槲皮素和8-Br-cAMP对Eca-109细胞抑癌基因表达的影响

目的 :探讨槲皮素和 8 Br cAMP对Eca 1 0 9细胞抑癌基因表达的影响。方法 :将培养的Eca 1 0 9细胞随机分成 3组 :①Br组 ,加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 1 0 -5mol/L ;②Q组 ,加槲皮素至终浓度为 4 3μmol/L ;③C组 ,不加任何药物 ,只加入新培养液培养。 3组细胞同时培养 4 8h后 ,分别提取mRNA。将野生型 (wt)p5 3、p1 6和p2 1WAF1cDNA分别制备成生物素标记的探针 ,以mRNA斑点印迹阵列显示Eca 1 0 9细胞wtp5 3、p1 6和p2 1WAF1基因的表达。将 3组细胞分别滴片 ,同时进行分化染色 ,记数分化和增殖细胞比率。结果 :与C组相比 ,Br组和Q组wtp5 3、p1 6和p2 1WAF1mRNA信号增强 ,P <0 .0 1 ;Br组和Q组分化细胞比率显著提高 ,P <0 .0 1。结论 :槲皮素和 8 Br cAMP皆可通过上调wtp5 3、p1 6和p2 1WAF1基因的表达 ,抑制Eca 1 0 9细胞增殖 ,诱导Eca 1 0 9细胞分化     

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞相关基因的DNA拷贝和基因表达的影响

目的探讨8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞wtp53、c-myc、bcl-2基因的扩增、表达以及VEGF表达的影响.方法将贴壁培养的Eca-109细胞随机分成3组,Br组加8-Br-cAMP至终浓度为2×105 mol/L;Q组加槲皮素至终浓度为43 μmol/L;C组不加任何药物,只加入新培养液培养.3组细胞同时培养48h.以cDNA 阵列技术显示Eca-109细胞凋亡中wtp53、c-myc、bcl-2 DNA拷贝和mRNA的表达,以免疫组化法显示VEGF的表达.结果Br组和Q组与C组相比wtp53 DNA拷贝和mRNA信号较强,c-myc、bcl-2 DNA拷贝和mRNA信号较弱,VEGF表达较弱.结论8-Br-cAMP和槲皮素皆可通过上调wtp53,下调bcl-2、c-myc基因的扩增和表达,下调VEGF的表达,而诱导Eca-109细胞凋亡.     

8-Br-cAMP对Eca-109细胞凋亡的影响

目的：探讨8—Br—cAMP对人食管癌Eca—109细胞凋亡的影响及其相关基因表达的变化。方法：采用TUNEL法检测细胞凋亡,应用原位杂交、组织化学、免疫组织化学以及RNA和蛋白质斑点印迹技术相对定量,观察8—Br—cAMP对Eca—109细胞凋亡相关基因及凋亡效应分子表达的影响。结果：8—Br—cAMP作用48h后可显著诱导Eca—109细胞凋亡,并见到野生型(wt)p53及iNOS基因表达上调,bcl—2、c—myc基因表达下调,iNOS活性增强,Fas—IR减弱。结论：8—Br—cAMP通过调控凋亡相关基因及凋亡效应分子的表达,使之相互作用、相互协同,诱导人食管癌Eca—109细胞的凋亡。其中,wtp53在该凋亡的诸多因素中起着关键作用。     

纳米脂质体槲皮素联合8-Br-cAMP对Rb44细胞凋亡的影响

目的:探讨纳米脂质体槲皮素(nLQ)和8-Br-cAMP(Br)对人视网膜母细胞瘤Rb44细胞凋亡和p53、p21waf1 mRNA表达及Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的影响.方法:Rb44细胞分为4组:nLQ组给予终浓度为40 μmol/L nLQ;Br组给予终浓度为2×10-5 mol/L Br,联...     

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞凋亡中P38和Caspase-3表达的影响

目的 探讨8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞凋亡中P38、Caspase-3表达的影响.方法将贴壁培养的Eca-109细胞随机分为3组①对照组只加DMEM(Sigma)培养液(含体积分数10%胎牛血清)培养48 h.②Br组终浓度为2×10-5 mol/L 8-Br-cAMP的培养液培养48 h.③Q组终浓度为43 μmol/L槲皮素的培养液培养48 h.对以上3组细胞以TUNEL法染色计数细胞凋亡率.以免疫组化方法观察3组细胞的P38 MAPK-IR和Caspase-3-IR反应性.结果Br组及Q组细胞凋亡率高于对照组;Br组及Q组细胞的P38 MAPK-IR高于对照组;Br组及Q组细胞的Caspase-3-IR亦高于对照组.P38 MAPK-IR与Caspase-3-IR呈正相关.P均<0.05.结论P38 MAPK及Caspase-3参与了8-Br-cAMP及槲皮素诱导的Eca-109细胞的凋亡.     

