基于iTRAQ技术研究丹参酮ⅡA对高脂血症大鼠肝脏蛋白质的影响

目的应用相对和绝对定量同位素标记技术(iTRAQ)研究丹参酮ⅡA对高脂血症大鼠肝脏蛋白质组表达的影响,探讨丹参酮ⅡA对肝脏保护的作用。方法 24只SD大鼠随机分为空白对照组、高脂血症组和丹参酮组,每组8只。空白对照组每日给予普通大鼠饲料喂饲。高脂血症组和丹参酮组给予高脂饲料喂饲,4周后丹参酮组予丹参酮ⅡA磺酸钠10 mg/(kg·d)腹腔注射,空白对照组、高脂血症组给予等体积的磷酸盐缓冲生理盐水腹腔注射。用药8周后检测大鼠血脂、肝功能情况以及肝脏组织形态学变化。分离提取肝脏总蛋白,以iTRAQ试剂标记后进行质谱检测并以软件分析差异表达的蛋白质,用Western blot方法验证部分差异蛋白的表达趋势。结果与空白对照组比较,高脂血症组血清TC、TG、LDL-C、ALT、AST水平升高(P0.01),HDL-C水平降低(P0.01);与高脂血症组比较,丹参酮组血清中ALT、AST水平降低(P0.05)。iTRAQ技术分析发现:丹参酮组肝脏中CES1、Apoa1、Acots2、3-KAT及细胞色素P450家族Cyp3a2、Cyp3a18、Cyp4a3、Cyp2b2、Cyp2c23这9个差异蛋白表达量上调,Tkt及eNT表达下调。Western blot验证差异蛋白CES1、Apoa1、Acots2变化趋势与蛋白质组结果相一致。结论丹参酮ⅡA可能通过促进胆固醇逆向转运、脂肪酸氧化,改善肝脏代谢功能,减少肝脏脂质沉积,达到其肝脏保护作用。     

基于AKT/GSK3-β/SNAIL 通路探讨黄芪甲苷对心力衰竭心肌纤维化小鼠的保护作用

目的基于AKT/GSK3-β/SNAIL 通路探讨黄芪甲苷对心力衰竭（Heart Failure,HF）心肌纤维化小鼠的保 护作用。方法将40 只雄性C57BL/6J 小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷组（80 mg·kg-1）、曲西瑞宾 组（1 mg·kg-1,AKT 抑制剂）及黄芪甲苷（80 mg·kg-1）+SC79（5 mg·kg-1,AKT 激动剂）组,每组8 只。采用主动 脉弓缩窄术复制心力衰竭小鼠模型。模型复制前,曲西瑞宾组给予腹腔注射给药,每日1 次,连续1 周;模型 复制成功后,黄芪甲苷组给予灌胃给药,每日1 次,连续4 周;黄芪甲苷+SC79 组采用腹腔注射联合灌胃给 药,模型复制前腹腔注射SC79（5 mg·kg-1）每日1 次,连续1 周,模型复制成功后以黄芪甲苷（80 mg·kg-1）灌 胃,每日1 次,连续4 周。采用心脏彩超检测小鼠心功能,采集左心室射血分数（LVEF）和左室短轴缩短 率（LVFS）;采用Masson 染色法检测小鼠心肌组织纤维化情况;采用天狼星红染色法检测小鼠血管及间质内胶 原纤维沉积情况;采用Western Blot 法检测小鼠心脏组织CD31、α-SMA、AKT、GSK3-β、pGSK3-β、SNAIL 蛋白表达情况。结果与假手术组比较,模型组小鼠的LVEF、LVFS 水平显著降低（P＜0.01）,心肌纤维化面 积显著增加（P＜0.01）,血管周围及间质的胶原纤维沉积显著增加（P＜0.01）,CD31 蛋白表达水平明显下 降（P＜0.05）,α-SMA、AKT、GSK3-β、pGSK3-β、SNAIL 蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。与模型组比 较,黄芪甲苷组和曲西瑞宾组的上述各项检测指标均得到明显逆转（P＜0.05,P＜0.01）,黄芪甲苷+SC79 组的 指标变化均不明显（P＞0.05）。结论黄芪甲苷可能通过AKT/GSK3-β/SNAIL 通路抑制内皮间质转化,从而抑 制心肌纤维化,改善心力衰竭。     

