利用DNA指纹图谱技术对健康女性阴道菌群多样性的分析

目的:利用DNA指纹图谱技术——变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)分析我国育龄期及绝经期健康女性阴道菌群多样性,为了解各种下生殖道感染疾病状态下的微生态环境奠定基础,为研制适合恢复中国女性正常阴道微生态环境的微生态制剂提供依据。方法:选取2009年10月至2010年1月在北京大学第一医院妇产科门诊常规体检的健康女性(其中育龄期30例、绝经后30例)为研究对象。采集阴道分泌物,提取细菌总DNA,采用通用引物对细菌16S rDNA基因的V3区进行扩增,将PCR产物进行变性梯度凝胶电泳,通过对DGGE特征条带切胶回收并进行克隆测序,利用GenBank中的Blast与已知序列比对,鉴定细菌菌种,分析不同生理状态下阴道菌群的多样性。结果:(1)我国育龄期健康女性阴道常见菌种为:卷曲乳杆菌(Lactobacilluscrispatus)、惰性乳杆菌(Lactobacillus iners)和加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri),其中惰性乳杆菌是以往通过传统培养方法尚未认识到的阴道优势菌种。(2)绝经期健康女性阴道菌种与育龄期不同且复杂,常见菌种有:惰性乳杆菌、卷曲乳杆菌、大肠杆菌(Escherichia coli)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、解没食子酸链球菌(Streptococcusgallolyticus)、韦荣球菌属(Veillonella sp.)、中间链球菌(Streptococcus intermedius)、咽颊炎链球菌(Streptococcus angi-nosus)、普雷沃氏菌属(Prevotella sp.)、气球菌(Anaerococcus lactolyticus)和脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)。结论:通过DGGE分析发现我国育龄期健康女性阴道常见优势菌种为:卷曲乳杆菌、惰性乳杆菌、加氏乳杆菌;绝经期健康女性阴道常见优势菌种为:惰性乳杆菌、卷曲乳杆菌、大肠杆菌、链球菌属、普雷沃菌属、脆弱拟杆菌以及产乳酸的韦荣球菌、气球菌属,并首次发现在不同生理状态下惰性乳杆菌均是阴道优势菌种之一。     

幽门螺杆菌感染对小鼠食道下端菌群的影响

目的通过小鼠动物模型,检测幽门螺杆菌感染后食道下端菌群的变化,探讨其与食道下端疾病发生的关系。方法将30
只BALB/C小鼠随机均分为阴性对照组和感染组。感染组通过灌喂幽门螺杆菌菌液建立动物感染模型,两组小鼠均在末次灌
喂菌液4周后同时处死,取食道下端组织提取细菌的DNA,以原核生物16S rDNA V6区通用引物采用聚合酶链反应-变性梯度
凝胶技术（PCR-DGGE）对V6区进行扩增,用Quantity-One 1-D Analysis software.对DGGE图谱进行菌群分析,并将DGGE图
谱上的组间差异条带用16S rDNA V6区引物分别扩增后,DNA测序,BLAST比对分析。结果DGGE指纹图谱分析显示,实验
组DNA条带数量极显著高于对照组（P<0.01）,多样性指数、丰富度指数均显著高于对照组（0.01好地在相似性系统树中分开,主成分分析不同组的菌群分别聚集在不同的位置,BLAST比对分析感染组出现特有细菌。结论
食道下端定植着以乳杆菌、拟杆菌为优势菌的稳定菌群,幽门螺杆菌感染后菌群结构变化为以葡萄球菌、不动杆菌、无芽胞杆菌
为优势菌的菌群。
     

PCR-变性梯度凝胶电泳技术分析肺炎儿童下呼吸道菌群多样性

目的：初步探讨PCR-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)检测肺炎儿童下呼吸道菌群多样性的作用。方法收集10份培养阳性的患儿肺泡灌洗液2~5 mL,经细菌DNA提取、16S rDNA-PCR后进行变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析,对优势条带进行测序。结果经培养10份标本中7份鉴定为一种菌感染,3份培养出两种病原菌;经PCR-DGGE分析8份标本出现多条明显条带,2份得到一条条带,共筛选出12个优势条带;DGGE法得到的细菌种类多于培养法。结论 PCR-DGGE可较好地鉴定混合细菌感染性肺炎病原菌并能检测到培养法没有检出的细菌;儿童肺炎主要以肺炎链球菌、大肠埃希菌、草绿色链球菌等病原菌为主。     