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞p16基因启动子DNA结合蛋白及其mRNA表达的影响

目的应用Southwestern技术研究8-Br-cAMP和槲皮素(quercetin)对Eca-109细胞DNA结合蛋白与p16基因启动子区的结合调控mRNA表达的影响.方法将贴壁培养的Eca-109细胞随机分成3组,Br组加8-Br-cAMP至终浓度为2×105 mol/L;Q组加槲皮素至终浓度为43 μmol/L;C组不加任何药物,只加入新培养液培养.同时培养48 h,应用质粒提取及限制性酶切回收目的DNA片段,采用生物素随机引物标记探针;应用DNA斑点印迹技术检测探针的灵敏度后以Southwestern印迹技术检测与p16基因启动子区特异性结合的DNA 结合蛋白(DBP);以原位杂交检测p16基因mRNA的表达情况.结果实验组条带强于对照组,Br组强于Q组;核基质DNA结合蛋白主带位于Mr66 000、58 000和20 000;核外DNA结合蛋白主带位于Mr40 000、28 000和20 000;2者中20 000是共同成分.原位杂交技术显示p16基因mRNA蓝紫色信号颗粒位于胞质,杂交信号以实验组较强.结论8-Br-cAMP和quercetin尤其是前者作用于人食管癌Eca-109细胞,诱导产生与p16基因启动子结合较强的DBP,启动p16基因表达.     

8-Br-cAMP对人视网膜母细胞瘤细胞系癌基因和抑癌基因作用的研究

目的 :为探讨 8 Br cAMP对人视网膜母细胞瘤之HXO Rb44细胞系的生长作用机理 ,我们观察了 8 Br cAMP对该细胞的癌基因和抑癌基因表达的体外效应。方法 :将体外培养的HXO Rb44细胞系等分为两组 ,一组为加 2× 10 5mol/L 8 Br cAMP的实验组 (EG) ,另一组为不加 8 Br cAMP的对照组 (CG)。将两组的细胞悬液滴于硝酸纤维素膜 (NCM) ,应用完整细胞RNA斑点印迹和蛋白质斑点印迹免疫组化技术分别检测c fos ,N mycp2 1ras ,野生型 (w)p5 3 ,突变型 (m)p5 3 ,Rb ,p16的mRNA和PCNA的蛋白表达。结果 :wp5 3 ,Rb ,p16及p2 1waf1的mRNA信号为EG >CG(P <0 0 5～ 0 0 1) ;c fos ,N myc ,p2 1ras的mRNA信号和PCNA IR则为EG 相似文献   

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞周期及凋亡的影响

目的观察8-Br-cAMP和槲皮素(quercetin)对Eca-109细胞周期及凋亡的影响.方法将贴壁培养的Eca-109细胞随机分成3组,Br组加8-Br-cAMP至终浓度为2×105 mol/L;Q组加槲皮素至终浓度为43 μmol/L;C组不加任何药物,只加入新培养液培养.3组在同等条件下继续培养48 h.采用流式细胞仪检测细胞的周期,采用TUNEL法检测细胞凋亡百分率,采用DNA琼脂糖凝胶电泳法观察细胞DNA降解情况.结果2实验组细胞中G2-M期细胞比例较对照组显著上升(P<0.01).细胞凋亡百分率2实验组显著高于对照组(P<0.01);Br组和Q组相比,差异无统计学意义(P>0.05).DNA琼脂糖凝胶电泳中Br组和Q组皆呈DNA"梯样型"带,对照组未呈现DNA降解.结论8-Br-cAMP和槲皮素皆可阻滞Eca-109细胞于G2-M期,并进一步诱导Eca-109细胞凋亡.     

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞内游离钙离子浓度的影响

目的观察8-Br-cAMP和槲皮素对人食管癌Eca-109细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响.方法将贴壁培养的Eca-109细胞随机分成3组,Br组加8-Br-cAMP至终浓度为2×105 mol/L;Q组加槲皮素至终浓度为43 μmol/L;C组不加任何药物,只加入新培养液培养.3组细胞同时培养48 h,用激光共聚焦显微镜观察3组细胞内钙离子的荧光强度.结果对照组细胞内游离钙离子荧光强度为59.2±8.1,Br组细胞内游离钙离子荧光强度为63.3±8.5,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);Q组细胞内游离钙离子荧光强度为113.3±12.5,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论提示Br和Q诱导细胞凋亡的信号传导途径可能存在一定差异.     

