罕见淋巴结窦组织细胞增生伴嗜血综合征1例

患者男,16岁,因"发现左腹股沟包块九月余,间断发热7个月"入院。入院查体:一般情况差,重度贫血貌,皮肤黏膜无出血点,左腹股沟区可见巨大肿块,大小约20 cm×24 cm,上界至脐水平,下界至左大腿上段水平,外侧至髂前上棘,内侧达脐中线,质硬,有压痛。右侧腹股沟可触及多个肿大淋巴结,边界尚清,活动尚可,无压痛,余浅表淋巴结未扪及肿大。心肺肝脾检查无明显异常。左下肢活动受限,左脚踝部凹陷性水肿。入院检查:血液分析:WBC 4.8 g/L,RBC0.83 T/L,HGB 26 g/L,PLT 201 g/L。肝肾功、电解质无明显异常,胆红素代谢及凝血功能轻度异常。血球     

异种移植抗原α-gal介导人血清杀伤A549细胞的实验研究

背景与目的人体α-1,3半乳糖基转移酶(α-1,3Galactosy ltransferase,α-1,3GT)基因功能失活而不表达α-半乳糖基(α-galactosyl,α-gal)表位,但天然存在着大量抗α-gal抗体,异种器官移植研究结果提示,在人肿瘤细胞上重新表达异种移植抗原α-gal,可能诱发类似于宿主抗移植物超急性排斥反应的抗肿瘤效应。本研究通过基因导入手段,建立稳定表达异种移植抗原α-gal的转基因人肺癌细胞系,探讨α-gal介导的人血清抗肿瘤的可能性及其机制。方法将前期成功构建的α-1,3GT基因真核表达质粒pEGFP-N1-GT瞬时转染人肺腺癌细胞A549,筛选并建立稳定的转基因细胞系A549-GT。MTT增殖实验和显微镜观察转基因细胞生物学特性变化;RT-PCR检测A549-GT中α-1,3GT基因mRNA表达;荧光素标记的凝集素(FITC-BS-IB4lectin)染色检测α-1,3GT在肿瘤细胞表面合成α-gal的能力;A549-GT细胞及其培养基分别与正常人细胞共培养,检验α-1,3GT基因的稳定性和酶活性的稳定性;人血清结合实验检测A549-GT与IgM和补体C3结合情况。结果RT-PCR检测到转基因细胞系A549-GT中有α-1,3GTmRNA表达。荧光显微镜和流式细胞术检测结果显示:A549-GT能够长期稳定表达异种移植抗原α-gal表位;A549-GT与其亲本细胞在生长形态及增殖速度上无明显差异;A549-GT细胞及其培养基分别与正常人胚肺成纤维细胞MRC-5共培养均不能使MRC-5获得α-gal合成能力;经人血清处理后,荧光免疫实验观察到转基因细胞系A549-GT能与血清抗体IgM结合并诱导补体C3结合。结论异种移植抗原α-gal在肿瘤细胞上的重新表达,可能通过补体依赖的细胞毒机制,介导类似于异种器官移植排斥反应的抗肿瘤效应。     

奈达铂联合5-氟尿嘧啶治疗晚期宫颈癌的护理体会

宫颈癌标准治疗方案是放疗辅以铂类为基础的化疗[1],我科采用奈达铂联合5-氟尿嘧啶治疗宫颈癌,取得了满意结果,现将护理体会报道如下.     

