降胆固醇药物新靶标前蛋白转化酶枯草溶菌素9的研究进展

他汀类药物主要用于降低血低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)以及预防心血管疾病,但其临床疗效和机体的耐受性尚存在不稳定性.人类前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)属于前蛋白转化酶家族,主要由肝脏产生并分泌人血,可促进肝脏中低密度脂蛋白受体(LDLR)的降解,从而参与调控血LDL-C水平.人群中PCSK9的功能获得型或缺失型基因突变与血LDL-C含量、心血管疾病患病率密切相关.可通过负反馈机制上调PCSK9,促进LDLR的降解,从而降低他汀类药物的疗效.因此,抑制PCSK9活性可望成为治疗高胆固醇血症的一种新的有效方法.本文主要综述PCSK9调节胆固醇代谢及其临床应用的研究进展.     

前蛋白转化酶枯草溶菌素9单克隆抗体的研究进展

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)可与低密度脂蛋白(LDL)受体结合,将其运送至溶酶体进行降解,从而防止LDL受体再循环至肝细胞膜表面,增加LDL胆固醇(LDL-C)。PCSK9的功能获得型突变可明显增加血LDL-C水平,且与早期动脉粥样硬化相关,而功能丧失型突变可致低血LDL-C水平以及冠心病的发生率。PCSK9单克隆抗体可使LDL-C下降50%~70%,对患者具有良好的耐受性,且无明显的药物相关毒性,但对其是否可以降低心血管事件有待进一步研究。     

MT1-MMP和PCSK9的联合抑制上调LDLR表达的研究

目的：探究Ⅰ型膜基质金属蛋白酶(MT1-MMP)和γ-分泌酶或前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)对低密度脂蛋白受体(LDLR)表达的影响。方法：应用DsiRNA分别沉默人肝细胞中MT1-MMP和PCSK9的表达并对细胞进行培养，选择DAPT抑制细胞中的γ-分泌酶，实时荧光定量PCR和免疫印迹法分别检测mRNA和蛋白质的表达水平。结果：MT1-MMP与γ-分泌酶或PCSK9的联合抑制可较单独抑制组进一步提高原代肝细胞中LDLR的表达水平；PCSK9^-/-小鼠再感染靶向小鼠MT1-MMP的shRNA腺相关病毒(AAV),会增加肝脏LDLR水平，降低血浆中的胆固醇浓度。结论：MT1-MMP和γ-分泌酶或PCSK9协同调节LDLR的表达。联合抑制MT1-MMP和γ-分泌酶或PCSK9可提高LDLR表达，并降低血浆中LDL胆固醇的水平，从而降低因现有手段无法有效控制血浆胆固醇水平的患者发生心血管病的风险。     

家族性高胆固醇血症的药物治疗现状和进展

家族性高胆固醇血症(FH)是基因突变所致血脂紊乱,常见的致病基因有低密度脂蛋白(LDL)受体基因、载脂蛋白B(ApoB)基因、前蛋白转换酶枯草溶菌素9型(PCSK9)基因等.FH是早发冠心病的重要原因.诊断主要根据血清LDL-C升高、早发冠心病、黄色瘤、基因检查结果等.目前,治疗FH的药物主要是他汀类,可联合胆固醇吸收抑制剂或胆汁酸螯合剂.近年,多种新型降胆固醇药物已被批准用于FH的治疗,包括PCSK9抑制剂、微粒体甘油三酯转运蛋白(MTTP)抑制剂和ApoB合成抑制剂等.     

