钙蛋白酶抑制剂对缺血-再灌注心肌肌浆网钙泵功能及其蛋白水平的影响

目的研究钙蛋白酶抑制剂ALLN对缺血-再灌注(I-R)大鼠心肌肌浆网钙泵(SERCA)功能的影响。方法 24只雄性SD大鼠随机分为正常灌注组(对照组)、I-R组、ALLN+I-R组和二甲亚砜+I-R组(DMSO+I-R组),分别检测再灌注15min时冠状动脉流出量(CF)和冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;荧光分光光度计测定荧光强度来反映钙蛋白酶活性;分别采用改良p-NPP法和Millipore过滤技术测定SERCA的活性和ATP依赖的SERCA45Ca2+摄取率,免疫印迹法检测心肌细胞SERCA蛋白表达水平。结果与I-R组相比,ALLN+I-R组CF、SERCA蛋白表达水平、SERCA的活性和45Ca2+摄取率显著增高(P<0.01),而LDH漏出量和钙蛋白酶活性显著降低(P<0.01)。结论 ALLN对离体大鼠心脏I-R损伤有保护作用,与其抑制钙蛋白酶活性,一定程度减轻I-R损伤对SERCA功能及蛋白表达水平的影响有关。     

Ca~(2+)/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ信息通路在DPDPE长时程作用的NG108-15细胞中的作用

目的　观察阿片类依赖时Ca2 + /钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ (CaMKⅡ )信息通路的变化 ,以及Ca2 + /CaMKⅡ信息通路与cAMP水平之间的关系。方法　以NG10 8 15细胞作为体外的细胞模型 ,分别采用竞争性蛋白结合法及放射免疫法、PDE法、γ 3 2 P参入法以及RT PCR测定cAMP水平、钙调蛋白 (CaM)活性、CaMKⅡ活性和mDOR的mRNA表达水平的变化。结果　DPDPE长时程作用NG10 8 15细胞 ,cAMP水平升高 ,形成阿片依赖 ;细胞CaM活性和CaMKⅡ活性也升高 ,该升高可被CaM拮抗剂W 7所抑制 ,而CaMKⅡ活性的升高可被CaMKⅡ特异性抑制剂KN 6 2所抑制。W 7或KN 6 2可抑制阿片依赖导致的细胞cAMP水平的升高。阿片依赖时 ,加入纳洛酮诱发戒断 ,CaM活性、CaMKⅡ活性进一步增高。而在阿片依赖时 ,δ阿片受体的mRNA表达水平无明显变化。结论　Ca2 + /钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ信息通路可通过调节cAMP水平参与阿片依赖的机制。     

β-AR/PKA/CaMK Ⅱ信号通路在阿霉素诱导大鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的基于β肾上腺素受体信号通路探讨阿霉素诱导心衰发展过程中心肌细胞凋亡的分子生物学机制。方法SD大鼠70只,随机分为对照组(CON组,n=30)和阿霉素组(ADR组,n=40)。ADR组腹腔注射阿霉素,每次3 mg·kg~(-1),连续两周内每隔两天注射1次,共注射5次,累积总量为15 mg·kg~(-1)。于实验第2、4和6周分别观察实验大鼠一般状况和心功能,并取血清,ELISA法测定血清BNP和cTnT浓度。取心脏组织,HE、Masson和TUNEL染色观察病理形态学改变和凋亡,Western blot法检测β1-AR、β2-AR、PKA、CaMKⅡ等蛋白表达的变化。结果阿霉素注射完成后,ADR组EF和SV明显降低,血清BNP和cTn-T明显高于CON组,心脏明显萎缩,并伴随较轻心肌纤维化和凋亡,β1-AR、PKA、CaMKⅡ蛋白表达均降低。随着时间的延长,心脏收缩功能有所恢复,但BNP和cTn-T继续升高,心肌纤维化和凋亡严重,β1-AR表达进一步降低,β2-AR表达未见明显变化,PKA、CaMKⅡ表达逐渐升高。结论阿霉素诱导的心功能障碍、心肌重塑和凋亡动态改变过程可能与β-AR/PKA/Ca MKⅡ信号通路变化有关。     

钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂对心房肌细胞钙超载的影响

目的 探讨钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(ealmodulin-dependent protein kinase II,CaMKII)抑制剂KN93对大鼠心肌细胞钙超载及CaMKII蛋白表达的影响.方法 培养大鼠心房肌细胞原代细胞,应用钙离子导入剂ionomyein(1.0 μmol/L)诱导心肌钙超载模型,KN93(0.25、0.5、1.0 μmo/L)作用下,Fluo-3/AM负载心房肌细胞,激光共聚焦显微镜观察心房肌细胞的收缩频率及细胞游离[Ca2+]i的动态变化,计算平均钙瞬变幅度;采用Western blot法检测CaMKⅡ表达水平.结果 KN93可抑制ionomyein诱导的心肌细胞钙超载,且其抑制率与KN93呈剂量依赖关系,KN93可使心房肌细胞CaMKⅡ表达下降.结论 CaMKII抑制剂KN93可纠正ionomyein诱发的大鼠心房肌细胞的钙超载,并下调细胞CaMKⅡ表达水平.     

H2S减少H2O2诱发H9c2心肌细胞内质网应激的机制研究

目的 探讨硫化氢(H2S)减少过氧化氢(H2O2)诱发H9c2心肌细胞内质网应激的作用机制.方法 H2O2 150 μmol/L诱发制备H9c2心肌细胞内质网应激模型后分为三组,A组为模型对照组,B组和C组分别采用硫氢化钠25 μmol/L和S-炔丙基半胱氨酸25 μmol/L处理;另设空白对照(D)组.CCK-8法检测细胞生存率,Hoechst染色法检测凋亡细胞,荧光分析法检测Caspase-12活性,Western blot检测转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)、免疫球蛋白结合蛋白(BiP)、钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)、受磷蛋白(PLN)和心肌肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)表达,免疫共沉淀法检测CaMK Ⅱ与PLN以及SERCA2a与PLN的结合.结果 A组细胞存活率低于D组,而B组和C组高于A组(P＜0.05).A组凋亡细胞数多于D组,而B组和C组均少于A组(P＜0.05).A组 Caspase-12活性、PLN 磷酸化水平、CHOP、BiP、CaMK Ⅱ 以及 CaMK Ⅱ与PLN结合表达均高于D组,B组和C组则均低于A组(P＜0.05).A组SERCA2a与PLN结合的表达低于D组,B组和C组则均高于A组(P＜0.05).结论 H2S可以通过CaMK Ⅱ/PLN/SERCA2a途径减少内质网应激,对H2O2诱导的心肌细胞损伤发挥保护作用.     

慢性氯化铝染毒对大鼠大脑皮层内钙稳态影响

目的研究铝对大鼠大脑皮层细胞内游离钙([Ca2 ]i)质量浓度的影响,探讨铝的神经毒性的机制。方法应用248.7、74.7和37.3 mg/kg AlCl3对Wistar大鼠经口灌胃染毒,分别在染毒45、75和120 d和染毒结束后30 d处死大鼠,取脑分离大脑皮层。将荧光染料Fura-2/AM与皮层细胞一起孵育,应用荧光分光光度计测定[Ca2 ]I质量浓度。应用Western Blot方法测定各组大鼠脑皮层中钙调蛋白(CaM)和钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达情况。结果在染毒45、75和120 d时,74.7 mg/kg剂量组大鼠[Ca2 ]i质量浓度为(273.8±91.2)(、308.0±96.9)和(453.0±90.5)nmol/L,均显著高于对照组(P<0.05);染毒120 d时,高剂量组大鼠大脑皮层[Ca2 ]i质量浓度为(445.5±68.8)nmol/L,显著高于对照组(P<0.01);染毒结束后30 d,各染毒组大鼠大脑皮层[Ca2 ]i质量浓度高于对照组大鼠,但差异无显著性(P>0.05)。染毒457、5和120 d时,各染毒组大鼠大脑皮层中CaM表达与对照组相比均减少。各染毒组大鼠大脑皮层中CaMKⅡ表达与对照组相比,在不同染毒时期内均有不同程度上升。结论AlCl3可以增加皮层神经细胞内[Ca2 ]i质量浓度,同时引起CaM表达减少和CaMKⅡ表达增加,可见铝可使神经细胞内钙稳态失调而发挥神经毒作用。     