不同16S rDNA通用引物对DGGE进行牙周微生物群落分析的影响

目的初步评价不同的16S rDNA片段对变性梯度凝胶电泳(DGGE)进行牙周微生物群落分析结果的影响。方法选取3种牙周主要可疑致病菌的标准菌株,通过构建质粒DNA分别获得16S rDNA V3区、V3～V5区和V6～V8区片段,测序鉴定并进行BLAST验证;将测序正确的质粒DNA经DGGE分离和硝酸银染色后获得条带图谱。结果由3对通用引物扩增得到的DGGE图谱并不相同。V3区引物获得的并非单一条带,且不同菌株间没有识别度;V3～V5区和V6～V8区的图谱显示:3种菌株的DNA片段均得到了单一条带,且区分性较好。结论 16S rDNA V3～V5区和V6～V8区的两对引物可用于龈下菌群多样性的研究。     

PCR-DGGE结合测序在检测混合细菌感染中的价值

目的探讨变性梯度凝胶电泳（Denaturinggradientgelelectrophoresis,DGGE）结合测序在检测混合细菌感染中的作用,为细菌多重感染的诊断提供新的思路。方法以3份临床培养鉴定为混合感染的胆囊穿刺引流液为对象,提取细菌总DNA并扩增16SrDNA-V3区,后进行DGGE分析,将所得条带切胶纯化再扩增,扩增产物进行测序及BLAST比对,比较比对结果与临床培养结果的一致性。结果DGGE可以很好地分离16SrDNA-V3区混合PCR产物,每一个扩增子的测序比对结果与临床培养结果一致。结论PCR-DGGE结合测序的方法可以很好地鉴定临床混合感染标本中的病原茵,可作为快速检测方法在临床应用。     

负荷试验CT灌注成像结合HIF1α、MMP2及VEGF评价大鼠C6胶质瘤侵袭力

 目的 探寻负荷试验CT灌注成像中可以无创评估神经胶质瘤侵袭性的影像学生物标志物。方法 取20只雄性大鼠随机分为4组,其中3组分别在原位种植C6胶质瘤10、14、18天后行CT灌注成像,1组注射生理盐水作为对照。在乙酰唑胺负荷前后进行CT灌注,收集并分析各项灌注生物标志物。再取各组鼠脑开展病理学检验,进行缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor-1 α,HIF1α）、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）免疫组织化学染色。结果 乙酰唑胺负荷后脑血流量（cerebral blood flow,CBF）、脑血容量（cerebral blood volume,CBV）和表面通透性（surface-permeability,PS）明显高于负荷前;随肿瘤种植天数的增加,CBF、CBV和PS百分比变化率随之降低,尤其是18天组与对照组之间比较：对照组分别为119.5%±21.2%、125.6%±9.0%、816.2%±116.4%,而18天组分别为54.6%±2.0%、24.5%±4.3%、4.5%±0.8%;HIF1α、MMP2及VEGF阳性率和CBF、CBV、PS百分比变化率之间呈显著负相关（P均 < 0.01）。结论 负荷试验CT灌注成像的影像学生物标志物CBF、CBV和PS百分变化率可以无创评价大鼠C6胶质瘤的侵袭性。     

广西钦州市桶装饮用水铜绿假单胞菌污染状况及影响因素

目的 了解钦州市桶装饮用水铜绿假单胞菌污染状况,为保障饮水安全提供科学依据。方法 在钦州市各经销商购买未开封的桶装水作为监测组,在不同场所中选定261台饮水机,并分别采集经饮水机冷水口、未经饮水机的桶装水作为对照组,进行饮水机加热试验,同时开展问卷调查,按照GB 4789.3-2016、GB 8538-2016分别检测大肠菌群和铜绿假单胞菌。结果 监测组和对照组样品均未检出大肠菌群,铜绿假单胞菌检出率分别为0（0/50）、26.4%（69/261）,对照组不同场合铜绿假单胞菌检出率差异无统计学意义（P>0.05）,不同清洗时间、不同换水频次、不同加热温度,铜绿假单胞菌检出率差异有统计学意义（P<0.05）。结论 钦州市桶装饮用水使用过程中受到不同程度铜绿假单胞菌污染和二次污染,存在饮水安全隐患。建议加强宣传教育,正确使用饮水机,完善相关法规、加大监管等以降低食品安全风险。     

