环腺苷酸对脑胶质瘤细胞诱导分化的实验研究

目的：探讨环腺苷酸（cAMP）对大鼠神经胶质瘤细胞C6的诱导分化作用。方珐：C6细胞经不同浓度的cAMP诱导后，应用MTT分析法、软琼脂克隆形成、电镜检测、流式细胞仪、GFAP免疫组化染色及TUNNEL染色等法，检测C6细胞的分化及凋亡情况。结果：0．2mmol／L cAMP即可诱导C6细胞分化，表现为增殖抑制、细胞突起增长增多、G1期阻滞、GFAP高阳性表达、线粒体增多．细胞核变小等。且有浓度依赖关系，10mmol／L cAMP可诱导出现凋亡。结论：cAMP可明显抑制C6细胞增殖、诱导细胞分化甚至凋亡。     

苯丁酸钠对人脑胶质瘤细胞的诱导分化作用

目的评价新药苯丁酸钠对胶质瘤细胞的诱导分化作用，为胶质瘤诱导分化相关基因研究作前期准备。方法 采用MTT法，软琼脂克隆形成率，形态学，流式细胞术，GFAP免疫荧光等方法鉴定分化程度，用划痕实验检测细胞运动能力的改变。结果 2mM苯丁酸钠即可明显诱导人脑胶质瘤低分化细胞株SHG-44-9的细胞分化，表现为增殖抑制，克隆形成能力丧失，细胞突起增长，G1期阻滞，GFAP表达量升高，细胞运动能力下降。结论 苯丁酸钠可以高效诱导人脑胶质瘤细胞分化，并使细胞运动能力下降，有可能发生分化相关基因表达改变。     

丁酸钠诱导人脑胶质瘤细胞系SHG-44凋亡的初步探讨

目的:研究短链脂肪酸盐丁酸钠对培养人脑胶质瘤细胞系SHG-44的增殖抑制和凋亡诱导.方法:通过细胞体外培养的方法,以2mmol/和4mmol/L丁酸钠处理SHG-44细胞,用MTT比色试验和PCNA免疫组化染色观察细胞增殖,电子显微镜、线粒体跨膜电位(△ψm)检测以鉴定细胞凋亡.结果:①SHG-44细胞增殖受到明显抑制,PCNA表达减弱;②4mmol/L丁酸钠明显诱导SHG-44细胞凋亡,电镜下可见细胞膜内陷自行分割包裹碎裂的核片段和部分胞浆,脱离细胞主体,形成凋亡小体;罗丹明123染色示凋亡细胞△ψm下降.结论:丁酸钠能抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞的增殖,4mmol/L丁酸钠能诱导SHG-44细胞发生线粒体途径凋亡.     

丁酸钠对人脑胶质瘤细胞系SHG-44增殖分化的影响

目的 研究丁酸钠对培养人脑胶质瘤SHG-44细胞的增殖抑制和分化诱导。方法 以2mmol／L丁酸钠处理SHG-44细胞，用MTT比色、核仁组成区银染观察细胞增殖抑制，用流式细胞术、电镜观察超微结构、免疫组织化学染色、凝集试验鉴定细胞分化。结果 SHG-44细胞经丁酸钠处理后：①细胞增殖受到明显抑制，并具有时间、剂量依赖性；②细胞周期受阻，S期细胞比例减少；③电镜观察发现细胞核变规则，异染色质增多，胞浆中线粒体、粗面内质网等细胞器增多并趋于正常；④胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein，GFAP)表达增强，改型蛋白(Vimentin)表达减弱；⑤细胞凝集度明显变低。结论 丁酸钠能抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞的增殖，2mmol／L丁酸钠能诱导SHG-44细胞发生明显分化。     

