应用MTT法进行体外抗肿瘤药敏试验影响因素研究

目的:探讨应用MTT法进行体外抗肿瘤药敏试验的影响因素,旨在建屯一种MTT法抗肿瘤药敏试验的规范化流程.方法:MTT法测定不同浓度人外周血单个核细胞(PBMC)对不同浓度的奥沙利铂与紫杉醇的敏感性,同时优化选择培养时间与MTT孵育时间.结果:在每孔PBMC为4.0×104(浓度为4.0×105/mL)、药物作用时间48h、MTT 20 μL作用6 h、单波长570 nm处测OD值时,药物对细胞的抑制率较高,试验效果较好.结论:规范化的MTT法体外抗肿瘤药敏试验为临床医生开展和实现个性化化疗提供了可靠的依据.     

四甲基偶氮唑蓝比色法测定促肝细胞生长素对SMMC-7721细胞的作用

目的:建立一种用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定促肝细胞生长素对SMMC-7721细胞的促生长作用,以测定其生物活性的方法。方法:在体外采用MTT法,观察促肝细胞生长素在不同浓度(6.2~800.0mg.L-1)及不同的培养时间(24,48,72h),对不同浓度SMMC-7721细胞(1.5~100.0)×103个.mL-1生长的影响作用,并考察了此方法的重复性、与对人胃癌MGC-830及结肠癌HT-29细胞相比较的特异性及与法定3H-TdR掺法比较的相关性。结果:MTT法测定结果表明,浓度为100mg.L-1的促肝细胞生长素在培养时间为48h时,对细胞浓度为2.5×104个.mL-1的SMMC-7721细胞促生长作用最明显(刺激指数SI值≥6.0),此方法重复性好,并对SMMC-7721细胞具有特异性,与3H-TdR掺法比较测定的SI值差异无显著性。结论:MTT法适用于促肝细胞生长素的活性测定。     

重组hIFN-α-2b-卡介苗激活杀伤细胞抗膀胱肿瘤作用的体外研究

目的:研究重组hIFN-α-2b-卡介苗(hIFN-α-2b-BCG)对人外周血单个核细胞(peripheralbloodmonocytes,PBMC)活化增殖,以及BCG激活杀伤细胞(bacilliCalmette-Guérinactivatedkillercell,BAK细胞)对膀胱肿瘤细胞的杀伤效应。方法:分别利用野生型BCG、野生型BCG 干扰素作为对照诱导活化PBMC,比较重组BCG对PBMC的活化增殖效应,采用噻唑兰比色分析法(MTT法),分别在不同时间点检测上述各成分对PBMC增殖活化效果;采用乳酸脱氢酶释放试验(LDH法)研究不同浓度重组BCG活化PBMC后对膀胱肿瘤细胞的不同杀伤效果。结果:MTT测定表明,重组BCG诱导PBMC活化增殖的能力明显强于同浓度的对照组刺激效果(P<0.05),且重组BCG在72h仍保持较强的活化能力;乳酸脱氢酶释放试验显示,不同浓度重组BCG诱导的BAK细胞抗癌效应均高于对照组诱导的抗癌效果(P<0.05)。结论:重组BCG对人PBMC具有较强的活化增殖作用,增强PBMC对肿瘤细胞的杀伤效应。     

沙利度胺的抗肝癌细胞株SMMC7721作用

目的 通过体外细胞培养研究沙利度胺(Tha)作用于肝细胞癌(HCC)细胞株 SMMC7721,探讨Tha抗HCC的作用机制.方法根据参考文献~([1]) 确定各组药物的最适作用浓度后,通过不同浓度Tha分别与HCC细胞SMMC7721体外培养,以MTT法检测细胞增殖活性,免疫组化法测血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果不同浓度、不同时间Tha组细胞抑制率比较,差异有统计学意义(P<0.01).不同浓度Tha组作用于SMMC7721细胞48 h后,VEGF蛋白表达和细胞凋亡率随浓度增高而增加(P<0.05).结论Tha是有效的辅助抗肝癌药物.     

