柱前衍生高效液相色谱法测定瓜蒌皮中游离氨基酸含量

目的:建立柱前衍生高效液相色谱法(RP-HPLC)测定瓜蒌皮中游离氨基酸含量的方法。方法 :采用异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生试剂,高效液相色谱法色谱柱为(Atlantis dC18 Column(3μm,4.6 mm×150 mm,Waters),流动相A:甲醇-乙腈(1∶2),流动相B:0.15 mol/L乙酸钠,流速1.0mL/min,梯度洗脱,柱温35℃,吸收波长254 nm。结果:各种氨基酸均能达到基线分离。结论:柱前衍生高效液相色谱法作为瓜蒌皮药材中游离氨基酸的测定手段之一,准确可靠。     

柱前衍生高效液相色谱法测定蚕蛹提取物中氨基酸含量

目的 用柱前衍生法测定蚕蛹提取物中氨基酸含量,方法以磺酰氯二甲胺偶氮苯(DABS-CL)作衍生剂,采用柱前衍生高效液相色谱法(RP-HPLC),YMC-Pack ODS-A柱(250mm×4.6mm,5mm),流动相A为25mol/L KH2PO2,流动相B为乙腈:甲醇=70:30;流速1.5 ml/min梯度洗脱,检测波长436nm,柱温35℃,结果各种氨基酸均具有良好的线性关系(相关系数,=0.9989～0.9999)、精密度(RSD<1.50%)、稳定性(RSD<3.50%)、平均回收率(98.83%～107.83%),测定蚕蛹提取物中氨基酸含量,其含有人体必需氨基酸占总氨基酸含量的40%以上,结论该方法简便实用,分析结果准确可靠,适用于动植物中富有氨基酸含量的测定.     

基于HPLC指纹图谱及聚类分析评价市售阿胶的质量

目的:基于高效液相色谱(HPLC)指纹图谱及聚类分析对市售阿胶进行质量评价,以期探索可靠的质量控制方法。方法:收集市售的10批阿胶商品药材,采用盐酸水解法制备水解氨基酸样品溶液,以异硫氰酸苯酯(PITC)和三乙胺柱前衍生化后进行HPLC分析。采用Welch ultimate amino acid(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相A为0.1 mol/L醋酸钠溶液(调pH至6.5)-乙腈(93∶7)、流动相B为乙腈-水(80∶20),流速为1.0 ml/min,检测波长为254 nm,柱温为40℃。经梯度洗脱,得到各批阿胶中氨基酸含量,测定不同批次阿胶药材中17种氨基酸类成分的含量;使用相似度评价软件及SPSS 21.0软件进行相似度分析和聚类分析(HCA)。结果:阿胶中氨基酸衍生溶液36 h内保持稳定,17种氨基酸在线性范围内相关系数r均0.995,加样回收率在85.8%~120.2%;10批阿胶的氨基酸指纹图谱具有专属性,相似度均0.95,聚类分析结果与相似度结果相似。结论:该方法可靠,操作简便,精密度和重复性良好,可用于阿胶中17种水解氨基酸含量测定;10批阿胶中所含的氨基酸分布及比例比较稳定,将指纹图谱与聚类分析运用于不同来源阿胶的质量鉴别,可为药材特征评价方法的建立提供依据。     

AccQ-Tag法测定复方氨基酸注射液(18AA-Ⅴ)中17种氨基酸的含量

目的建立测定复方氨基酸注射液(18AA-Ⅴ)中17种氨基酸含量的方法。方法采用AccQ-Tag法,以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯(AQC)为衍生试剂,与复方氨基酸注射液(18AA-Ⅴ)中17种氨基酸柱前衍生,用Waters 2695 HPLC仪器,AccQ-TagTM柱,以醋酸钠(pH4.95)缓冲液为流动相A,乙腈为流动相B,水为流动相C进行梯度洗脱,检测波长为248 nm,柱温为37℃,进样量为5μL。结果17种氨基酸的线性回归方程r值为0.999 6~0.999 9(n=5),平均回收率为93.3%~104.4%(RSD值为0.88%~3.05%,n=6)。结论本法快速,简便,结果准确。     