饮水中地塞米松污染对小鼠肠道菌群的影响

目的探讨水环境地塞米松污染对小鼠肠道菌群的影响。方法将20只Balb/c小鼠随机分为对照组和实验组,每组5只。
实验低剂量组灌喂含0.035 ng地塞米松磷酸钠的饮用水,中剂量组为0.225 ng、高剂量组为2.25 ng,对照组灌喂不含地塞米松磷
酸钠的饮用水。每日观察小鼠行为、皮毛、大便等的变化。灌喂第36 d 处死小鼠,取回盲部组织提取细菌基因组DNA,扩增
16S rDNA V6可变区,扩增产物变性凝胶梯度电泳（DGGE）后分析。切取DGGE图谱上的优势条带,扩增、纯化后克隆测序,其
序列BLAST比对分析。结果各实验组小鼠均出现性情暴躁、斗殴打架、咬断尾部等现象。DGGE图谱聚类分析表明各组小鼠
回盲部均具有较稳定的菌群;主成分分析表明各组的优势菌群存在一定差异;菌群多样性分析表明,与对照组相比,低剂量组菌
群的种类和数量明显增加（P<0.05）;中、高剂量组种类和数量显著增加（P<0.01）。16S rDNA V6区序列分析显示实验组和对照
组具有共有菌属15种、差异菌属2种,优势菌种类和比例发生了改变。对照组有乳杆菌属的细菌定植,而中、高剂量实验组乳杆
菌属的细菌消失,却出现志贺菌属的细菌。结论饮水地塞米松污染可影响小鼠神经系统,使小鼠肠道内细菌的种类、数量及优
势菌所占的比例发生改变,菌群多样性增加;抑制肠道益生菌的定植,利于肠道致病菌的入侵。
     

Establishment and analysis of specific DNA patterns in 16S-23S rRNA gene spac er regions for differentiating different bacteria

Objective To establish the specific 16S-23S rRNA gene spacer regions in different bacteri a using polymerase chain reaction (PCR), restriction fragment length polymorphis m (RFLP), DNA cloning and sequences analysis. Methods A pair of primers were selected from highly conserved sequences adjacent to the 16S-23S rRNA spacer region. Bacterial DNA from sixty-one strains of standard bacteria and corresponding clinical isolates representative of 20 genera and 26 species was amplified by PCR, and further analyzed by RFLP, DNA cloning and se quences analysis. Furthermore, all specimens were examined by bacterial cultur ing and PCR-RFLP analysis. The evaluation of these assays in practical clinic practice was also discussed. Results Restriction enzyme analysis revealed one, two or three bands or more observed am ong the 26 different standard strains. The sensitivity of PCR reached 2.5 colony-forming unit (CFU), and there was no cross reaction with human genomic DNA, fungus or virus. Fourt ee n species could be distinguished immediately by PCR, while another 10 species we re further identified by Hinf Ⅰ or Alu Ⅰ digestion. The only difference betwe en K.pneumoniae and E.durans was located at the site of the 779th nucleot ide according to the sequence analysis and only XmaⅢ digestion could distingui sh one from another. Of 42 specimens from septicemic neonates, 15 were identifi e d as positive by blood culture at a rate of 35.7%. However, 27 specimens ident ified as positive by PCR, with a rate of 64.2%, a method significantly more eff ective than blood culture (P＜0.01). Of 6 cerebrospinal fluid (CSF) specim ens, one tested positi ve for S.epidermidis was also positive by PCR, two culture negative were po sitive by PCR and diagnosed as S.epidermidis according to the DNA pattern. One positive for C.neoformans was negative by PCR. The other two specimen s were negative by both PCR and culture. Conclusions The method of detecting bacterial 16S-23S rRNA spacer regions using PCR-RFLP t echniques was specific, sensitive, rapid and accurate in providing a new techniq ue for detecting pathogens in clinical bacterial infections.     

变性梯度胶电泳分析不同喂养方式对早产新生儿肠道菌群的影响

目的采用变性梯度胶电泳方法(DGGE)研究喂养方式对早产新生儿肠道茵群的影响.方法收集同期6对新生儿1～21 d粪便,直接提取细菌总DNA,扩增16S rDNA V6～V8区后DGGE分离,测序并与EMBL核苷序列数据库进行比较.结果喂养前肠道菌群类似,以梭状芽孢杆菌、链球菌、克雷伯氏茵为主,开奶后母乳喂养儿以双歧杆茵为主,奶粉喂养儿肠道茵群显示其明显的多态性,有双歧杆菌、梭状芽孢杆菌、链球菌、大肠杆茵、克雷伯氏菌、韦荣氏茵、沙雷氏茵以及不经培养细菌.结论喂养方式对早产新生儿茵群的形成及演替有明显影响,PCR-DGGE在多态性,动力性,茵群的演进变化方面提供了更加准确的数据和补充资料.     