家族性高胆固醇血症致病基因PCSK9的研究进展

家族性高胆固醇血症(FH)是一种常染色体单基因显性遗传性疾病,其主要的临床特征为血浆低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平明显升高、肌腱或皮肤黄色瘤、早发冠状动脉粥样硬化和冠状动脉粥样硬化性心脏病等。人类枯草溶菌素转化酶9(PCSK9)基因是FH的致病基因之一。PCSK9通过调节低密度脂蛋白受体在肝脏降解,从而间接调节LDL-C水平。PCSK9基因突变可分为失功能性突变和功能获得性突变,是目前降脂药物的研究热点。     

PCSK9抑制剂与低密度脂蛋白水平的研究进展

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)抑制剂可通过阻断PCSK9-低密度脂蛋白受体(LDL-R)途径介导的LDL-R降解,降低循环中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。目前PCSK9抑制剂已成为心血管领域降脂治疗的热点,已经证明,当作为单一疗法或与他汀类药物治疗一起给药时,PCSK9抑制剂能使LDL-C水平显著降低。多种PCSK9抑制剂已进入了临床试验阶段。本文将对PCSK9分子结构及其作用机制、PCSK9抑制剂的分类及相关临床研究进展进行综述,评价PCSK9抑制剂对降低LDL-C水平的有效性及应用的安全性。     

家族性高胆固醇血症(FH)致病基因的研究进展

 家族性高胆固醇血症(familial hypercholesterolemia,FH)的临床特征为血总胆固醇升高,尤其是低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-c)升高,沉积于组织,形成皮肤或肌腱黄色瘤,导致动脉粥样硬化甚至早发冠心病。FH的发病机制为LDL受体(LDL receptor,LDLR)或apoB基因突变引起LDL受体途径功能缺陷,主要为常染色体显性遗传疾患,具有基因剂量效应;部分患者为常染色体隐性遗传,机制为LDL受体衔接蛋白1(LDL receptor adaptor protein 1,LDLRAP1)失功能型突变,导致LDL内化活性降低。罕见的人类枯草溶菌素转化酶9 (proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)发生功能型突变也可引起严重的FH表型。PCSK9通过降解LDLR蛋白间接下调LDL受体途径,其失功能突变可致血浆LDL水平下降。因此PCSK9是目前降脂药物的研究热点。     

基于CRISPR/Cas9技术PCSK9基因敲除小鼠模型的构建及表型验证

目的 基于CRISPR/Cas9技术构建前枯草杆菌蛋白原转换酶9(Preprotein convertase subtilisin/kexin type9,PCSK9)基因敲除小鼠模型并对其表型进行初步验证。方法 利用非同源末端连接(NHEJ)修复引入突变的方式,针对PCSK9基因靶序列设计单链向导RNA(sgRNA),将sgRNA和Cas9 mRNA显微注射到C57BL/6J小鼠受精卵,获得F0代敲除小鼠,通过繁育及基因型鉴定获得PCSK9基因敲除(PCSK9 KO)纯合子小鼠。采用PCR方法对PCSK9 KO小鼠进行基因鉴定,Western Blot检测肝组织PCSK9及低密度脂蛋白受体(LDL-R)蛋白的表达,同时检测心、脑、肾、脂肪组织中的PCSK9蛋白表达水平,q-PCR检测PCSK9的mRNA表达水平。采用酶法检测血清中总胆固醇(TC)及甘油三酯(TG)水平。结果 PCR产物凝胶电泳以及PCSK9蛋白及mRNA表达结果表明成功获得全身性PCSK9基因敲除小鼠,肝组织LDL-R(3.42±0.56)蛋白表达显著增高。与WT组相比,PCSK9小鼠血清TC(90.75±17.81...     

PCSK9在高胆固醇血症中的作用研究进展

高胆固醇血症以血中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平升高为特征,PCSK9基因是近几年新发现的与血脂代谢密切相关的基因位点。细胞实验提示,PCSK9主要通过降解低密度脂蛋白受体,升高LDL-C水平;人群中PCSK9可以发生两种突变:功能获得型和功能缺失型,分别引起高胆固醇血症和低胆固醇血症。随着人们对PCSK9研究的不断深入,进一步完善了对胆固醇代谢的认识,抑制PCSK9对脂质代谢紊乱相关疾病的防治有重要意义。     

PCSK9在脂代谢调节中作用的研究进展

血清中低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)浓度与冠心病的发生密切相关,而LDL-C主要是通过肝细胞表面的LDL受体(LDL receptor,LDLR)清除。前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin kexin type 9,PCSK9)可结合肝细胞表面LDLR并与其共同内吞入内体,介导LDLR进入溶酶体使其降解,从而参与血胆固醇的调节,在维持脂代谢稳态中发挥重要作用。目前对PCSK9的研究已取得一定的进展,但其发挥作用的确切机制还不是很清楚,在本文中作者就PCSK9在脂代谢调节中的作用以及其发挥作用的分子机制作一综述。     