刺梨提取物CL对胃癌细胞的抑制作用

目的观察刺梨提取物CL的体外抗肿瘤作用。方法采用溴化3-(4,5-二甲基噻唑2)-2,5-二苯基四氮唑蓝(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2.5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)检测法测定CL对胃癌-7901和MKN-45细胞的细胞毒性作用,台盼蓝排染法计数不同浓度药物作用下,不同时间点的活细胞数,绘制细胞生长曲线。结果MTT法检测显示,0.01μl·ml1～100μg·ml-1的CL 处理12～96h胃癌SGC-7901细胞和MKN-45细胞生长的抑制率均呈现剂量依赖性和时间依赖性, 细胞生长曲线显示:随CL浓度的升高曲线逐渐右移,且100μg·ml1的CL对SGC-7901细胞的生长曲线呈逐渐下降趋势。结论CL对胃癌7901和MKN-45细胞的体外生长具有一定的抑制作用,这种抑制作用均呈刺量依赖性和时间依赖性,提示CL有一定的体外抗肿瘤作用。     

脱氧野尻霉素衍生物抗乙型肝炎病毒的体外试验研究

目的:观察脱氧野尻霉素(DNJ)衍生物N—苄基—1—脱氧野尻霉素(P-DNJ)与N—壬基—1—脱氧野尻霉素(NN-DNJ)的体外抗乙型肝炎病毒(HBV)作用。方法:以HBVDNA转染的人肝癌细胞株HepG22,2,15细胞为靶细胞,以不同浓度的试验药物培养细胞,在第6天、第10天时应用时间分辨免疫荧光分析法和荧光实时定量聚合酶链反应法检测培养基上清液中HBsAg、HBeAg和HBVDNA,同时应用MTT法检测药物对细胞的毒性。结果:P-DNJ、NN-DNJ在试验浓度(5~125μg.mL-1)内未见细胞毒性作用,在浓度为125μg.mL-1时能显著减少细胞培养基上清液中HBsAg、HBeAg、HBVDNA的分泌。结论:P-DNJ、NN-DNJ在体外细胞培养试验中发现有抗HBV作用。     

蛇莓中齐墩果酸对肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用

目的:探讨蛇莓中齐墩果酸(OA)对人肝癌SMMC-7721细胞增值的抑制作用.方法:建立人肝癌SMMC-7721细胞体外培养模型.MTT法检测不同浓度OA对人肝癌SMMC-7721细胞的影响.结果:与对照组比较,药物组在24h对肝癌细胞具有明显的抑制作用(P<0.05),并在48h内随着浓度的增加,抑制率增加.结论:O...     

人绒毛膜促性腺激素对人PBMC产生MIF的影响

目的:探讨人绒毛膜促性腺激素(hCG)对人外周血单核细胞(PBMC)产生巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的影响.方法:分离正常人PBMC,体外加入不同浓度的hCG,在37 ℃ 5%CO_2条件下培养一定时间收获细胞或加入一定浓度的hCG,同样条件下培养,在不同时间收获细胞,用荧光定量PCR方法检测MIF mRNA转录水平.结果:在实验的hCG浓度范围内,MIF的转录水平随着hCG浓度增加而明显提高.在100 U/mL的hCG作用下,MIF mRNA表达在培养的1～2 h达到峰值,随后很快下降,至8 h基本回到刺激前水平.结论:hCG在一定浓度范围内有促进MIF mRNA转录的作用,且在本实验筛选浓度下,MIF mRNA转录水平与作用时间相关,提示hCG可通过促进PBMC分泌细胞因子参与一定的免疫调节作用.     

三磷酸腺苷生物发光法在白血病细胞株K562化疗药物敏感实验中应用探讨

目的:探讨三磷酸腺苷生物发光法(ATP-BLA法)在白血病细胞药敏实验中的可行性.方法:采用ATP-BLA法,用液体闪烁记数仪检测ATP标准品以及白血病细胞株K562在不同细胞浓度、药物浓度、培养时间下的荧光发光值.结果:ATP标准品浓度、K562细胞浓度的对数与荧光发光值的对数具极好的线性关系(P＜0.001);药敏实验时,结束细胞培养的时间以第4 d为宜,药物浓度的选择以1×PPC为最佳.结论:ATP-BLA法在白血病药敏试验中是可行的,有一定的临床应用价值,值得进一步研究.     