基于GEO数据库的EGFR或KRAS突变型非小细胞肺癌耐药基因表达谱分析

目的 通过对相关数据库数据分析,探究NSCLC中EGFR和KRAS突变与耐药基因表达的关系,以及对患者生存和预后的影响.方法 对NCBI中GEO数据库中的数据集数据进行表达量分析、生存分析和相关性分析.结果 ①研究分析表明,ABCC1、GSTP1、MGMT1和RRM1基因在NSCLC组织中存在明显的高表达(P<0.0001;P<0.0001;P=0.0014;P<0.0001);而ERCC1和TUBB3基因表达差异没有统计学意义(P=0.3922;P=0.4583).②在KM组中,TUBB3、ABCC1和XPA基因存在明显的高表达(P=0.0169;P=0.033;P=0.0165),而在EM组中只有ABCC1存在明显的高表达(P=0.0002).③在KM组中ABCC1和XPA的表达情况呈正相关(P=0.025,γ=0.4992);而它们与TUBB3的表达情况呈负相关(P=0.0075,γ=-0.5789;P=0.0012,γ=-0.6696).④ABCC1和TUBB3的高表达会导致肺癌患者的总生存率和无复发生存率明显降低.结论 在NSCLC中EGFR或KRAS基因的突变会导致部分相关耐药基因的差异表达,这些差异表达的基因之间存在相关性,而且对患者的生存及预后又具有重要影响.     

iRNA沉默Chk1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响及其作用机制的探讨

目的 探讨siRNA沉默检测点激酶1（Chk1）基因对乳腺癌细胞MCF 7增殖和周期的影响及其作用机制。方法 采用RNAi技术将乳腺癌细胞MCF 7中Chk1基因沉默,用Western blotting检测转染前后MCF 7细胞中Chk1蛋白表达情况;采用MTT比色法和流式细胞术分析Chk1基因沉默对乳腺癌细胞MCF 7增殖和周期的影响。结果 Chk1 siRNA转染后,MCF-7细胞中Chk1蛋白表达下降约82％,明显低于未转染组和脂质体转染组（P＜0.05）。Chk1 siRNA转染组转染48h的MCF-7细胞增殖活性下降,其增殖抑制率为44.7％,明显高于脂质体转染组的5.26% （P＜0.05）。流式细胞仪检测显示,Chk1 siRNA转染组G2／M期比例为（11.3±0.7）％,明显低于未转染组（44.2±1.9）％和脂质体转染组（45.3±2.1）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论 siRNA沉默Chk1基因可明显抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖,并且其抑制增殖作用与减弱G2／M期阻滞有关。     

ITGAV在非小细胞肺癌中的表达及其与放射抵抗的关系

目的 探讨ITGAV的表达与NSCLC细胞放射敏感度的关系。方法 使用生物信息学方法分析ITGAV在NSCLC组织中的表达水平及其与NSCLC患者预后的相关性。克隆形成实验验证放射抵抗细胞与亲本细胞的放射敏感度差异，Western blot检测ITGAV的表达。Western blot、qRT-PCR验证si-ITGAV转染效率，选用最佳ITGAV干扰序列转染A549R、H1299R细胞。克隆形成实验、流式细胞术检测ITGAV干扰后对细胞克隆形成、凋亡和周期情况的影响。结果 ITGAV在非小细胞肺癌组织中表达水平明显高于正常组织（P<0.05），且其高表达与患者不良预后有关。ITGAV干扰组细胞在4、6、8 Gy射线照射克隆形成能力与阴性对照组相比显著降低（均P<0.05）。经6 Gy照射后，ITGAV干扰组细胞的凋亡率增加（PH1299R<0.0001, PA549R=0.0002），G2/M期细胞比例明显高于阴性对照组（PH1299R<0.0001, PA549R=0.0007）。结论 干扰ITGAV表达可以增加非小细胞肺癌放射敏感度。     