有氧运动对高脂血症大鼠血脂的影响及其机制

目的 探讨有氧运动对高脂血症大鼠血脂的影响及其作用机制。方法 将120只8周龄健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、高脂饮食组、SBC-115076组和有氧运动组,每组30只。正常对照组饲喂标准饲料,其余3组饲喂高脂饲料构建大鼠高脂血症模型;SBC-115076组每周注射前蛋白转化酶枯草溶菌素9（PCSK9）抑制剂SBC-115076（8 mg/kg）1次,连续8周;有氧运动组进行无负重游泳,每周6 d,共持续8周。8周后处死大鼠,采集血液标本,测定血清三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）水平。取胸主动脉标本,经H-E染色观察主动脉病理学改变。取肝组织标本,采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹分析和免疫荧光法检测肝组织中PCSK9、低密度脂蛋白受体（LDLR）和胆固醇调节元件结合蛋白（SREBP）在mRNA和蛋白水平的表达。结果 高脂饮食组大鼠血清TG、TC和LDL水平高于对照组,HDL水平低于对照组（P<0.01）;SBC-115076组和有氧运动组大鼠血清TG、TC、LDL水平低于高脂饮食组,HDL水平高于高脂饮食组（P<0.01）。高脂饮食组大鼠主动脉壁内膜增厚,内皮细胞损伤脱落;与高脂饮食组相比,有氧运动组大鼠主动脉内膜增厚明显减轻,内皮损伤较少。与对照组相比,高脂饮食组大鼠肝组织中PCSK9、SREBP1和SREBP2的mRNA及蛋白表达水平升高,LDLR的mRNA及蛋白表达水平降低（P<0.01）;与高脂饮食组相比,SBC-115076组和有氧运动组大鼠肝组织中PCSK9、SREBP1和SREBP2的mRNA及蛋白表达水平降低,LDLR的mRNA及蛋白表达水平升高（P<0.01）。结论 有氧运动能降低高脂血症大鼠血清TG、TC和LDL水平,升高HDL水平,并减轻主动脉内膜增厚。其机制可能与降低PCSK9和SREBP蛋白的表达,从而解除对LDLR的抑制有关。     

A novel mutation in proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 gene leads to familial hypercholesterolemia in a Chinese family

Background Familial hypercholesterolemia （FH） is an autosomal disorder associated with elevated plasma low density lipoprotein （LDL） levels leading to premature coronary heart disease （CHD）. As a result of long-term hyperlipemia, FH patients will present endarterium thickening and atherosclerosis. In the present study we scanned the related gene of a clinically diagnosed autosomal genetic hypercholesterolemia family for the possible mutations and established eukaryotic expression vector of mutation of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 （PCSK9） gene with gene recombination technique to investigate the contributions of the variation on low density lipoprotein receptor （LDL-R） metabolism and function alternation.Methods Mutation detection was conducted for LDL-R, apolipoprotein B100 （apoB100） and PCSK9 gene with nucleotide sequencing in a Chinese FH family. The full-length cDNA of wild type PCSK9 gene （WT-PCSK9） was obtained from Bel-7402. Site mutagenesis was used to establish the recombinant eukaryotic expression vector carrying pathogenic type of PCSK9 gene and the inserted fragment was sequenced. With the blank vector as control, liposome transfection method was used to transfect the Bel-7402 cells with recombinant plasmid. The expression of LDL-R mRNA was examined by RT-PCR. PCSK9 and the expression of LDL-R protein were determined by Western blotting. Results The G→T mutation at the 918 nucleotide of PCSK9 gene resulted in the substitution of the arginine by a serine at the codon 306 of exon 6. After sequencing, it was confirmed that the inserted fragment of established expression vector had correct size and sequence and the mutant was highly expressed in Bel-7402 cells. There was no significant variation in the levels of LDL-R mRNA. LDL-R mature protein was decreased by 57% after the cells were transfected by WT-PCSK9 plasmid. Mature LDL-R was significantly decreased by 12% after the cells were transfected by R306S mutant as evidenced by gray scale scanning, suggesting that the new mutant R306S can significantly decrease the expression of mature LDL-R protein.Conclusions A novel missense mutation of PCSK9 gene, R306S, was found and the eukaryotic expression vectors of mutant and wild-type of PCSK9 gene were established. There was no significant variation in the levels of LDL-R mRNA. The R306S mutation could significantly lead to the decrease of LDL-R mature protein expression, which might be the pathogenic gene of the FH family.     

