水半夏组培快繁体系的建立

目的 建立水半夏的组培快繁体系,为快速、大量生产水半夏种苗提供基础。方法 利用不同植物激素配比的培养基,以水半夏块茎为外植体进行试验。结果 愈伤培养基MS＋NAA 0.2 mg/L＋KT 1.0 mg/L＋蔗糖3 %＋琼脂6 g/L可成功诱导水半夏愈伤组织;丛生芽培养基MS＋NAA 0.2 mg/L＋6-BA 2.0 mg/L＋蔗糖3 %＋琼脂6 g/L诱导不定芽效果较好,增殖倍数高;生根培养基1/2 MS＋NAA 0.2 mg/L＋IBA 0.4 mg/L＋KT 0.2 mg/L＋蔗糖3 %＋琼脂6 g/L＋AC 0.3 g/L,有利于水半夏不定根的快速形成,12～14周即可获得再生水半夏植株。培养基MS＋NAA 0.2 mg/L＋6-BA 1.5 mg/L＋蔗糖3 %＋琼脂6 g/L为诱导水半夏分化一次性成苗的最佳激素配比,5～6周可形成试管苗,10周后可用于炼苗。结论 建立的水半夏组培快繁体系为水半夏优良品种的快速繁殖奠定基础,且可应用于工厂化生产水半夏种苗。     

铁皮石斛快繁技术体系研究

目的 以铁皮石斛Dendrobium officinale带芽茎段为材料,对铁皮石斛的组织培养进行系统研究,以期建立铁皮石斛的快繁技术体系。方法 采用植物组织培养的方法对铁皮石斛外植体的消毒方法、原球茎的诱导、增殖、分化、幼苗生根及瓶苗移栽等进行研究。结果 铁皮石斛外植体最佳的消毒方式为75%乙醇消毒30 s,再用0.1% HgCl₂消毒10 min;铁皮石斛带芽茎段原球茎诱导的最佳培养基为MS＋1.0 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L NAA＋2 g/L AC,诱导率达到34.98%;原球茎增殖的最佳培养基为MS＋0.5 mg/L 6-BA＋0.8 mg/L 2, 4-D＋2 g/L AC,增殖率达到89.6%;原球茎分化的最佳培养基为MS＋1.2 mg/L 6-BA＋0.2 mg/L IBA＋2 g/L AC,分化率达到89.6%;幼苗生根的最佳培养基配方为1/2 MS＋2.5 mg/L NAA＋15%土豆汁＋2 g/L AC,生根率达到90.4%～92.8%;瓶苗移栽最佳方式为大苗、树皮块苔藓草做基质、基质中添加0.03 mg/L赤霉素,并接种适量菌根真菌Epulorhiza sp.。结论 建立了铁皮石斛的快繁技术体系,为铁皮石斛的工业化生产奠定技术基础。     

乌头离体培养和快速繁殖

目的建立乌头的快繁体系。方法利用组织培养的方法,设置18种、9种和12种不同激素处理组合的培养基分别诱导乌头不同外植体愈伤组织、诱导愈伤组织丛生芽的分化、诱导再生苗的生根。结果适合乌头茎尖和茎段愈伤组织诱导的培养基为:MS NAA0.2mg/L 6-BA2.0mg/L PVP(或AC)3.0g/L;适合叶片愈伤组织诱导的培养基为:MS NAA0.2mg/L 6-BA4.0mg/L PVP(或AC)3.0g/L;适合愈伤组织增殖与丛生芽诱导的培养基为:MS NAA0.2mg/L 6-BA2.5mg/L LH200mg/L PVP3.0g/L和MS NAA0.1mg/L 6-BA2.0mg/L LH200mg/L PVP3.0g/L。适合诱导生根的培养基为:MS IBA1mg/L AC3.0g/L。结论以乌头茎尖、叶片、茎段及带或不带腋芽的茎段作为外植体进行离体培养,可以实现乌头种苗的工厂化快速繁殖。     

