幽门螺杆菌细胞空泡毒素毒性片段基因的表达及其重组蛋白免疫学鉴定

目的采用基因工程技术获得具有良好免疫反应性的重组细胞空泡毒素的毒性亚单位蛋白。方法利用PCR技术从Hp基因组中扩增VacA基因毒性片段,插入原核表达载体pQE30上,测序后,转化表达宿主菌DH5α,SDSPAGE分析表达情况,Western blot检测其免疫反应性。NiNTA^2＋树脂纯化后,用重组蛋白免疫兔,Helico Blot试剂盒检测兔血清VacA抗体以鉴定其免疫原性。结果测序表明目的序列完整,与Genbank中的多株中国菌株相比有高度的同源性。SDS—PAGE显示表达产物相对分子量为27000。表达量为30％以上。该蛋白可被Hp全菌抗血清所识别,纯化后可得到纯度为93％以上蛋白质,并证实有良好的免疫原性。结论Hp VacA基因毒性片段表达成功,获得高纯度重组蛋白并具有良好的免疫反应性与免疫原性,为研制疫苗和制备诊断VacA（＋）株感染试剂盒提供了可靠材料。     

急性δ肝炎的血清学诊断

肝炎δ病毒(HDV,hepatitis delta Virus)的感染可在乙型肝炎病毒(HBV)的感染时发生,也可是乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带者的二重感染。以前诊断HDV 感染是从血清中检出抗HD,但据报道该抗体在急性自限性感染的晚期才能检出或根本测不出。作者对63名患肝炎(HBsAg 阳性)的静脉毒瘾     

细菌水通道蛋白研究展望

根据通透特异性,现已证实和命名了三类细菌的水通道蛋白,它们以四聚体形式存在于特定细菌的细胞膜上,共同完成水、甘油、小分子物质转运,在细菌各个生长期有着不同的分布和表达,对细菌的生长、繁殖、变异和死亡有着重要的生理作用,可能是杀灭细菌的切入点之一。     

快速乳胶凝集试验直接以咽拭子中检测A族链球菌抗原

许多临床医生是依靠实验室的诊断来鉴别链球菌性与病毒性咽炎。实验室分离培养A族链球菌一般需要24～72小时,快速诊断的方法须20分钟到4小时不等。本文介绍了一种用乳胶凝集试验直接从咽拭子中检测A族链球菌抗原的方法,并与厌氧培养法比较。作者采用Culturetle牌快速A族链球菌鉴定系统,取一咽拭子采集标本,用分区划线法接种于5%羊血琼脂平板,先置于厌氧缸中35℃培养过夜,然后置于5%CO_2 35℃培养24小时。分离出的乙型溶血性链球菌用革兰氏染色,过氧化氢酶实验鉴定,乳胶凝集试验分群,将接种后的同一支咽拭子放入含有微量亚硝酸碳水化合物溶液的小管中浸泡5分钟,处理后的拭子在测试板上的阴性对照圈和     

幽门螺杆菌细胞空泡毒素细胞毒作用机制研究进展

细胞空泡毒素 (VacA)是幽门螺杆菌 (HP)的重要致病因子。VacA先与细胞表面的受体蛋白酪氨酸磷酸酶 β(RPTPβ)结合 ,经受体内吞作用进入细胞内 ,引起晚期溶酶体与胞内体的融合与积累 ,而形成空泡。其原因是VacA作用于细胞内的酶和引起脂质双分子层离子通道形成。VacA还可导致细胞间的紧密连接松弛 ,增强极化上皮单层细胞的渗透性。同时也通过干扰EGF介导的细胞信号转导通路和破坏上皮细胞的正常细胞骨架来抑制细胞的增殖。本文就上述VacA细胞毒作用机制研究的最新进展作一综述     