重组生长激素对兔血脂及肝脏LDL受体mRNA的影响

目的研究重组生长激素(recombinant growth hormone,rGH)对高胆固醇饮食的新西兰兔的血脂调节作用及rGH对肝脏低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)受体mRNA表达的影响.初步探讨rGH影响血脂的机制.方法①健康新西兰白兔,均为雄性,兔龄4个月,体质量(2.2±0.3)kg,随机分组观察高胆固醇饮食的条件下,rGH对血脂的影响.②RT-PCR技术测定兔肝低密度脂蛋白受体(low density lipoprorein receptor,LDL-R)mRNA的表达情况.结果①rGH组血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)低于对照组(P＜0.01)但对甘油三酯(TG)无明显影响.②rGH组LDL-RmRNA的表达高于对照组(P＜0.01).结论rGH能够有效的降低高胆固醇饮食条件下的TC、LDL-C,2.rGH降血脂的作用,可能与rGH促进LDL-R mRNA表达上调有关.     

HMG-CoA还原酶抑制剂对肾病综合征大鼠肝脏低密度脂蛋白受体表达的影响

目的观察在大鼠肾病综合征模型中使用3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A（HMG-CoA）还原酶抑制剂洛伐他汀（Lovastatin）治疗对肝脏低密度脂蛋白（LDL）受体表达的影响，探讨他汀类药治疗肾病综合征高脂血症的机制。方法大鼠2次尾静脉注射阿霉素建立肾病综合征大鼠模型；采用灌胃法给予大鼠洛伐他汀治疗2周。采用Western blot和RT-PCR技术分别检测LDL受体蛋白和其mRNA在肝脏的表达，同时检测大鼠相关血生化指标。结果肾病综合征大鼠洛伐他汀治疗2周后，血清总胆固醇、LDL胆固醇和三酰甘油以及尿蛋白均显著降低（均P〈0．05），血清白蛋白显著升高（P〈0．05），血肌酐在各组间差异无显著性意义（P〉0．05）；肝脏LDL受体蛋白较肾病综合征组显著增加（P〈0．01）；肝脏LDL受体mRNA水平在各组间差异无显著性意义。结论肾病综合征大鼠经洛伐他汀治疗后，其肝脏LDL受体缺乏得到明显改善，伴随的高脂血症也得到明显改善。     

低剂量内毒素预处理保护内毒素介导的小鼠急性肝损伤及其机理探讨

目的研究低剂量内毒素(LPS)预处理对LPS介导的小鼠急性肝损伤的影响。方法LPS通过腹腔注射小鼠;丁基亚磺酰亚胺（BSO）处理耗尽小鼠肝脏谷胱苷肽(GSH)含量;血浆天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定用全自动生化分析仪;基因表达测定采用RT PCR。结果① 低剂量LPS预处理降低高剂量LPS诱导的小鼠肝功能损伤;② 低剂量LPS刺激肝脏GSH含量升高;LPS预处理组GSH水平显著高于高剂量LPS处理组;③ BSO预处理后,LPS预处理组与高剂量LPS组的血浆ALT和AST水平没有差别;④ LPS处理导致转硫途径关键酶——胱硫醚β合酶活性以及GSH合成途径关键酶——γ 谷氨酰半胱氨酸合成酶表达升高。结论低剂量LPS通过上调肝组织中GSH合成相关基因表达,增加GSH的含量,减轻高剂量LPS诱导的肝脏损伤。     