果糖二磷酸钠对大鼠心肌缺血的防治作用及其机制

目的　研究口服果糖二磷酸钠对异丙肾上腺素致大鼠心肌缺血时心肌细胞的凋亡及对心肌细胞肌浆网钙泵活性的影响。方法　在大鼠皮下注射异丙肾上腺素造成的心肌缺血坏死模型上 ,同时给予果糖二磷酸钠灌胃 ,观察心肌病理变化 ,以缺口末端标记法 (TUNEL)及免疫组化法检测心肌凋亡细胞、心肌细胞Fas、Bcl 2基因蛋白表达的变化 ,及应用 p 硝苯基磷酸法测定心肌细胞肌浆网钙泵活性变化 ,应用原子吸收法测定心肌钙含量。结果　应用异丙肾上腺素可导致明显的心肌缺血坏死及纤维化 ;缺血心肌组织中心肌细胞凋亡指数及Fas、Bcl 2基因蛋白表达量增加 (P <0 0 1) ,同时心肌细胞肌浆网钙泵活性降低 (P <0 0 5 )而心肌的钙含量却升高 (P <0 0 5 )。应用果糖二磷酸钠灌胃治疗能明显减轻心肌坏死及纤维化 (P <0 0 1) ,降低心肌组织细胞的凋亡 (P <0 0 5 )、心肌组织Fas基因的蛋白表达 (P <0 0 5 )及上调Bcl 2基因的蛋白的表达 (P <0 0 5 ) ;而且可以部分恢复心肌细胞肌浆网的钙泵活性 (P <0 0 5 ) ,降低心肌钙含量 (P <0 0 5 )。结论　口服果糖二磷酸钠可以保护由儿茶酚胺增多所引起的心肌缺血损伤 ,其机制与其能恢复心肌细胞肌浆网上的钙泵活性 ,调节心肌细胞的钙代谢紊乱 ,并抑制心肌缺血引起的细胞凋亡有关     

慢性铝染毒对大鼠海马细胞内[Ca2+]i和CaMKⅡ蛋白表达的影响

目的通过进一步研究慢性铝暴露引起大鼠海马细胞内[Ca2 ]i和钙调蛋白激酶激酶Ⅱ(CaMⅡ)蛋白表达的变化,来探讨铝损害学习记忆的作用机制。方法选择断乳后Wistar大鼠,以含有不同浓度AlCl3的水进行饲养。3个月后,取海马测定细胞内[Ca2 ]i,用Western blotting方法检测CaMKⅡ的蛋白表达。结果(1)各染铝组的[Ca2 ]i与对照组比较明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),但各染铝组间差异无统计学意义;(2)各染铝组CaMKⅡ蛋白表达与对照组比较也显著降低,并成剂量关系,差异有统计学意义(P<0.01)。结论铝能够降低大鼠海马细胞内的[Ca2 ]i浓度并造成CaMKⅡ的蛋白表达降低,从而损伤学习记忆功能。     

三七总皂甙对吗啡戒断大鼠海马组织CaMK Ⅱ活性及CaMK Ⅱ α亚基蛋白表达的影响

目的:研究三七总皂甙(Panax notoginseng,PNS)对吗啡戒断大鼠海马组织CaMK Ⅱ活性及CaMK Ⅱα亚基蛋白表达的影响,探讨PNS抑制吗啡戒断症状的作用机制。方法:应用剂量递增法建立大鼠吗啡躯体依赖模型(MOR组),采用腹腔注射(ip)纳洛酮建立催促戒断模型(NAL组),大鼠在给予吗啡的同时,采用3种不同剂量PNS(100、200、400mg·kg-1)进行灌胃(ig)。应用放射酶法测定CaMK Ⅱ活性,Western blot方法检测CaMK Ⅱα亚基蛋白表达。结果:(1)MOR组CaMK Ⅱ活性降低,CaMK Ⅱα亚基蛋白表达升高;(2)NAL组CaMK Ⅱ活性和CaMK Ⅱα亚基蛋白表达均显著升高;(3)PNS可以剂量依赖性地抑制纳洛酮催促戒断所引起CaMK Ⅱ活性和CaMK Ⅱα亚基蛋白的升高。结论:PNS可能通过抑制纳洛酮催促戒断所引起的CaMKⅡ活性和CaMK Ⅱα亚基蛋白表达的升高来缓解大鼠吗啡戒断症状。     

钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN-93加重大鼠离体心脏钙超载损伤

目的观察钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)抑制剂KN-93对大鼠离体心脏钙超载损伤的影响。方法采用Langendorff装置进行离体心脏灌流,利用钙反常现象诱发胞内钙超载。32只SD♂大鼠随机分为正常对照组、药物KN-93对照组、钙反常组和KN-93处理组。实验全程记录左心室内压的变化,以左心室舒张末压(LVEDP)和发展压(LVDP)评价心功能,于不同时间点收集冠脉流出液,并测定乳酸脱氢酶(LDH)的含量。实验结束后,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色检测心肌梗死面积的变化。结果与正常对照组相比,KN-93(2.5μmol·L~(-1))对正常心脏的左室功能、冠脉流量和心肌梗死面积没有明显影响(P>0.05);与正常对照组相比,钙反常组在复钙灌注结束时LVEDP抬升、LVDP降低,梗死面积达(18±7.2)%,冠脉流量减少,LDH含量增加(P<0.01);KN-93(2.5μmol·L~(-1))处理组与钙反常组相比,心肌梗死面积为(90±4.8)%,LVEDP进一步升高,LVDP消失,冠脉流量明显减少,LDH含量明显增多(P<0.01)。结论 CaMKⅡ抑制剂KN-93加重急性钙超载引起的心肌损伤,这一作用可能与影响CaMKⅡ活性有关。     

Ca^2＋／钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ信息通路通路在DPDPE长时程作用的NG108—15细胞中的作用

目的：观察阿片类依赖时Ca^2 ／钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ)信息通路的变化，以及Ca^2 /CaMKⅡ信息通路与cAMP水平之间的关系。方法：以NG108－15细胞作为体外的细胞模型，分别采用竞争性蛋白结合法及放射免疫法，PDE法，γ-^32P参入法以及RT－PCR测定cAMP水平，钙调蛋白（CaM)活，DPDPE长时程作用NG108－15细胞，cAMP水平升高，形成阿片依赖；细胞CaM活性和CaMKⅡ活性也升高，该升高可CaM拮抗剂W－7所抑制，而CaMKⅡ活性的升高可被CaMK Ⅱ特异性抑罅剂KN－62所抑制。W－7或KN－62可抑制阿片依赖导致的细胞cAMP水平的升高，阿片依赖时，加入纳洛酮诱发戒断，CaM活性CaMKⅡ活性进一步增高，而在阿片依赖时，δ阿片受体的mRNA表达水平无明显变化。结论：Ca^2 ／钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ信息通路可通过调节cAMP水平参与阿片依赖的机制。     

银杏叶提取物对D-半乳糖诱导心肌细胞老化的肌浆网钙摄取及SERCA活性的影响

目的 探讨银杏叶提取物EGB76l对D-半乳糖诱导的心肌细胞老化肌浆网钙摄取能力及肌浆网Ca2+-ATP 酶(SERCA)活性的影响.方法 实验分正常对照组(C组)、D-半乳糖组(5g/L)(A组)、D-半乳糖+EGB76l组(B组).用荧光钙离子指示剂 Fura-2/AM,激光共聚焦显微镜(LSCM)测定心肌细胞肌浆网钙摄取能力及改良的p-NPP法测定SERCA活性.结果 与C组相比,A组心肌细胞舒张期钙离子浓度明显升高(0.71±0.08 vs.0.59±0.06)(P＜0.05);舒张期钙离子回摄时间明显延长[(1000.95士129.34)ms vs(775.15士121.68)ms](P＜0.05);咖啡因刺激后,钙离子增幅明显减少(0.11±0.02 vs.0.53±0.19)(P＜0.05),细胞内SERCA活性明显降低.与A组相比,B组舒张期钙离子浓度明显降低,舒张期钙离子回摄时间明显缩短;咖啡因刺激后,钙离子瞬变增幅明显增高,细胞内SERCA活性明显提高.结论 银杏叶提取物EGB761对D-半乳糖诱导老化的心肌细胞肌浆网钙摄取功能和SERCA活性有一定程度的提高.     