浙贝母中内生菌的多样性及组成分析

[目的]研究浙贝母器官内生菌群,以期探明浙贝母道地性的形成机制,为开发其潜在的内生菌资源提供理论依据.[方法]本实验用PCR-变性凝胶梯度电泳（DGGE）对浙贝母的根、鳞茎、地上茎以及叶中的内生菌多样性和组成进行了检测和分析.[结果] DGGE结果表明,浙贝母不同器官中的内生菌多样性和结构均有差异.根部条带明显比其它器官多,内生细菌多样性指数最高（2.69）,而且出现不少特异性条带;茎中的细菌多样性为2.44;叶中最低,仅2.21.测序结果表明,浙贝母中的内生细菌主要为蓝细菌、根瘤菌、睾丸酮假单胞菌、伯克氏菌属和燕麦噬酸菌,后两种菌均为β-变形菌,该菌的存在可能会对浙贝母的生长产生不利影响,而根瘤菌和丛毛单胞菌则对其生长有利.根部特异性细菌包括蓝细菌（B4）、伯克氏菌属（B23）、根瘤菌（B5、B24）以及3种不可培养细菌（B6-B8）.与细菌相比,内生真菌DGGE图谱在不同器官之间的差异更小,大部分为共有条带,只是亮度有差异.当然也有特异条带,如曲霉属（F10）仅在鳞茎中出现.镰孢菌属（F11）以及2种不可培养的真菌（F5、F6）为根部特有.与细菌不同,地上茎中的真菌Shannon指数最高（2 82）,其次是鳞茎和根,叶最低2.53.利用DGGE检测到浙贝母的内生真菌主要为侧齿霉、镰孢霉和曲霉,而利用传统方法还分离到交链孢霉、青霉、拟茎点霉、葡萄孢、卵形孢霉、枝链孢霉、毛壳菌、丝核菌以及束丝菌等属,说明对浙贝母而言,传统方法更适合.[结论]浙贝母不同器官中内生细菌和真菌的多样性及组成均存在差异,但地下鳞茎和地上茎差异较小;真菌的器官差异不如细菌明显.浙贝母内生菌的分布跟其它植物明显不同,其菌群组成主要取决于浙贝母宿主植物本身.不同的内生菌占据不同生态位,执行不同功能,有的对促进浙贝母的生长,而有的则影响生?     

Determination of lamivudine-resistant variants of hepatitis B virus by denaturing gradient gel electrophoresis: a novel approach to monitoring drug resistance

BACKGROUND: A DGGE-based assay for hepatitis B virus (HBV) drug-resistance monitoring was designed and checked for feasibility. It detects mutations within the YMDD motif related to lamivudine resistance. MATERIAL/METHODS: The YMDD motif of HBV polymerase was amplified by the set of primers designed in this study. DGGE analysis of the amplicons was performed on 9% polyacrylamide gels containing a 20-40% gradient of urea plus formamide and electrophoresis was performed. DNA sequencing was performed using a standard protocol. RESULTS: Based on the DGGE pattern of previously sequenced HBV variants, a reference ladder consisting of bands was constructed within and near the YMDD motif of HBV with excellent resolution. The genotypes of all the fragments included in the ladder were confirmed by sequencing after DGGE analysis. The flexibility of DGGE was demonstrated by the ability to add more bands to the migration ladder when new variants were discovered during the analysis of patient specimens. Clinical samples from HBV-infected patients were also used to demonstrate the performance of this approach. CONCLUSIONS: This preliminary feasibility study of HBV drug-resistance monitoring by means of DGGE shows the potential advantage of this approach for low-cost screening for viral drug resistance in clinical settings. The presented example can be extended to detect other mutations related to drug resistance in the HBV genome as well as other viruses.     