人脑胶质瘤细胞对诱导分化药物敏感性的研究

目的 优选人脑胶质瘤细胞诱导分化剂。方法 应用MTT法、形态学、GFAP免疫荧光等方法鉴定环己亚甲基二乙酰胺、二甲基甲酰胺、丁酸钠、二丁酰环AMP、苯乙酸钠、苯丁酸钠、亚砷酸钠等7种诱导剂对人脑胶质瘤细胞系SHG－44的诱导分化效果。结果 亚砷酸钠、苯乙酸钠抑制肿瘤细胞增殖效果较差，苯丁酸钠、二丁酰环AMP、丁酸钠在1－2mM即可明显诱导人脑胶质瘤细胞分化，表现为增殖抑制，胸突增长，GFAP表达升高现象。结论 人脑胶质瘤细胞对诱导分化剂苯丁酸钠、二丁酰环AMP和丁酸钠较为敏感，值得深入研究。     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷联合苯丁酸钠对人结肠癌细胞HT29的抑制作用

目的:探讨DNA甲基化抑制剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2dC)联合组蛋白脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(SPB)的抗肿瘤效应及其机制。方法:将HT29细胞分为:对照组、SPB(1mmol/L)处理组、5-aza-2dC(10μmol/L)处理组、5-aza-2dC(10μmol/L)+SPB(1mmol/L)处理组。MTT法测定各处理组细胞的生存曲线,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率和细胞周期。结果:生长曲线结果提示:5-aza-2dC和SPB均能抑制HT29细胞的生长增殖,但差异不明显,联合应用后,细胞增殖得到明显抑制;流式细胞术检测细胞凋亡结果显示:SPB、5-aza-2dC、SPB+5-aza-2dC处理HT29后,细胞凋亡率分别为11.32%、20.25%和42.37%,三者比较有统计学差异(P<0.05);细胞周期分布检测显示:与对照组相比,单用SPB处理细胞,细胞周期分布变化不明显,5-aza-2dC处理细胞后,59.02%的细胞周期阻滞在G1期,而SPB联合5-aza-2dC后,S期细胞比例明显减少,G1期细胞比例可达73.7%,4组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:5-杂氮-2′-脱氧胞苷联合苯丁酸钠可通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞发挥抗肿瘤作用。     

全反式维甲酸对C6胶质瘤细胞增殖分化的影响

目的:研究全反式维甲酸对C6胶质瘤细胞增殖和分化的影响.方法:用5 mg/L全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)诱导C6胶质瘤细胞,通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验绘制细胞生长曲线以考察ATRA对细胞增殖的抑制作用;通过流式细胞仪、光镜、透射电镜和免疫组织化学染色鉴定细胞的分化状况.结果:C6胶质瘤细胞经全反式维甲酸诱导后,细胞增殖受到明显抑制,并且密度明显减少(P<0.01).细胞周期受阻,G0/G1期延长,S期细胞比例明显减少(P<0.01).光镜观察到诱导前的C6胶质瘤细胞呈正常的成纤维细胞形态,而诱导后的C6胶质瘤细胞变细长,中间呈圆形或卵圆形,两端形成长尖突起.流式细胞仪的凋亡率检测显示,未见明显的凋亡;透射电镜观察显示,细胞有早期凋亡改变,且胞浆内空泡增多,线粒体和内质网丰富,细胞结构基本趋向正常.C6胶质纤维酸性蛋白表达明显增强.结论:全反式维甲酸能抑制胶质瘤细胞的增殖,并能诱导C6细胞分化.     