芪苈强心胶囊通过PI3K/AKT/GSK3β信号通路延缓氧化应激损伤心肌细胞线粒体途径凋亡

目的探讨芪苈强心胶囊对氧化应激损伤心肌细胞线粒体途径凋亡的作用及机制。方法动物实验:通过结扎SD大鼠左冠状动脉前降支建立心梗后慢性心力衰竭(慢性心衰)大鼠模型,按分组分别灌胃给予芪苈强心超微粉(QLQX)或生理盐水4周。彩超检测心功能,ELISA法及荧光法检测血清乳酸脱氢酶(LDH)释放水平、活性氧(ROS)表达水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,TUNEL检测心肌细胞凋亡率,Western印迹法测凋亡相关蛋白表达水平及信号通路相关因子p-AKT/AKT和p-GSK3β/GSK3β表达相对比。细胞实验:使用H9c2心肌细胞给予或不给予QLQX或PI3K抑制剂LY294002,然后暴露于H2O2中共孵育24 h,MTS检测H9c2细胞生存活性,检测LDH和ROS表达水平及SOD活性,QRT-PCR法检测血红素氧合酶(HO-1)和过氧化氢酶(CAT)mRNA表达水平。流式细胞术测H9c2细胞凋亡率,Western印迹法测凋亡相关蛋白及信号通路相关因子蛋白表达水平。同时评估线粒体分裂、线粒体通透性转运孔(m PTP)开放和线粒体膜电位(MMP)水平。结果动物实验结果显示,与假手术组相比,模型组大鼠血清LDH和ROS水平显著增加,SOD活性降低(P<0.01);心肌细胞凋亡率明显增加,促凋亡蛋白Bax、细胞色素c、凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)、活化胱天蛋白酶9、活化胱天蛋白酶3蛋白表达水平升高(P<0.01);Bcl-2蛋白表达水平、p-AKT/AKT及p-Gsk3β/Gsk3β蛋白表达相对比降低(P<0.01),心功能下降(P<0.01)。给予不同剂量QLQX后均不同程度降低心衰大鼠血清LDH释放水平和ROS表达水平,升高SOD活性(P<0.05);抑制心肌细胞凋亡率及促凋亡蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达、p-AKT/AKT和p-GSK3β/GSK3β相对比,提高心衰大鼠心功能(P<0.05)。细胞实验结果显示,与H2O2组相比,QLQX促进H2O2损伤H9c2心肌细胞24 h后细胞增殖,抑制LDH释放水平和ROS表达水平,升高SOD活性、HO-1及CAT mRNA表达水平(P<0.01);抑制H9c2细胞凋亡率,下调上述促凋亡蛋白表达水平,上调Bcl-2蛋白表达、p-AKT/AKT及p-Gsk3β/Gsk3β相对比(P<0.01)。同时,QLQX抑制H2O2损伤H9c2细胞线粒体分裂、mPTP开放及MMP下降(P<0.01)。然而,QLQX改善氧化应激诱导H9c2心肌细胞线粒体损伤及凋亡作用可被PI3K抑制剂LY294002阻断。结论 QLQX可能通过激活PI3K/AKT/Gsk3β通路延缓氧化应激损伤心肌细胞线粒体依赖性凋亡。     

反复重度低血糖对糖尿病大鼠海马PKA/PKC/CaMKⅡ磷酸化信号通路的影响

目的：观察2型糖尿病大鼠在诱发反复重度低血糖时海马组织中蛋白激A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)、钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)磷酸化信号通路相关蛋白水平变化,探讨其在认知功能损害中的作用。方法：将大鼠随机分为4组：对照组(CON)、糖尿病组(DM)、反复重度低血糖组(G↓)和糖尿病反复重度低血糖组(DM G↓)。采用STZ法建立2型糖尿病大鼠模型;对照组(CON)、糖尿病组(DM)给予生理盐水,反复重度低血糖组(G↓)和糖尿病反复重度低血糖组(DM G↓)给予普通胰岛素连续注射4天使呈反复重度低血糖状态（<2.0mmol/L）。western blot 法检测各组大鼠海马组织PKA/PKC/CaMKⅡ磷酸化信号通路相关蛋白翻译后磷酸化的表达水平。结果：与正常组(CON)相比,糖尿病反复重度低血糖组(DM G↓)大鼠海马区磷酸化PKA蛋白表达水平增高（P<0.05）,其上游ERK磷酸化水平也增高（P<0.05）;而PKC、CaMKⅡ信号通路的相关蛋白表达,差异无统计学意义（P>0.05）;与糖尿病组(DM)、反复重度低血糖组(G↓)相比,糖尿病反复重度低血糖组(DM G↓)大鼠海马区PKA、PKC、CaMKⅡ相关蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论：糖尿病诱发反复重度低血糖的情况下,PKA磷酸化水平发生明显改变,提示可能与重度低血糖致脑损伤和认知功能障碍相关联。PKA磷酸化表达变化可能可以作为敏感生化指标。     