天门冬组培快繁体系研究

目的 建立天门冬组培快速繁殖体系,保护和合理利用天门冬资源。方法 采用不同基本培养基和不同种类及质量浓度的植物生长调节剂对天门冬不同外植体进行愈伤组织诱导、丛生芽诱导及生根培养研究。结果 愈伤组织诱导的最适培养基为1/2 MS＋1.0 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L NAA,pH 5.8;丛生芽诱导的适宜培养基为MS＋1.5 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L IAA,pH 5.8;生根的适宜培养基为1/2 MS＋0.5 mg/L IBA＋0.5 mg/L IAA,其中培养基中铁盐的质量浓度降低到6.95 mg/L,蔗糖的质量浓度降低至20 g/L,pH值为5.8。结论 天门冬不同外植体均可诱导出愈伤组织,其中嫩芽诱导愈伤率最高,为天门冬最适组织培养的外植体;利用组织培养技术能够实现天门冬快速繁殖,为其人工扩大栽培奠定了良好基础。     

白芨愈伤组织诱导、增殖与分化研究

目的 建立白芨愈伤组织诱导、增殖和分化再生体系。方法 以MS为基本培养基,应用正交试验方法设计植物生长调节剂组合和质量浓度配比,研究不同外植体及植物生长调节剂对白芨愈伤组织形成、增殖和分化的影响。结果 白芨假鳞茎为诱导愈伤组织形成的最佳外植体;1.0 mg/L 6-苄氨基嘌呤（6-BA）与2.0 mg/L 2, 4-二氯苯氧乙酸（2, 4-D）组合不仅可诱导白芨愈伤组织形成,还有利于愈伤组织分化成芽。1.0 mg/L 6-BA与3.0 mg/L 2, 4-D的组合促进愈伤组织增殖,增殖系数为7.8;在分化培养基中附加0.5 mg/L噻二唑苯基脲（TDZ）,可提高愈伤组织分化率。结论 白芨愈伤组织诱导的最佳培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋2, 4-D 2.0 mg/L;最佳增殖培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋2, 4-D 3.0 mg/L;分化最佳培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋2, 4-D 2.0 mg/L＋TDZ 0.5 mg/L。     

白芨愈伤组织诱导、增殖与分化研究

目的 建立白芨愈伤组织诱导、增殖和分化再生体系。方法 以MS为基本培养基,应用正交试验方法设计植物生长调节剂组合和质量浓度配比,研究不同外植体及植物生长调节剂对白芨愈伤组织形成、增殖和分化的影响。结果 白芨假鳞茎为诱导愈伤组织形成的最佳外植体;1.0 mg/L 6-苄氨基嘌呤（6-BA）与2.0 mg/L 2, 4-二氯苯氧乙酸（2, 4-D）组合不仅可诱导白芨愈伤组织形成,还有利于愈伤组织分化成芽。1.0 mg/L 6-BA与3.0 mg/L 2, 4-D的组合促进愈伤组织增殖,增殖系数为7.8;在分化培养基中附加0.5 mg/L噻二唑苯基脲（TDZ）,可提高愈伤组织分化率。结论 白芨愈伤组织诱导的最佳培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋2, 4-D 2.0 mg/L;最佳增殖培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋2, 4-D 3.0 mg/L;分化最佳培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋2, 4-D 2.0 mg/L＋TDZ 0.5 mg/L。     

甘西鼠尾草愈伤组织诱导、增殖及分化研究

目的 考察不同质量浓度激素组合对甘西鼠尾草愈伤组织诱导、增殖及分化的影响。方法 以甘西鼠尾草叶片为外植体,采用正交试验研究2,4-D、NAA、6-BA、KT对愈伤组织诱导及增殖的影响,并探讨适宜愈伤组织分化的培养条件。结果 以诱导率和相对生长速率为指标,6-BA和2,4-D均对甘西鼠尾草细胞脱分化和细胞增殖具有显著影响,愈伤组织诱导的最佳激素组合为2,4-D 0.5 mg/L＋NAA 1.0 mg/L＋6-BA 0.5 mg/L,增殖的最佳激素组合为2,4-D 0.5 mg/L＋6-BA 2.0 mg/L＋KT 0.1 mg/L,MS＋NAA 0.5 mg/L＋6-BA 1.0 mg/L的培养基有利于不定芽的分化,而1/2 MS＋IBA 1.0 mg/L的培养基则有利于不定根的分化。结论 本实验所建立的组织培养体系,适宜甘西鼠尾草的植株再生。     