丙戊酸钠增强大鼠胶质瘤C6细胞放射敏感性的体外实验

目的 观察丙戊酸钠(VPA)对C6胶质瘤细胞系的体外放射增敏性,为治疗胶质瘤提供实验依据.方法 体外常规培养C6胶质瘤细胞,采用不同浓度(0、0.25、0.5、1、2、4 mmol/L)的VPA,作用于C6胶质瘤细胞不同时间(24、48、72 h)后,MTT法检测C6胶质瘤细胞增殖抑制率,选择合适的作用浓度和作用时间;0.5 mmol/L VPA作用C6胶质瘤细胞后,分别给予不同剂量(0、2、4、6、8Gy)的X射线,克隆形成实验观察其对C6胶质瘤细胞的放射增敏作用;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测不同浓度VPA对C6胶质瘤细胞凋亡率的影响;实验分为对照组、药物组、照射组及联合组,实时定量PCR法检测各组凋亡基因Bcl-2及Bax mRNA的表达.结果 VPA对大鼠胶质瘤C6胶质瘤细胞具有增殖抑制作用,且呈浓度、时间依赖性,不同浓度、时间之间比较,差异有统计学意义(P＜0.05);VPA在0.5 mmol/L浓度时,对C6胶质瘤细胞毒性较低,且可增加X射线对C6胶质瘤细胞的杀伤作用,放射增敏比为1.30;VPA能够诱导C6胶质瘤细胞凋亡,并且凋亡率随浓度的增高而升高,各浓度之间比较差异有统计学意义(P＜0.05);VPA对C6胶质瘤细胞的凋亡作用,在转录水平可下调Bcl-2表达,同时上调Bax的表达.结论 VPA对大鼠胶质瘤C6胶质瘤细胞具有增殖抑制作用,且呈浓度、时间依赖性.低浓度的VPA对C6胶质瘤细胞毒性较低,但可增加X射线对C6胶质瘤细胞的杀伤作用,其放射增敏机制与直接抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、调节凋亡相关基因的表达有关.     

丁酸钠对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的作用

目的: 观察丁酸钠对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的作用。方法: 以1、2.5、5mmol/L丁酸钠处理Eca-109细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,透射电镜观察细胞凋亡的形态,四甲基噻唑氮蓝法检测抑制细胞增殖率,TUNEL法检测细胞凋亡率。结果: Eca-109细胞经丁酸钠处理后:光镜下观察细胞变小、变圆,部分从培养瓶壁上脱落下来;电镜下细胞核体积缩小,染色质浓缩聚集于核膜处;细胞增殖受到明显抑制,1、2.5、5mmol/L丁酸钠处理24h、48h和72h后,细胞生长抑制率分别是13.38%、34.15%、39.02%,14.04%、33.33%、46.49%和31.11%、40.74%、48.15%,与低浓度组比较差异有统计学意义(P<0.05~P<0.01);2.5mmon/L丁酸钠处理24h组与阴性对照组细胞凋亡率分别是5.5%和1.6%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论: 丁酸钠可抑制食管癌Eca-109细胞增殖、促进凋亡,且呈浓度和时间依赖性。     

苯丁酸钠联合奥沙利铂对结肠癌细胞HT29的凋亡作用

目的:探讨苯丁酸钠(SPB)联合奥沙利铂(L-OHP)诱导HT29细胞的凋亡作用及其机制。方法:结肠癌HT29细胞分为空白对照组、奥沙利铂组、苯丁酸钠(1 mmoL/L)+奥沙利铂组、苯丁酸钠(2 mmoL/L)+奥沙利铂组,MTT法测定各组细胞存活率,流式细胞仪检测凋亡率;Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3和核转录因子NK-κB的表达。结果:苯丁酸钠能降低奥沙利铂诱导的HT29细胞存活率,随着其浓度增高,细胞凋亡率逐渐升高(P<0.01),细胞中Caspase-3蛋白和NK-κB蛋白表达则逐渐降低(P<0.05),均呈浓度依赖性。结论:苯丁酸钠(SPB)联合奥沙利铂(L-OHP)可诱导HT29细胞凋亡,其机制可能与抑制Caspase-3和NK-κB信号传导通路有关。     

2-甲氧基雌二醇对大鼠神经元及C6胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol，2-ME)对大鼠神经元及C6胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法：将神经元及C6胶质瘤细胞分为对照组和实验组，实验组按2-ME浓度不同分为1、5、10、15μmol/L 4个亚组。2-ME作用于大鼠神经元及C6胶质瘤细胞不同时间后，采用MTT法检测细胞活性，流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期，并在光镜及电镜下观察其形态学变化。结果：C6胶质瘤细胞经2-ME作用后细胞活性受到抑制，呈现时间变量依赖性，各亚组与对照组差异具有统计学意义(P<0.05)。2-ME可诱导C6胶质瘤细胞凋亡，各亚组与对照组差异具有统计学意义(P<0.05)；可使C6胶质瘤细胞G₁及S期细胞减少，G₂期细胞增多，一定范围内呈现剂量依赖性，各亚组与对照组差异具有统计学意义(P<0.05)。神经元经药物作后，各亚组与对照组细胞活性差异无统计学意义。结论：2-ME可抑制C6胶质瘤细胞生长，诱导C6胶质瘤细胞凋亡，而对正常神经元无影响。     