补肾健脾方对尾部悬吊大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响

目的:观察补肾健脾方对尾部悬吊大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化能力的影响。方法:大鼠随机分为正常组、悬吊组、补肾健脾方高、中、低剂量组共5组。除正常组外,其余各组大鼠头低位-30度尾部悬吊连续21 d模拟失重,后3组大鼠从实验第1天开始分别按剂量11.4,5.7,2.8 g·kg-1·d-1给予补肾健脾方ig 21 d,其余各组大鼠ig等容积的生理盐水。全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,并进行成脂分化诱导,油红O染色法检测脂滴形成情况,Real Time PCR法和Western bolt法分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA和蛋白表达,在成脂诱导分化的第7,14,21天分别检测细胞内甘油三酯(TG)含量。结果:较正常组,悬吊组大鼠BMSCs经成脂诱导后7,14,21 d TG含量均明显升高(P0.01),成脂诱导21 d成脂能力,PPARγmRNA和蛋白表达明显增强(P0.01);较悬吊组,补肾健脾高、中、低剂量组大鼠BMSCs经成脂诱导7,14,21 d后TG含量降低(P0.01,P0.05),经成脂诱导21 d后成脂能力均明显减弱(P0.01),PPARγmRNA和蛋白表达减少(P0.01,P0.05);较补肾健脾中剂量组,补肾健脾高剂量组大鼠BMSCs经成脂诱导14,21 d后TG含量降低(P0.05),经成脂诱导21 d后补肾健脾高剂量组成脂能力均减弱(P0.05),PPARγmRNA和蛋白表达均减少(P0.05,P0.01),补肾健脾低剂量组PPARγ蛋白表达增多(P0.05)。结论:补肾健脾方具有抑制尾部悬吊大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的作用,以补肾健脾方高剂量作用为优,其机制可能与下调PPARγ表达有关。     

黄芪甲苷对棕榈酸诱导的小鼠RAW264.7细胞铁死亡的调控作用

目的：探讨黄芪甲苷（astragaloside IV,ASIV）对棕榈酸（palmitic acid,PA）诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞铁死亡的调控作用。方法：选取对数生长期的RAW264.7细胞,加入终浓度为0、50、100、150和200 mg/L的ASIV,或0、100、200和400μmol/L的PA,细胞成像仪培养48 h后计数分析,观察ASIV和PA对RAW264.7细胞活力的影响。再将RAW264.7细胞分为对照组、PA(200μmol/L)组和PA(200μmol/L)+ASIV(100 mg/L)组。油红O染色观察RAW264.7细胞脂质沉积情况;细胞免疫荧光染色观察RAW264.7细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)及铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)的蛋白表达水平;RT-qPCR和Western blot测定GPX4、FTH1、P53和溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)的mRNA和蛋白表达水平;活性...     

单侧全肺切除手术的护理

目的：做好全肺切除术前术后护理,提高病人愈后生命质量。方法：结合临床76例不同性别、年龄、部位、不同手术方式病人的心理状态进行术前,术后心理疏导和针对性重点护理。结果：总有效率80%。结论：通过对全肺切除术病人有计划、有步骤、有针对性的施护方法,减轻了病人的心理负担,减少了术后肺不张、感染等并发症的发生。     