变性梯度凝胶电泳检测鲍曼不动杆菌中SHV基因单核苷酸多态性

目的建立变性梯度凝胶电泳（DGGE）检测超广谱β内酰歧酶（ESBL）基因中单核苷酸多态性（SNP）的方法,并获得鲍曼不动杆菌中SHV丛因SNP的资料。方法采用DGGE并结合DNA序列测定,检测了24株SHV基闳刚性的鲍曼不动杆菌SHV基因SNP。结果对这些菌株SHV基因的PCR产物直接进行DGGE电泳时,24例标本均呈现出单一条带,但条带的位置明显不同,可分为A、B两组;对两组标本分别用含GC后夹的引物进行SHV基因PCR扩增后再行DGGE,结果显示各产物均为单一条带,而且每组条带均处于同一位置。测序结果表明两组产物分别为SHV-1b．Like、SHV一18-Like。结论目前该地区鲍曼不动杆菌中SHV基因存在两种型别。通过DGGE,不仅能简便、迅速地获得某种基因的SNP资料,而且有利于高效和经济地筛选出新的核苷酸突变。     

食管鳞癌原位模型小鼠肠道菌群分析

背景随着肠道菌群高通量测序技术的应用与发展,越来越多的研究证实肠道菌群与多种肿瘤的发生、发展密切相关。食管鳞癌是威胁我国人民健康的常见肿瘤,其与肠道菌群的关系备受关注。目的分析比较食管鳞癌原位模型小鼠与正常小鼠肠道菌群的多样性,筛选出食管鳞癌特异性改变的菌属。方法2020年8月至2021年5月,将20只雌性SPF级C57BL/6小鼠适应性喂养1周后随机分为对照组（DZ组）和模型组（MX组）,每组10只。DZ组小鼠常规喂养并给予普通饮用水32周,MX组小鼠按照造模方法常规喂养并给予含0.1 mg/ml诱癌剂4-硝基喹啉-1-氧化物（4NQO）的饮用水喂养16周,之后给予普通饮用水喂养至32周。收集两组小鼠粪便,提取DNA,应用聚合酶链式反应（PCR）扩增后进行高通量测序,获得的测序数据聚类成为基于序列间相似度的分类操作单元（OTU）,并根据物种注释情况进一步分析Alpha多样性、Beta多样性、物种丰度。结果两组小鼠在实验过程中未出现死亡,MX组小鼠均造模成功。MX组与DZ组相比,拟杆菌门（Bacteroidota）及厚壁菌门（Firmicutes）比例升高,而疣微菌门（Verrucomicrobiota）及变形菌门（Proteobacteria）比例降低。Alpha多样性结果显示,MX组小鼠肠道菌群Shannon指数低于DZ组（P<0.05）。Beta多样性分析中PCoA图显示,MX组与DZ组样本分别聚集在不同的象限,相距较远,样本间多样性差异较大（t=22.444,P=0.004）。在门水平,MX组Unidentified_ Bacteria、蓝细菌（Cyanobacteria）、易感微生物（Elusimicrobia）、弯曲杆菌（Campilobacterota）丰度高于DZ组（P<0.05）。在属水平,MX组普雷沃菌科_UCG-003（Prevotellaceae_UCG-003）、拟杆菌属（Bacteroides）、毛螺菌科NK4A136组（Lachnospiraceae_NK4A136_group）、瘤胃球菌属（Ruminococcus）、普雷沃菌科_UCG-001（Prevotellaceae_UCG-001）、普雷沃菌属（Prevotella）、大肠埃希菌（Colidextribacter）、毛螺菌科_UCG-006（Lachnospiraceae_UCG-006）丰度高于DZ组,罗姆布茨菌（Romboutsia）、土杆菌属（Turicibacter）丰度低于DZ组（P<0.05）。LEfSe分析结果显示,在属水平上,Prevotellaceae_UCG-003、埃希菌-志贺菌属（Escherichia-Shigella）、Bacteroides、Lachnospiraceae_ NK4A136_group在MX组丰度增高（P<0.05）;而Romboutsia丰度在DZ组增高（P<0.05）。结论食管鳞癌原位模型小鼠与正常小鼠相比肠道菌群物种多样性降低,存在特异性差异菌属,其中Prevotellaceae_UCG-003、Bacteroides、Lachnospiraceae_NK4A136_group和Romboutsia可作为食管鳞癌诊断的生物标志物。     

