,反向激动剂产生的效应与激动剂相反。本文介绍了作用于H2受体,H3受体,μ-阿片受体,肾上腺素能β-受体,5-羟色胺受体反向激动剂的作用特征。反向激动剂有良好的临床应用前景。     

美沙酮、丁丙诺啡纳米碳管封装的分子模拟

目的模拟纳米碳管对美沙酮、丁丙诺啡有效成分C₂₁H₂₇NO和C₂₉H₄₁NO₄的吸入与俘获，探讨美沙酮、丁丙诺啡纳米碳管封装及其缓释、 长效药物开发的可能性。方法基于MM＋力场的传统分子动力学方法。结果 对于直径分别大于1或1.25 nm的开口碳管，C₂₁H₂₇NO或C₂₉H₄₁NO4分子在管口处的势能高于管中央，分子可主动进入碳管内；目前制备的单壁纳米碳管非常适合于封装美沙酮及丁丙诺啡。结论以纳米碳管为载体有望研发新的美沙酮与丁丙诺啡的缓释、长效戒毒药物。