卡维地洛对人外周血单个核细胞CD25表达的影响

目的研究新型β受体阻滞剂卡维地洛(Car)对单个核细胞表达CD25的影响.方法分离外周血单个核细胞(PBMC),以PMA A23187作为刺激剂,分组体外培养.用MTT方法检测PBMC的活性;用流式细胞仪检测单个核细胞的凋亡率和CD25的表达水平.结果 (1)20 μmol以内的Car对PBMC没有毒性;(2)Car能显著抑制PBMC表达CD25,24 h时,浓度3组为(8.23±2.67)%,与对照组(30.73±4.10)%比较,差异有显著性(P＜0.01).结论 Car可以抑制PBMC表达CD25.这可能是卡维地洛治疗慢性心衰的机制之一.     

MTT法测定卵巢癌患者单药与联合用药的体外敏感性

目的:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定卵巢癌患者术后单药与联合用药体外敏感性,为临床个体化化疗方案的选择提供参考。方法:采用临床常用的20种化疗方案所用药物对18例卵巢癌患者的新鲜标本进行MTT法体外敏感性测定。结果:不同类型的卵巢癌及同一类型的不同个体对化疗药物的敏感性差异较大;联合用药较单一用药的平均抑制率高。结论:卵巢癌化疗敏感性个体差异大。MTT法是一种简便而快速的测定肿瘤体外药物敏感性的试验方法,可用于卵巢癌临床个体化化疗方案的选择。     

常用抗癌药物对肺癌的体外敏感性研究

目的 :研究常用抗癌药物对肺癌的体外敏感性。方法 :采用四氮甲唑蓝 (MTT)法检测45例人肺癌新鲜标本对15种临床常用化疗药物的敏感性。结果 :肺癌对卡铂、威猛、吡柔比星、顺铂、博来霉素、甲氨蝶呤、羟基喜树碱较敏感 ;不同个体对同一药物的敏感性不同。结论 :化疗药物的敏感性检测对临床选择化疗药物具有重要的参考价值 ,MTT法为临床肿瘤化疗的药物敏感性检测提供了简便、快速的实验方法。     

MTT法检测rhEGF生物活性

目的鉴于待测的生物活性因子均有适于其自身的最佳测定条件,规范了重组表皮生长因子(rhEGF)的MTT测定法。方法根据MTT测定法原理,在3个因素(每孔细胞数、MTT和胎牛血清浓度)及3个水平上进行了正交实验设计。结果MTT检测法的最佳条件是:Balb/c3T3细胞悬液(5×107cells·L-1)100μl·well-1,MTT(8g·L-1)20μl·well-1,FBS(1·5%)100μl·well-1。结论上述正交实验规范的MTT最佳实验条件,适用于Balb/c3T3细胞活性的检测及其药物抑制性实验。但在测定rhEGF生物活性时,为使对照孔细胞数保持在较低水平以便给生物活性因子留有适当的余地以显示其促细胞增殖活性,建议FBS浓度采用0·5%。     

用细胞培养检测抗肿瘤药物敏感性研究中改良MTT光吸收技术与[~3H]-TdR掺入法的比较

应用改良四甲基偶氮唑盐(MTT)光吸收检测法,在体外肿瘤细胞培养中测定肿瘤化疗药物敏感性,并与[~3H]-TdR 掺入法进行平行比较实验。结果表明,改良 MTT 光吸收检测技术具有简便、快速、敏感性强的优点。本法无需接触同位素,安全,经济,便于实验室开展应用。     

MTT法测定肿瘤细胞体外药物敏感性的临床应用

目的：评价 ＭＴＴ法测定肿瘤细胞体外药物敏感性的临床应用。方法：对７５例胃癌、５５例肠癌、５５例膀胱癌及６例舌癌进行肿瘤细胞分离、培养,以ＭＴＴ法对其体外药物敏感性进行检测。结果：对胃癌、肠癌、膀胱癌敏感度较高的药物与临床经验用药基本相符。７５例胃癌病人体外药敏结果和体内疗效总符合率为７７．３％,其中ＭＴＴ敏感组病人总有效率与经验化疗组相比有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。ＭＴＴ法对新药的临床应用也有较好的指导作用。结论：ＭＴＴ法对于临床合理用药,实现肿瘤病人的个体化化疗具有重要的价值。     