黄芪苷Ⅳ对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌细胞肥大的保护作用

目的研究黄芪苷Ⅳ(astragalosideⅣ,AST)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导新生大鼠心肌细胞肥大的保护作用并探讨其作用机制。方法AngⅡ刺激新生大鼠心肌细胞,制备心肌细胞肥大模型,分别用AST10mg·mL-1和20mg·mL-1进行预防性治疗。检测心肌细胞直径及细胞总蛋白含量,测定心肌细胞[Ca2+]i、肌浆网钙泵(SERCA)活力和钙调神经磷酸酶(CaN)活性。结果AngⅡ组细胞直径增大,总蛋白含量增加,与对照组相比差异有显著性(P<0.01);AST10mg·mL-1和20mg·mL-1能够降低心肌细胞肥大程度(P<0.05或P<0.01)、[Ca2+]i(P<0.01)及CaN活性(P<0.05或P<0.01)、提高SERCA活力(P<0.01)。结论AST对AngⅡ诱导心肌细胞肥大有明显的保护作用,可能与其降低[Ca2+]i、提高心肌SERCA活力及降低CaN活性有关。     

辛伐他汀抑制心肌细胞Rho A、Rho GTPase表达对心室肥厚的影响

目的 探讨辛伐他汀对心力衰竭模型兔抑制心肌肥厚、改善心功能的影响及机制.方法 24只新西兰白兔,均分四组.除假手术组外,通过破坏主动脉瓣和缩窄腹主动脉,增加左心室前、后负荷,建立慢性心力衰竭模型;术后(除心衰对照组)早干预组(即起,连续8周)和晚干预组(第5周起,连续4周)予辛伐他汀每天5 mg/kg灌胃,实验结束取心肌细胞,Westem-blot检测细胞膜Rho A蛋白表达,[γ~-~(32)P]电泳分析Rho GTPase活性;实验前、结束时均行超声心动图检查.结果 心衰对照组室间隔厚度(LVSd)、左心室舒张期内径(LVIDd)、左心室后壁厚度(LVPwd)、左心室收缩期内径(LVIDs)、心脏重量(Hw)、左心室重量(LVW)、心脏/体重(HW/BW radio)、左心室/体重(LVW/BW radio)明显高于假手术和早、晚干预组(P<0.05,P<0.01);左室射血分数(EF)、左室长轴缩短率(FS)明显低于假手术组和早、晚干预组(P<0.05,P<0.01);心肌细胞膜Rho A蛋白表达、Rho GTPase活性明显高于假手术组和早、晚干预组(P<0.01).结论 辛伐他汀可抑制细胞膜RhoA蛋白表达、Rho GTPase活性,从而抑制心肌肥厚、改善心功能.     

精-甘-天冬-丝氨酸对脓毒性休克大鼠心肌肌浆网钙转运的影响(英文)

目的:探讨一种人工合成的纤维蛋白原降解肽片段RGDS对脓毒性休克大鼠心肌肌浆网钙转运功能的影响。方法:大鼠盲肠结扎穿孔术后4h和14h分两次尾静脉注射RGDS 5μmol·kg~(-1)。制备大鼠心肌肌浆网(SR)膜;测定SR Ca~(2 )摄取和[~3H]ryanodine受体结合功能。结果:RGDS组大鼠心肌SR摄Ca~(2 )率及摄Ca~(2 )量分别较休克组提高104％(P<0.01)和12％(P<0.05),而心肌SR钙释放通道-[~3H]ryanodine受体结合B_(max)和K_d值没有明显变化。同时RGDS还可以减轻休克大鼠心肌组织钙聚积。结论:RGDS提高休克大鼠心肌SR Ca~(2 )摄取功能,维持心肌细胞钙稳态,具有心肌保护作用。     