8-Br-cAMP对Hela细胞wtp53，mtp53，c-myc和iNOS基因表达的影响

目的探讨8-Br-cAMP对Hela细胞癌基因和抑癌基因等表达的影响.方法将培养的Hela细胞分为3组①8-Br-cAMP组(Br组) 加至8-Br-cAMP终浓度为2×10-5mol/L;②阳性对照组(60Co组)给予60Co 照射量4 Gy,720 s;③阴性对照组(C组)仅加含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液.各组细胞均培养48 h后,将1×107 ml-1细胞悬液滴加至预先处理过的硝酸纤维素膜和载玻片上.应用原位杂交和完整细胞原位斑点印迹技术分别检测3组Hela细胞中野生型p53(wtp53)、突变型p53(mtp53)、c-myc和iNOS基因的表达.结果8-Br-cAMP组与阳性对照组相比,差异无统计学意义,P>0.05;与阴性对照组相比,上调wtp53和iNOS基因的表达,同时下调mtp53和c-myc基因的表达,P<0.01.结论结果提示8-Br-cAMP可能通过调控Hela细胞癌基因和抑癌基因的表达对Hela细胞起到生长抑制和促分化作用.     

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞DNA polβ基因及相关基因表达的影响

目的探讨8-Br-cAMP及槲皮素等分化诱导剂对Eca-109细胞DNA polβ基因及相关基因表达的影响.方法将培养的Eca-109细胞分为3组①加8-Br-cAMP组(Br组);②加槲皮素组(Q组);③不加任何药物对照组(C组).同时培养48 h,将野生型DNA polβ的cDNA, EGFR cDNA,野生型(wt) p53 cDNA及c-myc cDNA分别制备了生物素/地高辛标记的探针进行原位杂交和RNA斑点印迹阵列.另进行POLB,XRCC1,VEGF及PCNA的免疫组化染色及免疫斑点印迹阵列.结果Br组和Q组的DNA polβ,EGFR,c-myc基因表达下调而wtp53基因表达上调.POLB,XRCC1,PCNA及VEGF免疫斑点印迹减弱.8-Br-cAMP及槲皮素显著下调Eca-109细胞的DNA polβ基因表达及相关癌基因表达,同时上调抑癌基因的表达.作为POLB的异二聚体XRCC1及恶性细胞生物标志的PCNA及VEGF表达下调.结论分化诱导剂下调Eca-109细胞DNA polβ基因表达,提示Eca-109细胞的polβ基因是高表达的;功能调整后的polβ通过相关基因表达的改变尤其是wt p53基因表达的上调在癌细胞分化中可能起重要作用.     

8-Br-cAMP和槲皮素单独和联合应用对Eca-109细胞凋亡和Bcl-2、Bax、XRCC1等凋亡相关蛋白的作用

目的探讨8-Br-cAMP和槲皮素联合应用对Eca-109细胞的凋亡和Bcl-2、Bax、XRCC1等凋亡相关蛋白的作用.方法将Eca-109细胞随机分为4组①8-Br-cAMP组(Br组); ②槲皮素组(Q组); ③(Br+Q)组; ④不加药物的对照(C)组.同时培养48 h,对以上4组细胞制备细胞滴片及硝酸纤维素膜(NCM)滴膜2种标本,分别进行Bcl-2、Bax、XRCC1的免疫组化和免疫斑点印迹实验,并以TUNEL法检测各组细胞凋亡率.结果细胞凋亡率,C组为4%,(Br+Q)组为70%,Br组为42%,Q组为35%,(Br+Q)组>Br组或Q组>C组,P<0.001.Br、Q及(Br+Q)组与对照组相比,Bcl-2-IR及XRCC1-IR皆低于C组,P<0.001,而Bax-IR则高于C组,P<0.001;Br组Q组或Br组(Br+Q)组,P>0.05.Bcl-2-IR与XRCC1-IR呈显著正相关,与Bax-IR和Bax-IR与XRCC1皆呈显著负相关.结论Br与Q联合用药与单独用药皆可下调Bcl-2及XRCC1表达,上调Bax表达;联合用药的细胞凋亡率显著高于单用Br或Q.提示,中西医联合用药可能更具有临床治疗意义.     