珐菲亚组织培养条件的优化研究

目的 优化珐菲亚组织培养快速繁殖技术。方法 分别以MS和1/2MS为基本培养基,采用正交设计研究植物生长调节剂多因素组合（6-BA、NAA、IBA和IAA）对珐菲亚继代增殖和诱导生根的影响。结果 MS＋6-BA 1.5 mg/L＋NAA 0.1 mg/L＋IBA 0.2 mg/L利于丛生芽继代增殖,30 d繁殖系数6.0以上;1/2 MS＋NAA 1.0 mg/L＋IBA 0.2 mg/L适于诱导生根获得再生植株,生根率100%;生根苗移栽于排水良好的沙床上,成活率98%。结论 本实验为保护珐菲亚的野生资源,发展人工栽培和探讨育种新途径奠定基础。     

馥芳艾纳香快繁体系的建立

目的 建立馥芳艾纳香Blumea aromatica 的快繁技术体系,为大量生产种苗提供基础。方法 利用不同激素配比的培养基,筛选出馥芳艾纳香快速繁殖的最适培养基。结果 带腋芽茎段是丛生芽诱导的最佳材料;丛生芽诱导的最适培养基为MS＋2.0 mg/L 6-BA＋0.2 mg/L NAA,诱导率为100%;最佳继代增殖培养基为MS＋2.0 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L KT＋0.2 mg/L NAA,增殖倍数为6.83;最适的生根培养基为1/2 MS＋0.3 mg/L NAA,生根率100%,移栽成活率84.07%。最适培养条件为温度26 ℃、光照强度为2 000 lx、光照时间10 h。结论 快繁技术体系可在短时间内提供大量种苗,并为馥芳艾纳香规模化生产种苗提供技术指导。     

藏药马尿泡离体快繁技术研究

目的 通过对马尿泡组织培养技术的研究,为马尿泡的快速繁殖提供技术支撑。方法 以马尿泡野生植株上的休眠芽为外植体,将它们接种到一系列含有不同激素的培养基中。结果 外植体野生芽不易进入正常萌发生长阶段,一旦进入正常阶段,能迅速进入生长状态,诱导野生芽分化的最适培养基是MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L,且侧芽要比主芽分化得快,增殖率明显高于主芽的增殖率。25 d转接1 次,增殖倍数在5倍以上。最适生根培养基是1/2 MS+IBA 0.5 mg/L,诱导生根率达96%。无菌苗幼叶诱导愈伤组织最适培养基是MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L,诱导率达100%。结论 一方面建立了稳定高效的马尿泡再生体系,另一方面通过组织培养达到了其种质资源的保存。     

转双价抗虫基因 Bt-CpTI 提高四倍体菘蓝对小菜蛾抗性

目的 将外源苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因 CryIA(c) 和豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 CpTI 共同转入四倍体菘蓝以获得鳞翅目昆虫小菜蛾抗性。方法 构建了以 CaMV 35S 为启动子,新霉素磷酸转移酶 (Npt-Ⅱ) 为选择标记,带有 CryIA(c) 基因和 CpTI 基因的植物表达载体 pGBI121S4ABC 并转入根癌农杆菌 LBA4404。采用叶盘法遗传转化四倍体菘蓝。转基因再生植株经 PCR 和 Southern 杂交检测,并进行抗小菜蛾实验。结果 T₀ 代转化四倍体菘蓝的双基因阳性转化率达到 16.67%。Southern 杂交检测结果表明外源 CryIA(c) 基因和 CpTI 基因均已经随机整合到转基因菘蓝的基因组中。与野生对照相比,转基因四倍体菘蓝对小菜蛾显示出明显抗性。结论 转双价抗虫基因 Bt-CpTI 是提高四倍体菘蓝对小菜蛾抗性的有效手段。     