蛋白酶体抑制剂MG-132对体外C6胶质瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠C6胶质瘤细胞体外增殖抑制和诱导凋亡作用。方法：分别以不同浓度（10、20和50 μmol•L^-1）的MG-132培养C6胶质瘤细胞,通过MTT法检测不同培养时间细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,HE染色、AO/EB染色以及透射电镜观察细胞形态学变化。结果：MTT法检测显示10 μmol•L^-1MG-132作用于C6胶质瘤细胞24、48和72 h后,细胞增殖A值(0.46±0.03、0.48±0.03和0.45±0.02)均显著低于正常对照组（P<0.01）,且随浓度增加其抑制作用逐渐增强;10μmol•L^-1 MG-132作用C6胶质瘤细胞12 h后即可经流式细胞仪检测到明显的凋亡亚二倍体峰,以不同药物浓度（10、20和50 μmol•L^-1）处理C6胶质瘤细胞12 、24 和48 h后其细胞凋亡率均显著高于正常对照组（P<0.01）;形态学检查呈现凋亡细胞的特征。结论：蛋白酶体抑制剂MG-132在体外可显著抑制大鼠C6胶质瘤细胞增殖并诱导其发生凋亡。     

阿托伐他汀抑制脑胶质瘤细胞的增殖和促进凋亡：基于上调miR-146a表达与抑制PI3K/Akt信号通路

目的 探究阿托伐他汀（AVT）对人脑胶质瘤细胞生物学行为的影响及其对miR-146a/PI3K/Akt信号通路的作用。方法 将人脑胶质瘤细胞U251分为4组：对照组（Conrtrol）、AVT组、AVT+转染miR-146a无关片段组（AVT+miR-146a NC）、AVT+转染miR-146a干扰组（AVT+miR-146a inhibitor）。Control组不加任何药物,AVT组加入8.0 μmol/L 的AVT,AVT+miR-146a NC组转染miR-146a NC后加入8.0 μmol/L 的AVT,AVT+miR-146a inhibitor组转染miR-146a inhibitor后加入8.0 μmol/L 的AVT。RT-PCR检测miR-146a表达,MTT检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移情况,Western blot检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达。结果 药物干预48 h,与Control组相比,AVT组细胞miR-146a表达、细胞凋亡率均明显升高（P<0.01）,细胞增殖率、侵袭指数、迁移指数、p-PI3K和p-Akt蛋白表达均明显降低（P<0.01）。与AVT组相比,AVT+miR-146a inhibitor组细胞miR-146a表达、细胞凋亡率均明显降低（P<0.01）,细胞增殖率、侵袭指数、迁移指数、p-PI3K 和p-Akt蛋白表达均明显升高（P<0.01）,AVT+miR-146a NC组上述指标无显著性差异（P>0.05）。结论 AVT能够抑制人脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡,其机制与上调miR-146a表达,抑制PI3K/Akt信号通路相关。     