κ-阿片受体激动对异丙肾上腺素诱导的乳大鼠心肌细胞肥厚的抑制作用

目的通过观察选择性κ-阿片受体(κ-OR)激动剂U50488H抑制异丙肾上腺素(Iso)诱导乳大鼠心肌细胞肥厚的作用及其对细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)瞬变及钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响,研究κ-OR激动抑制Iso诱导的大鼠心肌细胞肥厚的信号传导机制。方法以体外培养的乳大鼠心肌细胞为模型,应用β肾上腺素受体激动剂Iso10μmol.L-1诱导心肌肥大,观察U50488H1μmo.lL-1的作用,并进一步探讨在CaMKⅡ特异性抑制剂KN930.2μmol.L-1,普萘洛尔2μmol.L-1及L-钙通道阻滞剂维拉帕米1μmol.L-1存在情况下,κ-OR的激活对心肌肥厚的作用。用Lowry法检测心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;[3H]亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白的合成;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化;用Western蛋白印迹法测定CaMKⅡδB表达。结果Iso10μmol.L-1使心肌细胞总蛋白含量、体积和蛋白合成明显增加,U50488H1μmol.L-1抑制Iso诱导的心肌肥大,且抑制程度与KN930.2μmol.L-1,普萘洛尔2μmol.L-1及维拉帕米1μmol.L-1相似,在KN93存在的情况下,U50488H抑制Iso诱导的心肌肥大作用增强;U50488H能降低Iso引起的心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化升高;Iso能明显增强心肌细胞内CaMKⅡδB的表达,U50488H能降低其表达。结论κ-OR激动剂U50488H可能通过降低心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化和减少心肌细胞内CaMKⅡδB的表达,抑制Iso诱导的乳大鼠心肌细胞肥厚。     

遗传性癫痫大鼠海马组织Ca~(2+)/Ca_V1.2/CaM/CaMKⅡ信号通路的异常变化

目的研究遗传性癫痫大鼠(tremor,TRM)海马组织电压门控性L型钙离子通道α1C亚单位(CaV1.2)、钙调蛋白(CaM)、钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的变化情况。方法应用West-ern blot法与免疫荧光双标法检测TRM海马CA1、CA3和DG区CaV1.2、CaM和磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)的蛋白表达及分布;激光共聚焦显微镜检测TRM海马组织中[Ca2+]i。结果与正常Wistar大鼠相比,TRM海马组织中CaV1.2和CaM的蛋白表达明显升高(P<0.01),而p-CaMKⅡ的蛋白表达明显下降(P<0.01);免疫荧光双标法结果显示:CaV1.2、CaM、p-CaMKⅡ在CA1、CA3区的锥体细胞和DG区的颗粒细胞群表达丰富,同时CaV1.2与CaM、p-CaMKⅡ与CaM在海马各区域均存在共定位;激光共聚焦显微镜检测TRM海马细胞[Ca2+]i明显增强(P<0.01)。结论Ca2+/CaV1.2/CaM/CaMKⅡ通路的异常变化可能参与遗传性癫痫大鼠的癫痫发生与发展。     

褪黑素对吗啡戒断大鼠脑内CaM和CaMKⅡ活性的影响

目的 :观察褪黑素对吗啡戒断大鼠海马和脑干内CaM及CaMKⅡ活性的影响。方法 :以剂量递增法连续 5d皮下注射吗啡建立吗啡依赖大鼠模型 ,分别用流式细胞术和放射酶法检测脑内CaM及CaMKⅡ的活性变化。结果 :(1)与对照组比较 ,吗啡依赖大鼠海马和脑干内钙调蛋白活性明显升高 (P <0 .0 1) ,而CaMKⅡ活性则显著降低 (P <0 .0 5 )。纳洛酮催促戒断后海马和脑干内CaMKⅡ活性明显高于吗啡依赖大鼠 (P <0 .0 1) ,但钙调蛋白相对活性无显著变化 (P >0 .0 5 ) ;(2 )与吗啡依赖组比较褪黑素可使吗啡戒断大鼠海马和脑干内CaM及CaMKⅡ的活性明显降低 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 :褪黑素对吗啡依赖大鼠戒断综合征的抑制作用可能与MT降低脑干和海马内CaM及CaMKⅡ活性有关。