丹参酮Ⅱ A对Apoe基因敲除动脉粥样硬化小鼠主动脉TNF-α/p38MAPK/NF-κ B/RBP4信号通路变化研究

目的 :通过观察丹参酮Ⅱ A对Apoe基因敲除(ApoE-/-)小鼠主动脉肿瘤坏死因子-α(TNF-α)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)/血清核因子-κ B(NF-κ B)/视黄醇结合蛋白(RBP4)信号通路变化,探讨丹参酮Ⅱ A对动脉粥样硬化炎症反应过程的影响及其作用机制。方法 :将20只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、丹参酮Ⅱ A组,每组10只,空白对照组选取具有相同遗传背景的同龄野生型C57BL/6J小鼠10只;模型组与丹参酮Ⅱ A组均给予高脂饲料喂养8周,空白对照组给予普通饲料喂养;丹参酮Ⅱ A组每日灌胃丹参酮Ⅱ A(30 mg/kg),空白对照组与模型组给予等量生理盐水灌胃,8周后,分离3组小鼠血清,分离主动脉,分别保存于4%多聚甲醛和-80℃冰箱。Elisa法检测小鼠血清TNF-α、RBP4水平变化,全自动生化分析仪检测血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C水平,HE染色法观察主动脉组织形态学变化,Western blot法检测TNF-α、p38MAPK、NF-κ B、RBP4蛋白表达,RT-PCR法检测主动脉TNF-α、NF-κ B、RBP4基因表达情况。结果 :与空白对照组相比,模型组小鼠血清中TG、TC、LDL-C水平显著升高(P0.05),HDL-C水平显著降低(P0.05);主动脉管腔内可见较大的AS斑块形成;TNF-α、p38MAPK、NF-κ B、RBP4蛋白和TNF-α、NF-κ B、RBP4基因m RNA水平显著升高(P0.05)。与模型组相比,丹参酮Ⅱ A组TG、TC、LDL-C水平显著降低(P0.05),HDL-C水平显著升高(P0.05);主动脉管腔内的AS斑块面积显著减小;TNF-α、p38MAPK、NF-κ B、RBP4蛋白和TNF-α、NF-κ B、RBP4基因m RNA水平显著降低(P0.05)。结论 :丹参酮Ⅱ A具有调节血脂和抗AS的作用,其机制可能与其参与TNF-α/p38MAPK/NF-κ B/RBP4信号通路调控有关。     

基于网络药理学的二陈汤治疗冠心病分子机制研究

目的应用网络药理学研究二陈汤治疗冠心病的作用靶点、代谢物、信号通路等,从而揭示其从痰瘀论治冠心病的分子机制。方法应用中药系统药理学技术平台(TCMSP)、中药潜在靶点数据库(TCM-PTD)、中药综合数据库(TCMID),找到二陈汤的主要成分,并通过ChemMapper数据库进行靶点预测,筛选成分靶点。通过TTD、Drugbank、DisGeNET数据库进行检索,获得冠心病相关的疾病靶点。将疾病靶点与药物靶点进行交集,筛选得到疾病-药物成分共同靶蛋白。应用STRING平台构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络模型。应用Metabo Analyst数据库将上述筛选出成分进行代谢物分析,筛选出主要代谢物。采用Cytoscape的MetScape及ClueGO插件分别分析二陈汤治疗冠心病相关靶点的基因功能及代谢通路,构建二陈汤主要药物成分-代谢物-靶点-信号通路拓扑网络。结果经数据库分析共筛选出二陈汤的8种主要成分及与冠心病相关的靶点56个,同时筛选出与二陈汤主要成分相关的代谢物13个及相关信号通路13个;在此基础上构建了二陈汤的成分-靶点、成分-冠心病靶点及相关代谢及信号通路的共表达网络,发现二陈汤可能通过保护血管内皮、抗氧化应激、抗炎修复等多靶点、多途径发挥对冠心病的治疗作用。结论从多角度探索了二陈汤从痰瘀论治冠心病的潜在分子机制,揭示了二陈汤的药理作用,为其后续临床疗效评价指标的筛选提供了研究方向。     