Caprylic Acid Improves Lipid Metabolism,Suppresses the Inflammatory Response and Activates the ABCA1/p-JAK2/p-STAT3 Signaling Pathway in C57BL/6J Mice and RAW264.7 Cells

Objective This study aimed to investigate the effects of caprylic acid(C8:0) on lipid metabolism and inflammation, and examine the mechanisms underlying these effects in mice and cells.Methods Fifty-six 6-week-old male C57 BL/6 J mice were randomly allocated to four groups fed a highfat diet(HFD) without or with 2% C8:0, palmitic acid(C16:0) or eicosapentaenoic acid(EPA). RAW246.7 cells were randomly divided into five groups: normal, lipopolysaccharide(LPS), LPS+C8:0, LPS+EPA and LPS+cAMP. The s...     

Short-andLong-Term Effects of Xuezhikang(血脂康),An Extract of Cholestin,on Serum Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 9 Levels

Objective:To investigate the short- and long-term effects of Xuezhikang(血脂康,XZK),an extract of Cholestin,on proprotein convertase subtilisin/kexin type 9(PCSK9) level.Methods:Thirty rats were randomly divided into three groups and were given saline,XZK 1,200 mg/kg or lovastatin 10 mg/kg respectively by daily gavage for 3 days(n=10 for each).Sixteen patients without previous iipid-lowering drug treatment for dyslipidemia received XZK 1,200 mg daily for 8 weeks.Fasting blood samples and liver tissue were collected at day 3 for rats,while the blood samples were obtained at baseline and week 8 from patients.The serum PCSK9 and lipid profile were measured.The expression of hepatic low density lipoprotein(LDL) receptor and sterol regulatory element binding protein 2(SREBP-2) were measured by real time-PCR.Results:PCSK9 levels in rats were significantly increased in the XZK and lovastatin groups(P=0.002,P=0.003 vs.control) at day 3,while no significant differences were found in the levels of lipid parameters.PCSK9 levels in patients increased by34%(P=0.006 vs.baseline) accompanied by total cholesterol and LDL-cholesterol decreased by 22%and 28%(P=0.001,P=0.002 vs.baseline).The hepatic mRNA levels of LDL-receptor and SREBP-2 were significantly increased in the XZK and lovastatin groups.Conclusion:XZK has significant impact on PCSK9 in a short- and long-term manner in both rats and humans.Moreover,the data indicated that as lovastatin,XZK increased PCSK9 levels through SREBP-2 pathway.     

丹参酮ⅡA对ApoE基因敲除小鼠肝脏脂质沉积的影响及机制

目的观察丹参酮ⅡA对ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠肝脏脂质沉积及相关基因表达的影响,探讨丹参酮ⅡA抗As作用及可能机制。方法20只ApoE-/-小鼠随机分成模型组、丹参酮ⅡA组,10只C57BL／6J小鼠作为李白对照组。模型组、丹参酮ⅡA组给予高脂饲料喂养,空白对照组给予普通饲料。丹参酮ⅡA组每日灌胃丹参酮ⅡA（30mg／kg）、模型组、空白对照组灌予等量生理盐水灌胃。全自动生化分析仪检测血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C含量。HE和油红O染色观察小鼠肝脏组织结构变化以及脂质沉积情况,RT-PCR法检测肝脏低密度脂蛋白受体（LDL-R）、卯磷脂胆固醇脂酰转移酶（LCAT）基因mRNA水平,Westernblotting法检测肝脏内LDL-R、LCAT蛋白表达。结果与空白对照组相比,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平显著升高,HDL-C水平显著降低,肝脏形成大量脂质沉积,肝脏LDL-R、LCAT基因mRNA和蛋白水平显著下调。与模型组相比,丹参酮ⅡA组小鼠TC、TG、LDL-C水平显著下降,HDL-C水平显著升高,肝脏脂质沉积明显减少,肝脏LDL-R、LCAT基因mRNA和蛋白水平显著上调。结论丹参酮ⅡA具有调节血脂和减少肝脏内脂质沉积的作用,其机制可能与调控LDL-R和LCAT基因表达相关。