一种新的组织块培养肿瘤药敏试验法

[摘要]目的:建立一种简便、可靠、快速的肿瘤药敏试验新方法。方法：采用组织块培养、MTT染色和计算机图像分析法测定药物对肿瘤细胞的作用；测定加MTT后不同时间显色反应及非特异性染色以确定试验条件；对同一份标本进行3次试验以观察重复性；对人癌裸鼠移植瘤进行药敏试验以评价本试验鉴别敏感/耐药的能力；对127份临床肿瘤标本进行药敏试验，观察试验成功率。结果：加MTT反应时间以3h为合适，试验变异系数为9.4%，本试验可鉴别移植瘤的耐药性，对临床肿瘤标本试验成功率90.6%。结论：组织块培养、MTT染色和计算机图像分析的肿瘤药敏系统具有简便、可靠、快速的特点，可指导临床个体化肿瘤化疗。     

食管癌细胞对肿瘤化疗药物体外敏感性的测定

目的：测定食管癌细胞对肿瘤化疗药物的体外敏感性，寻找最佳化疗方案。方法：采用四氮唑盐（MTT）法，取18种化疗方案所用的药物对45例食管癌细胞进行体外敏感性测定。结果：不同个体的食管癌细胞对化疗药物的敏感性差异较大，联合用药较单一用药的平均抑制率高。结论：MTT法是一种简便而快速的测定肿瘤体外药物敏感性的试验方法，测定结果可用于食管癌临床个体化化疗方案的选择。     

多药耐药基因与体外药敏检测在急性白血病中的临床意义

目的：研究急性白血病（ＡＬ）多药耐药－１（ＭＤＲ１）基因表达与临床疗效的关系，提高对肿瘤细胞耐药情况预测的准确性。方法：采用逆转录敏－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了３０例ＡＬ患者骨髓中ＭＤＲ１基因的表达，同时对每例均进行体外化疗药物敏感性（ＴＭＭ）检测。结果：３０例ＡＬ ＭＤＲ１基因过度表达占４０％，ＭＴＴ检出耐药为３０％（１０／３０），即有ＭＤＲ１基因过量表达又显示耐药者２７％（８／３０）；     

rhIFN-a、rhIL-2与rhTNF-a体外协同抑制宫颈癌细胞的敏感性实验

目的:本研究旨在探讨干扰素-a(IFN-a)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子(TNF-a)单一、协同以及与化疗药物DDP的联合作用杀伤宫颈癌H e la细胞株的影响。方法:应用四M TT比色法检测与化疗药物DDP单独或联合应用组及药物作用的12h与24h的光密度值(OD),计算杀伤率。台盼蓝拒染计算杀伤率对照。结果:单独应用三种细胞因子时,IFN-a、TNF-a对宫颈癌H e la有细胞毒作用。IFN-a、IL-2、TNF-a联合作用具有协同作用,均与单一应用具有显著性差异(P<0.01)。细胞因子均可以增强顺铂(DDP)的抑瘤作用并与其作用的先后及时间具有依赖关系。结论:M TT比色法为临床肿瘤化疗的药物敏感性检测提供了简便、快速的方法。不同类型的肿瘤有着不同的药敏谱。干扰素-a(IFN-a)、肿瘤坏死因子(TNF-a)、白细胞介素-2(IL-2)与DDP联合具有协同作用,为宫颈癌病人化疗提供了理想的参考方案。     

大肠癌细胞对化疗药物的体外敏感性研究

目的利用噻唑蓝(MTT)比色法探讨大肠癌细胞对肿瘤化疗药物的体外敏感性。方法对36例患者的大肠癌组织进行体外培养,利用MTT法测定6种临床常用化疗药物的抑制率。结果 36例大肠癌试验中,化疗药物的敏感性从高到低依次为丝裂霉素(MMC)、顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、依托泊苷(VP-16)、奥沙利铂(L-OHB)、阿霉素(ADM)。其中18例结肠癌试验中,化疗药物的敏感性从高到低依次为MMC,DDP,5-FU,VP-16,L-OHB,ADM;18例直肠癌试验中,化疗药物的敏感性从高到低依次为MMC,DDP,5-FU,L-O-HB,VP-16,ADM。结论对于大肠癌,MMC,DDP,5-FU的敏感性较高,可作为首选药物;对于结肠癌和直肠癌,也有相似的规律性。