柱前衍生化反相高效液相色谱法测定蝉蜕中3种氨基酸含量

目的 建立柱前衍生化反相高效液相色谱法测定蝉蜕中天冬氨酸、酪氨酸和缬氨酸3种氨基酸含量的方法。方法 采用酸水解法制备氨基酸样品溶液,以异硫氰酸苯酯柱前衍生化后进行高效液相色谱分析。采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm),梯度洗脱,流动相A为0.1 mol/L醋酸钠缓冲液- 乙腈(93∶7),流动相B为乙腈- 水(4∶1),流速1.0 mL/min,柱温为43 ℃,检测波长254 nm,进样量20 μL。结果 氨基酸衍生溶液在36 h内保持稳定,3种氨基酸在线性范围内峰面积与浓度的相关系数均大于0.999 0,加样回收率(n＝6)分别为95.62%、101.26%和100.00%。结论 所建立的检测方法稳定可靠,精密度和重复性良好,可用于蝉蜕中天冬氨酸、酪氨酸、缬氨酸含量测定。     

水牛角与羚羊角的HPLC法鉴别

建立一种鉴别水牛角与羚羊角药材的质控方法。采用OPA柱前衍生反相高效液相色谱法,色谱柱为HP Hypersil ODS柱(125 mm×4.6mm×5μm),以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。流动相A:8.0 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2),含φ=0.3％四氢呋喃;流动相B:8.0 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2)+甲醇+乙腈(50+35+15)。线性梯度洗脱;荧光检测器,Ex=340nm,Em=450 nm。结果水牛角与羚羊角药材在氨基酸的含量上有明显差异。本文所建立的方法简便,重现性好,可用于水牛角与羚羊角药材的鉴别。     

HPLC柱前衍生法测定谷丙甘氨酸咀嚼片含量

目的建立谷丙甘氨酸中谷氨酸、丙氨酸及甘氨酸的高效液相分析方法,并用该方法测定咀嚼片中3种氨基酸的含量,为该制剂的质量标准制定提供依据.方法谷丙甘氨酸咀嚼片中3种氨基酸含量测定采用异硫氰酸基苯酯柱前衍生化高效液相色谱法.色谱条件:色谱柱为Inertsil ODS-3V(4.6mm×250mm,5μm);流动相A为0.1mol/L醋酸钠-醋酸缓冲液(pH6.5)/乙腈(93:7),流动相B为蒸馏水/乙腈(20:80)二元梯度洗脱分离;检测波长为254nm;流速为1ml/min;柱温为40℃.外标法计算3种氨基酸的含量.结果谷丙甘氨酸咀嚼片中谷氨酸、丙氨酸及甘氨酸分离度良好,在所考查的浓度范围内浓度对峰面积线性回归r》0.99,平均回收率为98.7%,日内及日间RSD＜1.3%,三批样品中3种氨基酸的含量均在95%～105%之间.结论用HPLC柱前衍生方法可测定谷丙甘氨酸制剂中谷氨酸、丙氨酸及甘氨酸含量.     

AccQ—Tag法测定复方氨基酸注射液（18AA—V）中17种氨基酸的含量

目的建立测定复方氨基酸注射液（18AA—V）中17种氨基酸含量的方法。方法采用AccQ—Tag法，以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯（AQC）为衍生试剂，与复方氨基酸注射液（18AA—V）中17种氨基酸柱前衍生，用Waters2695 HPLC仪器，AccQ—Tag^TM柱，以醋酸钠（pH4．95）缓冲液为流动相A，乙腈为流动相B，水为流动相C进行梯度洗脱，检测波长为248nm，柱温为37℃，进样量为5止。结果17种氨基酸的线性回归方程r值为0．9996～0．9999（n=5），平均回收率为93．3％～104．4％（RSD值为0．88％～3．05％，n=6）。结论本法快速，简便，结果准确。     

柱前衍生化HPLC测定中药材氨基酸的含量

目的:建立中药材有效成份氨基酸柱前衍生HPLC分析测定方法。方法:从常见中药材党参和山楂中提取氨基酸,邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生,反相高效液相色谱分离测定,以保留时间定性,面积外标法定量。结果:水解温度108℃,提取24 h,可有效提取药材中的氨基酸;梯度洗脱程序为(t,C%):(t:保留时间C:甲醇):(0,0);(9,30);(16,45);(25,60);(28,65);(32,80),二种药材中的十六种氨基酸得到较好分离和定性定量结果,其中天冬氨酸和胱氨酸的平均加样回收率分别为101.0%和94.4%。结论:采用HPLC柱前衍生分离分析党参和山楂中十六种氨基酸的方法灵敏、简便、快捷、高效,适于推广应用,可为解决中药材氨基酸分离测定难题提供参考。     