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞核基质蛋白的影响

目的探讨8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞核基质蛋白的影响.方法将贴壁培养的Eca-109细胞随机分成3组,Br组加8-Br-cAMP至终浓度为2×105 mol/L;Q组加槲皮素至终浓度为43 μmol/L;C组不加任何药物,只加入新培养液培养.同时培养48 h,应用SDS-PAGE技术分析3组细胞核基质蛋白成分.结果实验组(Br组与Q组)与对照组(C组)比较,相对分子质量64 000、66 000、58 000为增加的条带,14 000、17 000、18 000为增强的条带,92 000是减弱的条带.2个实验组相比,以Br组变动显著.结论8-Br-cAMP和槲皮素可以诱导Eca-109细胞核基质蛋白成分改变,可能对肿瘤细胞基因表达调控、分化及凋亡起重要作用.     

8-Br-cAMP和槲皮素单独和联合应用对Eca-109细胞POLB及多药耐受相关蛋白的影响

目的探讨8-Br-cAMP和槲皮素单独和联合应用对Eca-109细胞耐药性的影响.方法将培养的Eca-109细胞随机分为4组①8-Br-cAMP组(Br组); ②槲皮素组(Q组); ③(Br+Q)组; ④不加药物的对照组(C)组.同时培养48 h,对以上4组细胞制备细胞滴片及硝酸纤维素膜(NCM)滴膜2种标本,分别进行MRP和POLB的免疫组化染色和免疫斑点印迹阵列及TLC扫描.结果免疫组化染色显示 C组的MRP-IR、POLB-IR强于Br组、Q组或(Br+Q)组,P<0.01.TLC扫描OD值C组MRP-IR高于Br、Q(Br+Q)组约3倍;POLB-IR高于Br、Q或(Br+Q)组约2倍;MRP与POLB呈显著正相关r=0.983 8,P<0.01.结论8-Br-cAMP和槲皮素联合用药或单独用药均可降低Eca-109细胞的多药耐受性而提高药物的敏感性,可有利于提高临床疗效.     

8-Br-cAMP和槲皮素联合应用对Eca-109细胞增变基因表型的影响

目的:探讨8-Br-cAMP和槲皮素联合应用对Eca-109细胞增变基因表型变动的影响。方法:将Eca-109细胞分为4组:①8-Br-cAMP组(Br组);②槲皮素组(Q组);③(Br+Q)组;④不加药物的对照组(C)。同时培养48 h,对以上4组细胞制备细胞滴片及硝酸纤维素膜(NCM)滴膜2种标本,分别进行Bcl-2、Bax、XRCC1、MRP和POLB的免疫组化和免疫斑点印迹实验,并以TUNEL法检测各组细胞凋亡率。结果:细胞凋亡率,C组为4%,(Br+Q)组为70%,Br组为42%,Q组为35%,(Br+Q)组>Br组或Q组>C组,(P<0.001)。Br、Q及(Br+Q)组与对照组相比,Bcl-2-IR及XRCC1-IR皆低于C组(P<0.001),而Bax-IR则高于C组(P<0.001);Br组:Q组或Br组:(Br+Q)组(P>0.05)。Bcl-2-IR与XRCC1-IR呈显著正相关,与Bax-IR和Bax-IR与XRCC1皆呈显著负相关。C组的MRP-IR、POLB-IR强于Br组、Q组或(Br+Q)组(P<0.01。)TLC扫描OD值:C组MRP-IR高于Br、Q或(Br+Q)组约3倍;POLB-IR高于Br、Q或(Br+Q)组约2倍;MRP与POLB呈显著正相关r=0.9838(P<0.01)。结论:Br与Q联合用药或单独用药皆可下调Bcl-2,XRCC1,MRP与POLB的表达,上调Bax的表达,提示Br与Q联合用药与单独用药皆可下调Eca-109细胞的增变基因表型。     

Effects of Oxymatrine on the Apoptosis of Human Esophageal Carcinoma Eca109 Cell Line and Its Mechanism

The effects of Oxymatrine （Oxy） on the proliferation and apoptosis of human esophageal carcinoma Ecal09 cell line and the mechanism were investigated. The human esophageal carcinoma Eca 109 celis were cultured in vitro. The Oxy-induced apoptosis of Eca 109 cells was assayed by using flow cytometry. The expressions of p-ERKII2, Cyclin D1, p21^waf/cipl, Bax and Bcl-2 were detected by Western blot. Flow cytometry revealed that Oxy could induce the apoptosis of Eca l09 cells. Western blot showed that Oxy of different concentrations suppressed the expressions of p-ERK1/2, Cyclin D1 and Bcl-2, but up-regulated the expression of p21waf/cip1 and Bax, and the ratio of Bax/Bcl-2 was increased. It was suggested the Oxy could induce the apoptosis of Eca l09 cells, which might be related to the upregulation of p21waf/cip1 and the downregulation of p-ERK1/2, Cyclin D1 and p21^waf/cip1. The possible pathway may be related to Bcl-2/Bax.