江门市区2002～2006年生活饮用水水质卫生状况分析

目的了解江门市区2002—2006年生活饮用水水质状况，为改善水质提供科学依据。方法按照GB／T8538—95、《生活饮用水卫生规范》（2001年版）进行实验检测，对市区现场抽检和被检单位送检的水质连续5年进行监测的结果进行统计分析。结果江门市区生活饮用水水质5年平均合格率为93．23％；合格率较低的项目主要是总大肠菌群、细菌总数、游离余氯、铁、浑浊度、pH值、耗氧量等项；各类水源水质项次合格率由高到低依次是：出厂水〉管网水〉水源水〉二次供水，其中水源水、出厂水的合格率无统计学意义（P〈0．05），二次供水、管网水2002～2005年的合格率亦无统计学意义，二次供水2006年的合格率高于2002、2003年有统计学意义，管网水2006年的合格率高于2002～2004年也有统计学意义（P〈0．05）。结论5年江门市区生活饮用水水质的合格率逐年升高，但其生活饮用水水质卫生质量仍有待提高，应重点加强饮用水源的卫生防护和用户支管的更新、改造。     

川党参的基因组DNA提取与ISSR引物筛选

目的 筛选最适党参基因组DNA的提取方法及ISSR (inter-simple sequence repeat)引物,为研究党参种植资源遗传多样性及DNA鉴定奠定基础.方法 以党参嫩叶作为材料,采用常规SDS法、改良CTAB法和试剂盒法3种提取方法基因组DNA,用优化的ISSR-PCR反应对100条引物进行筛选.结果 以党参嫩叶为材料提取基因组DNA,改良CTAB法效果最佳.从公布的100条ISSR引物中筛选出10条引物,能扩增条带清晰、稳定性好、多态性高的DNA条带.结论 以党参嫩叶为材料提取基因组DNA进行ISSR分子标志研究遗传多样性时应采用改良CTAB法,筛选出合适的引物在ISSR分子标志中很重要.     

蠕形螨ISSR-PCR的反应体系优化及引物筛选

目的以蠕形螨的DNA为模板,对蠕形螨简单重复序列锚定PCR(ISSR-PCR)反应体系优化并对ISSR引物进行筛选,为ISSR分析奠定基础。方法用自然沉降法收集山羊蠕形螨,用基因组DNA提取试剂盒提取山羊蠕形螨DNA,并以此为模板,以(CA)8RG(R为1分子的嘧啶)为引物,利用正交实验法,从Mg2+浓度、引物用量、dNTPs、DNA模板用量和TaqDNA聚合酶以及退火温度对蠕形螨ISSR-PCR反应体系进行优化,并以优化的反应体系筛选ISSR-PCR的引物。结果 ISSR-PCR 25μL最佳反应体系包括:0.4 mmol/L Mg2+、30 pmol引物、30～60 ng模板DNA、2u Taq酶,最佳退火温度为49℃、循环35次。筛选出10条条带清晰、多态性好、重复性高的引物。结论筛选出蠕形螨ISSR-PCR最佳反应体系和理想的引物,为蠕形螨的分子生物学研究奠定了基础。     

利用ISSR分子法标记鉴别新会茶枝柑

目的研究利用ISSR分子标记方法在核酸分子水平上鉴别新会茶枝柑。方法从28条ISSR引物中筛选合适的引物,对从新会茶枝柑、砂糖桔、阳山桔、贡柑、芦柑共16个新鲜叶片样品中提取的总DNA进行PCR扩增及电泳分析,寻找特征位点。结果新会茶枝柑所有样品与其中2条ISSR引物扩增出较为明显的特征条带,可区别于其他品种。结论 ISSR作为一种简便有效的分子标记方法,可用于新会茶枝柑的鉴别。     

利用荧光定量PCR技术对人肠道乳酸杆菌进行定量检测

目的应用荧光定量PCR技术对人粪便内乳酸杆菌进行定量检测,建立乳酸杆菌的荧光定量PCR检测体系。方法依据人肠道乳酸杆菌16S rDNA序列设计属特异性引物,应用荧光定量PCR技术检测乳酸杆菌的16S rDNA,对粪便中的乳酸杆菌进行定量检测和分析,并与用传统方法所获得的结果进行比较。结果荧光定量PCR检测乳酸杆菌和传统方法检测乳酸杆菌获得的结果接近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论荧光定量PCR技术比传统方法省时、省力,且敏感性和特异性更高。     

玄参总DNA提取方法的比较研究

目的探讨药材玄参总DNA的最佳提取方法。方法分别采用SDS法和CTAB法提取药材玄参总DNA,并对其进行核酸含量测定和电泳检测。结果采用SDS法提取的总DNA其OD260/OD280=1.83,而采用CTAB法提取的总DNA其OD260/OD280=1.64;DNA电泳检测显示采用SDS法提取的总DNA条带清晰,而采用CTAB法提取的总DNA出现严重的拖尾现象。结论用SDS法提取药材玄参总DNA优于CTAB法。