幽门螺杆菌重组中性粒细胞激活蛋白蛋黄抗体的制备

目的:制备高效价的.抗Nap蛋黄抗体(IgY).方法:大量诱导、培养重组菌pQE30-NapA-DH5α获得重组蛋白Nap,经Ni2 -NTA树脂纯化后,Bradford法测定蛋白浓度.用纯化的Nap蛋白免疫鸡,水稀释结合氯仿有机沉淀法提取IgY.ELISA法测定抗体产生的时间-效价变化.将效价高的Nap-IgY用硫酸铵沉淀法纯化浓缩,间接ELISA法检测效价,Bradford法测定蛋白含量.Western blot检测制备的Nap-IgY的抗体活性.结果:Nap重组蛋白主要以包涵体形式表达,蛋白含量为0.37 g/L.免疫鸡的蛋黄提取物可与Nap发生特异性反应,IgY效价随免疫时间增加而升高,在110 d达最高效价.经纯化浓缩后,Nap-IgY的效价为1:12800,蛋白浓度为23.67 g/L.结论:成功制备了高浓度、高效价的Nap特异性IgY.     

抗幽门螺杆菌粘附素HpaA卵黄抗体的制备

目的研制高效价特异性的抗幽门螺杆菌黏附素鸡卵黄抗体免疫球蛋白抗体。方法用纯化重组幽门螺杆菌黏附素（Helicobacter pylori adhesin A，rHpaA）抗原免疫22周龄罗曼鸡，母鸡免疫应答后，在卵黄中产生抗幽门螺杆菌黏附素抗体：经硫酸铵法初步纯化浓缩后；以间接ELISA鉴定抗体效价及免疫学活性；采用Bradford法测定蛋白含量；并用SDS-PAGE法测定分子量及鉴定抗体纯度。结果母鸡初次免疫第10d即有抗体产生，初次免疫后75d左右抗体效价超过1：10000；最高可达为1：12800。卵黄抗体经硫酸铵法纯化后。用SDS-PAGE分析。出现两条蛋白带。纯度达95％以上。其含量为10．56mg／ml蛋黄。结论本研究首次研制并鉴定抗黏附素卵黄抗体，开拓了我国预防幽门螺杆菌感染的新领域，分析了抗体在产蛋期卵黄液中表达的进度，为今后该抗体的持续、高质量诱导奠定基础。有望获得高效价、高产量的抗黏附素的IgY抗体（IgY-HpaA），为制备口服制剂开辟了广阔前景。     

血清CagA IgG在根除幽门螺杜菌过程中的诊断价值

多年来,众多学者的研究表明幽门螺杆菌(Helicobacter pylo ri,Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡及胃癌等多种胃疾病的重要致病因素,根除Hp感染已具有重要的临床意义[1].但根除效果的观察较困难,常需经胃镜取胃粘膜组织.多次检查,病人难以接受.国外资料报道,Hp被清除后,血清特异IgG明显下降,但所需时间长, 且难以降至正常水平[2].近年的研究表明,临床分离的Hp可分为产细胞空泡毒素( Vacuolating cytotoxin,Vac)的Toxin+和不产Vac的Toxin-两种类型,所有的Toxin+ 株能表达一种蛋白质,称为细胞毒相关基因抗原(cytotoxin associated gene antigen,Cag A).CagA在Hp中含量极微,却能引起强烈的免疫反应.     

痰标本不染色涂片直接检查的评价

用严重污染咽喉部菌群的痰标本作培养不但花费大而且结果不良。所以在培养前应进行筛选。过去的筛选法是将痰标本涂片作革兰氏染色镜检,观察涂片中的鳞状上皮细胞(SEC,squamous epi-thelial cells)或/和多形核白细胞,以判断标本     

一种新的分离A族乙型溶血性链球菌的选择培养基

用含羊血琼脂培养基(SBA,Sheep blood ag-ar)分离咽喉拭子中的A族乙型溶血性链球菌(GA-BHS group A beta-hemolytic streptococci),是一种广泛使用的方法,但常因上呼吸道正常菌群(NRF,normal upper respiratory tract flora)大量生长而使分离效果欠佳。本文介绍一种在羊血琼脂基中加有结晶紫、粘菌素和三甲氧苄胺嘧啶—磺胺甲基乙恶唑的新的选择培养基(ssA,sele c-tive group A streptococcus agar),并比较了两者对咽拭子分离的结果。