金钗石斛茎的化学成分研究

目的 对金钗石斛Dendrobium nobile茎的化学成分进行研究。方法 采用正相及反相硅胶柱色谱、凝胶柱色谱及制备高效液相色谱等方法进行分离纯化,根据波谱数据进行结构鉴定。结果 分离得到11个化合物,分别鉴定为石斛碱（1）、石斛醚碱（2）、邻苯二甲酸丁酯（3）、松脂素（4）、N-反式桂皮酸酰对羟基苯乙胺（5）、N-反式阿魏酸酰对羟基苯乙胺（穆坪马兜铃酰胺,6）、N-顺式阿魏酸酰对羟基苯乙胺（7）、N-反式香豆酰酪胺（8）、N-顺式香豆酰酪胺（9）、山药素III（10）、二氢松柏醇二氢对羟基桂皮酸酯（11）。结论 化合物3、5～9均为首次从该植物中分离获得,其中化合物9为首次从石斛属植物中分离获得。     

UPLC-ELSD法同时测定重楼中重楼皂苷I、II、VI、VII

目的 建立同时测定重楼中重楼皂苷I、II、VI、VII的超高效液相色谱-蒸发光散射（UPLC-ELSD）分析方法。方法 采用Waters Acquity UPLC H-Class色谱系统,ELSD检测器,BEH C¹⁸色谱柱（50 mm×2.1 mm,1.7 μm）,流动相为乙腈-水,以体积流量0.45 mL/min进行梯度洗脱,柱温30 ℃。结果 被测成分在线性范围内均具有良好的线性关系（r＞0.999 5）;平均回收率在98.36%～100.11%,RSD≤1.56%。结论 UPLC法分离效果及重现性好,且快速、简便,可作为重楼的质量控制方法。     

蔓性千斤拔根的化学成分研究

目的 研究蔓性千斤拔Flemingia philippinensis根的化学成分。方法 采用多种色谱方法进行分离纯化,运用各种波谱学方法鉴定化合物的结构。结果 从蔓性千斤拔乙醇提取物的正丁醇萃取物中分离得到6个化合物,分别鉴定为3, 5, 7, 4′-四羟基-3′-甲氧基黄酮-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）、山柰酚-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷（2）、染料木苷（3）、芒柄花苷（4）、印度黄檀苷（5）和3′-O-甲基-香豌豆酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（6）。结论 化合物1为新的黄酮醇碳苷类化合物,命名为千斤拔苷A,化合物2和4为首次从该属植物中分离得到。     

KPC-2基因在克雷伯菌属中传播机制研究

目的 研究克雷伯菌属对亚胺培南耐药机制以及KPC-2基因在克雷伯菌属中传播机制。方法 收集四川大学华西医院两个阶段（2009～2010年和2012～2013年）分离的对亚胺培南耐药的克雷伯菌属细菌。琼脂稀释法测定亚胺培南最低抑菌浓度(MIC),CARB ChromID平板和改良Hodges试验检测碳青霉烯耐药表型,PCR检测细菌的KPC-2基因表达。质粒接合试验检测质粒传播性。随机引物扩增多态性DNA（RAPD）方法和肠杆菌基因间重复一致序列聚合酶链反应（ERIC-PCR）技术分别用于分析质粒和菌株的同源性。结果 第一阶段筛选并确证耐亚胺培南的3株产酸克雷伯菌首先获得碳青酶烯类抗生素耐药性,第二阶段筛选并确证耐亚胺培南的7株肺炎克雷伯菌出现相同的获得性耐药。PCR显示10株细菌均携带KPC-2型基因。质粒接合试验显示产酸克雷伯菌中携带KPC-2基因的质粒可以传递到受体菌,且与KPC-2基因阳性的肺炎克雷伯菌中携带的质粒具有同源性。ERIC-PCR结果显示7株KPC-2基因阳性的肺炎克雷伯菌具有同源性。结论 四川大学华西医院分离的对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌主要耐药机制是产生KPC-2型碳青霉烯酶。产酸克雷伯菌中携带KPC-2基因质粒,该质粒具有传递性且与肺炎克雷伯菌携带质粒相同。肺炎克雷伯菌中耐药株的传播形式为同一克隆传播,而在克雷伯菌属中不同菌种间耐药传播途径为同一质粒的水平传播。     