人端粒酶催化亚单位启动子驱动的EGFP真核表达载体的构建及在肺癌细胞的表达

目的：构建人端粒酶催化亚单位（hTERT）启动子驱动的增强绿色荧光蛋白（EGFP）真核表达载体，研究其调控EGFP在肿瘤细胞中的靶向表达。方法：从含hTERT启动子序列的重组质粒pGL3-hTERTp上，酶切获取约1100bv的启动子片段，克隆至无启动子的EGFP质粒载体pEGFP-1的多克隆位点中，构建pEGFP-hTERTp真核表达载体。用含有巨细胞病毒（CMV）启动子的质粒pEGFP—N1作为阳性对照，pEGFP-1作为阴性对照，脂质体转染法分别转染人肺癌细胞95D，NCI—H446，A2，A549，LTEP—a-2，YTMLC和人正常细胞MRC-5，荧光显微镜下观察各细胞中EGFP转录表达情况。结果；双酶切和单酶切均显示载体pEGFP—hTERTp构建成功。细胞转染结果显示：在转染了pEGFP-hTERTp质粒的肺癌细胞中EGFP都有不同程度的表达，而在MRC-5中无EGFP表达；转染pEGFP-N1的肺癌细胞和正常细胞中均可清晰地观察到EGFP强荧光表达。结论：hTERT启动子能调控EGFP在肺癌细胞中靶向性转录表达。CMV启动子调控的EGFP在肺癌细胞和正常细胞中的表达不具有特异性。hTERT启动子有可能作为肿瘤靶向性基因治疗的调控元件。     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷联合苯丁酸钠对人结肠癌细胞HT29的抑制作用

目的:探讨DNA甲基化抑制剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2dC)联合组蛋白脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(SPB)的抗肿瘤效应及其机制。方法:将HT29细胞分为:对照组、SPB(1mmol/L)处理组、5-aza-2dC(10μmol/L)处理组、5-aza-2dC(10μmol/L)+SPB(1mmol/L)处理组。MTT法测定各处理组细胞的生存曲线,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率和细胞周期。结果:生长曲线结果提示:5-aza-2dC和SPB均能抑制HT29细胞的生长增殖,但差异不明显,联合应用后,细胞增殖得到明显抑制;流式细胞术检测细胞凋亡结果显示:SPB、5-aza-2dC、SPB+5-aza-2dC处理HT29后,细胞凋亡率分别为11.32%、20.25%和42.37%,三者比较有统计学差异(P<0.05);细胞周期分布检测显示:与对照组相比,单用SPB处理细胞,细胞周期分布变化不明显,5-aza-2dC处理细胞后,59.02%的细胞周期阻滞在G1期,而SPB联合5-aza-2dC后,S期细胞比例明显减少,G1期细胞比例可达73.7%,4组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:5-杂氮-2′-脱氧胞苷联合苯丁酸钠可通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞发挥抗肿瘤作用。     

稳定表达猪α1,3-半乳糖苷基转移酶基因的人肺腺癌细胞系的建立和鉴定

目的 建立稳定表达中国近交系版纳微型猪(BMI)α1,3-半乳糖苷基转移酶基因(α1,3-GT)和α-半乳糖基(Gala1-3Galb1-4GlcNAc-R,α-gal)的人肺癌细胞株,为进一步研究人体血清经补体依赖的细胞毒性作用杀伤表达异种移植抗原的肿瘤细胞提供细胞模型.方法 将含有版纳微型猪α1,3-GT基因的pEGFP-CMV-GT质粒经脂质体法体外转染人肺腺癌细胞A549,G418筛选稳定表达的细胞克隆并扩增,命名为A549-GT.用RT-PCR检测A549-GT中α1,3-GT基因的mRNA表达,荧光显微镜和流式细胞仪检测α1,3-GT在细胞膜表面合成α-gal表位的能力以及A549-GT与人血清中IgM和补体C3结合情况.检测转染细胞形态学、生长增殖能力以及裸鼠成瘤性等生物学特征.结果 经G418反复筛选获得了稳定转染α1,3-GT基因的A549-GT的细胞系,该细胞中检测到α1,3-GT mRNA和α-gal表达.A549-GT传代至今已2年,α-gal表达的阳性细胞达80.1%±3.2%.A549-GT细胞能与人血清中的IgM结合并有补体C3沉积.其生物学特性与亲代A549细胞相比未发生变化.结论 成功获得持续稳定表达猪α1,3-GT和α-gal的细胞系A549-GT,为该基因在后续肿瘤免疫治疗中的研究提供有用的细胞研究模型.