化瘀祛痰方对脾虚型高脂血症大鼠肝脏SREBP-2信号通路的干预作用

目的探讨化瘀祛痰方对脾虚型高脂血症大鼠肝脏固醇反应元件结合蛋白-2（sterol regulatory element binding protein-2,SREBP-2）信号通路的干预作用。方法100只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、高脂血症组、高脂血症治疗组、脾虚型高脂血症组、脾虚型高脂血症治疗组,每组20只。空白对照组给予普通大鼠颗粒饲料喂养;高脂血症组和高脂血症治疗组给予高脂饲料;脾虚高脂血症和脾虚高脂血症治疗组采用劳倦过度和饮食不节进行造模,单日除饲喂高脂饲料外,予精炼猪油灌胃,每次3 mL,每日2次,双日喂食甘蓝不限量,造模时间30天。高脂血症治疗组和脾虚高脂血症治疗组灌胃化瘀祛痰方煎剂（20 mL/kg）,1 次/天,连续 30天。全自动生化分析仪检测血清TC、TG、LDL-C、HDL-C、血清淀粉酶（AMY）水平,间苯三酚法测定D-木糖排泄率,HE染色观察肝脏形态变化,油红O染色观察肝脏脂质沉积,实时定量反转录-聚合酶链反应（Real time PCR）及Western blotting技术检测HMGCR、CYP7A1、LDL-R、SREBP-2 mRNA和蛋白表达。结果与空白对照组比较,高脂血症组及脾虚型高脂血症组血清TC（mmol/L,1.84±0.19,2.23±0.43）、LDL-C水平（mmol/L,0.99±0.24;1.13±0.56）显著升高（P<0.05）,HDL-C水平（mmol/L,0.41±0.66;0.41±0.11）及AMY活性（mmol/L,351±45;153±30）显著降低（P<0.05）,尿D-木糖排泄率（ng/mL,26.9±2.1;15.0±1.7）显著降低（P<0.05）,肝细胞形成脂质沉积,胞浆内多出现脂肪空泡,肝脏CYP7A1、HMGCR、LDL-R、SREBP-2 mRNA及蛋白表达显著降低（P<0.01）。与高脂血症组比较,脾虚高脂血症大鼠血清TC、LDL-C水平显著升高（P<0.05）,AMY及尿D-木糖排泄率显著降低（P<0.01）,肝脏形成大量脂质沉积,肝细胞萎缩明显,肝脏CYP7A1、LDL-R、SREBP-2 mRNA及蛋白表达降低（P<0.01, P<0.05）;高脂血症治疗组TC、LDL-C含量降低（P<0.05）,HDL-C含量、AMY活性及D-木糖排泄率升高（P<0.05）,CYP7A1、LDL-R、SREBP-2 mRNA及蛋白表达升高（P<0.01）。与脾虚高脂血症组比较,脾虚高脂血症治疗组TC含量降低（P<0.05）,HDL-C含量、AMY活性及D-木糖排泄率升高（P<0.05）,CYP7A1、LDL-R、SREBP-2 mRNA及蛋白表达升高（P<0.01）。相应治疗组变化一致。结论脾虚加重血清TC水平异常及肝脏脂质沉积,可能与调控SREBP-2信号通路中LDL-R、HMGCR、CYP7A1基因表达有关,化瘀祛痰方可调控该通路,发挥干预TC代谢失常作用。     

滋阴息风方对自发性高血压大鼠肾脏JAK/STAT信号通路的影响?

目的观察滋阴息风方对自发性高血压大鼠血压及肾脏JAK/STAT信号通路的影响。方法随机将40只SHR大鼠分为模型组、中药低剂量组、中药高剂量组和复方罗布麻组,10只具有相同背景的SKY大鼠做正常组。治疗组给予对应药物灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃,连续给药42 d,分别于给药后第0、7、14、21、28、35、42天采用小动物无创血压仪检测各组大鼠收缩压血压变化情况。实验第42天,于灌胃2 h后取材,全自动生化分析仪检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)含量。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肾脏p-JAK1、p-STAT1蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血压、Cr、BUN、UA、IL-6、TNF-α显著升高,经治疗后,各项指标均有显著改善(P0.05、P0.01),以中药高剂量和复方罗布麻效果较为明显。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肾脏p-JAK1、p-STAT1蛋白表达显著升高(P0.01),与模型组比较,各治疗组p-JAK1、p-STAT1蛋白表达均有不同程度下降(P0.05,P0.01)。结论滋阴息风方对自发性高血压大鼠降压作用明显,可明显改善高血压肾脏功能损伤,具体机制可能是通过抑制JAK/STAT信号通路的激活实现。