嗜肺军团菌mip/flaA二联优势抗原表位基因融合表达载体的构建及表达

目的 选取嗜肺军团菌mip/flaA优势抗原表位基因,构建mip/flaA二联优势抗原表位基因融合表达载体,并在原核系统中表达,为后续制备嗜肺军团菌蛋白疫苗提供初步的实验基础。方法 运用生物信息学方法对Mip和FlaA蛋白的二级结构和表面特性如理化性质、亲水性、可塑性、抗原指数以及胞外区等方面进行分析,选择其活性表位可能存在的区域为优势抗原表位区。通过PCR扩增和T4连接酶构建pET-mip、pET-flaA和pET-mip/flaA优势抗原表位基因融合表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达。结果 Mip和FlaA都存在多个潜在的抗原表位位点,选取其优势抗原表位区域进行克隆和表达获得成功,并成功表达了mip/flaA二联优势抗原表位融合蛋白。结论 DNA Star软件和Expasy在线蛋白分析系统能够成功预测嗜肺军团菌Mip和FlaA 抗原的表位;选取其优势抗原表位成功构建了pET-mip/flaA二联原核表达载体,并高效表达。     

北鹤虱的化学成分研究

目的：研究北鹤虱(天名精的果实)的化学成分。方法：通过各种色谱手段（silica gel、ODS、HPLC）对北鹤虱甲醇提取物的二氯甲烷层进行分离纯化,通过¹H-NMR、¹³C-NMR等波谱技术确定化合物的结构。结果：分离并鉴定了5个倍半萜类化合物,分别为特勒内酯（1）、3-epiisotelekin（2）、11β,13-dihydro-1-epi-inuviscolide（3）、天名精内酯酮（4）、天名精内酯醇（5）。结论：化合物2、3为首次从天名精属植物分离得到。     

海藻、芫花反甘草的研究进展

中药配伍中相反指两种药物合用产生或增强毒性或使疗效降低,而“十八反”是重要的配伍禁忌,也是现代药性理论争议最多的问题,且至今尚未形成较统一的判断标准和结论。主要介绍了“十八反”中有关海藻、芫花反甘草的毒性和机制研究,探讨了影响“十八反”的因素,并在此基础上提出根据不同药物的特点确定其特定部位的安全药理实验内容的观点。     

白背叶根化学成分研究

目的 研究白背叶Mallotus apelta根的化学成分。方法 通过各种柱色谱进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果 分离得到了9个化合物,分别鉴定为β-香树脂醇乙酸酯（1）、高根二醇（2）、羽扇豆-20 (29)-烯-3β, 30-二醇（3）、对羟基苯甲酸-2α-羟基油桐酸酯（4）、α-香树脂醇乙酸酯（5）、油桐酸（6）、槲皮素（7）、3-甲氧基-4-O-β-D-葡萄糖基苯甲酸（8）、勾儿茶素（9）。结论 化合物1～4、6、8、9为首次从野桐属植物中分离得到。     

羊耳菊花的化学成分研究

目的 研究羊耳菊花Inula cappa的化学成分。方法 采用系统溶剂提取法结合各种色谱分离技术、理化性质和光谱数据鉴定结构。结果 从羊耳菊花中共分离得到10个化合物,分别鉴定为木栓酮（1）、乙酸羽扇豆醇酯（2）、豆甾醇（3）、ineupatorolide B（4）、cleomiscosin C（5）、木犀草素（6）、3, 4-二羟基苯甲酸（7）、芹菜素（8）、fortuneletin（9）、luteolin 4′-methyl ether（10）。结论 化合物2、4、5、7、9、10为首次从该植物中得到。