氯化三乙基锡对体外培养大鼠C6胶质瘤细胞的增殖抑制作用

目的：探讨氯化三乙基锡（TETC）对体外培养大鼠C6胶质瘤细胞的增殖抑制作用及其机制,为胶质瘤治疗提供实验依据。方法：采用MTT法检测0.5、1.0和2.0 μmol/L TETC对大鼠C6胶质瘤细胞作用24和48 h后细胞增殖抑制率,采用Hoechest33258染色荧光显微镜观察0.5、1.0和2.0 μmol/L TETC作用48 h后 C6胶质瘤细胞核的形态学变化,采用流式细胞术(FCM)检测0.5、1.0和2.0 μmol/L> TETC作用48 h后 C6胶质瘤细胞周期和凋亡。结果：0.5、1.0和2.0 μmol/L TETC在体外可抑制C6胶质瘤细胞增殖,24 h抑制率分别为7.92％、9.51％和19.03％;48 h抑制率分别为15.62％、36.16％和41.92％,存在剂量依赖性和时间依赖性上升趋势,48 h抑制率在各剂量组间及各剂量组与对照组间比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）。荧光显微镜显示TETC作用C6胶质瘤细胞48 h后,细胞呈现核浓缩和碎裂的凋亡形态学改变。1.0和2.0 μmol/L TETC作用C6胶质瘤细胞48 h后,G₀/G₁期细胞比例明显高于对照组（P<0.05）,S期细胞比例明显低于对照组（P<0.05
）,细胞凋亡比例明显高于对照组（P<0.05）。结论：TETC对大鼠C6胶质瘤细胞有增殖抑制作用,通过细胞周期阻滞及诱导凋亡可能是TETC抑制C6胶质瘤细胞增殖的作用机制。     

青藤碱对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞体外增殖及凋亡的影响

目的 观察青藤碱(sinomenine, SN)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes, FLS)凋亡及增殖的影响,为青藤碱在临床上的应用提供实验依据.方法 光镜和荧光显微镜观察FLS形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT比色法检测SN对FLS生长的抑制作用.结果 光镜及荧光显微镜下可见核固缩,变圆,荧光染色增强等凋亡形态学变化.流式细胞仪结果显示,随着SN浓度及作用时间的增加,被处理的FLS的凋亡率增加,未处理组与各处理组比较差异具有显著性(P＜0.05),其中3.2 mmol/L浓度的SN作用48 h对FLS凋亡影响最为显著.MTT结果显示,加入不同浓度SN(2.8～3.2 mmol/L),培养的FLS24 h、48 h后对增殖的抑制水平显著高于未处理组,与凋亡率呈现正相关(r=0.787, P＜0.05).结论 SN在一定浓度及作用时间内可抑制RA患者FLS增殖,诱导凋亡,这可能是SN治疗RA机制之一.     

丁酸钠对胃癌细胞系生长的抑制作用及其机制

目的:观察丁酸钠(NaB)对体外培养的胃癌细胞系BGC823的生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法:应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V-FITC染色法检测细胞凋亡率。结果:不同浓度NaB处理胃癌细胞BGC82324~96h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈浓度(P<0.01)及时间(P<0.05)依赖性;1.0,3.0,5.0mmol/L NaB处理72h后,BGC823细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低(P<0.01);各浓度组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01)。结论:NaB对胃癌细胞系BGC823具有生长抑制作用,其机制与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。     

逆转录酶抑制剂对恶性胶质瘤细胞端粒酶活性和细胞增殖的影响

目的研究逆转录酶抑制剂（AZT）对胶质瘤细胞端粒酶活性、细胞增殖和细胞周期的影响，为以端粒酶为靶点治疗脑胶质瘤提供理论和实验依据。方法采用MTT法检测AZT对细胞生长增殖的影响。用TRAP—PCR—ELISA法检测端粒酶活性的变化。用流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果与对照组比较，12h后1．0mol／L AZT组的端粒酶活性降低（P〈0.05），24h时0.5mol／L AZT组细胞生长增殖受抑制（P〈0．05），1．0mol／L AZT组则呈现出显著性差异（P〈0．01），在实验范围内，呈时间一剂量依赖性。实验组细胞周期中各时相的细胞分布发生改变，0．5mol／L AZT组细胞多阻滞于G2／M期，而1．0mol／L AZT组细胞G1期增多，S期细胞数减少。结论逆转录酶抑制剂能够有效地抑制胶质瘤细胞的端粒酶活性，抑制细胞的增殖，参与了细胞周期及凋亡的调控，具有较好的应用前景。