金铁锁中3-O-6′-O-甲基-β-D-葡萄糖醛酸丝石竹苷的含量测定

目的:研究金铁锁提取物中3-O-6′-O-甲基-β-D-葡萄糖醛酸丝石竹苷的含量测定方法。方法:金铁锁根粉乙醇提取,经大孔吸附树脂、硅胶及RP-C8、RP-C18反相硅胶反复柱层析,根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定结构;HPLC法对其含量及纯度进行测定:色谱柱为Lichrospher 100 RP-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度:0~5 min,乙腈15%~20%;5~55 min,乙腈20%~55%;55~65 min,乙腈55%~85%;65~90 min,乙腈85%。检测波长210 nm,流速0.5 mL/min,柱温30℃。结果:所制备的3-O-6-′O-甲基-β-D-葡萄糖醛酸丝石竹苷的纯度为98.38%。对金铁锁原药材进行含量测定,含量为3.75%,线性范围0.615~3.712μg(r=0.999 7),平均加样回收率100.4%,RSD为0.69%(n=6)。结论:该法灵敏、准确可靠,制得的化合物可作为衡量金铁锁提取物质量的依据。     

柱前衍生HPLC测定阿胶中17种水解氨基酸含量

目的 建立柱前衍生高效液相色谱法(HPLC)同时测定阿胶中17种水解氨基酸含量的方法.方法 用6 mol/L盐酸溶液水解阿胶中的氨基酸,以异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂;用Hypersil BDS C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为254nm,柱温为30℃.结果 17种氨基酸在60 min内均可得到很好的分离,回收率为97.4％～1 00.1％,RSD为1.6％～3.4％.结论 建立的方法可靠,可用于阿胶中17种水解氨基酸的含量测定.     

四物汤中阿魏酸含量的测定条件研究

目的 :分析测定四物汤中阿魏酸含量的最佳条件。方法 :采用高效液相色谱法测定当归药材提取液中阿魏酸的含量,分别进行对照品溶液的制备及线性关系的考察、供试品溶液的稳定性试验、精密度试验及重复性试验,并分析试验结果。结果与结论 :四物汤中的阿魏酸在流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(25:75);流速为1m L·min-1;检测波长为316nm;柱温为25℃时峰型良好。结论 :在流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(25:75);流速为1m L·min-1;检测波长为316nm;柱温为25℃的条件下对四物汤中的阿魏酸进行含量测定和方法学考察的效果较好,简便易行。     

柱前衍生化HPLC测定大鼠血浆和脑组织中与抑郁症相关的12种氨基酸

建立一种使用9,10-蒽醌-2-磺酰氯作为衍生化试剂的柱前衍生化HPLC法,用于测定大鼠血浆和脑组织中与抑郁症相关的12种氨基酸。血浆和脑组织样本经乙腈沉淀蛋白后,加入Kolthoff缓冲液(pH 8.8)和衍生化试剂,室温下反应5 min后进行色谱分析。采用Lichrospher C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-20 mmol/L醋酸铵缓冲液(pH 7.5),梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;柱温:35℃;检测波长:254 nm。12种氨基酸在各自的浓度范围内线性良好。本方法灵敏准确、专属性高,可用于大鼠血浆和脑组织中与抑郁症相关的氨基酸的测定。     

金铁锁中3-O-6′-O-甲基-β-D-葡萄糖醛酸丝石竹苷的含量测定

目的研究金铁锁提取物中3-O-6'-O-甲基-β-D-葡萄糖醛酸丝石竹苷的含量测定方法.方法金铁锁根粉乙醇提取,经大孔吸附树脂、硅胶及RP-C8 、RP-C18反相硅胶反复柱层析,根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定结构;HPLC法对其含量及纯度进行测定色谱柱为Lichrospher100 RP-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度0～5 min,乙腈15%～20%;5～55 min,乙腈20%～55%;55～65 min,乙腈55%～85%;65～90 min,乙腈85%.检测波长210 nm,流速0.5 mL/min,柱温30 ℃.结果所制备的3-O-6'-O-甲基-β-D-葡萄糖醛酸丝石竹苷的纯度为98.38%.对金铁锁原药材进行含量测定,含量为3.75%,线性范围0.615～3.712 μg(r=0.999 7),平均加样回收率100.4%,RSD为0.69%(n=6).结论该法灵敏、准确可靠,制得的化合物可作为衡量金铁锁提取物质量的依据.     

异硫氰酸苯酯法测定清开灵注射液中氨基酸的含量

目的 建立准确测定清开灵注射液中氨基酸含量的方法.方法 采用异硫氰酸苯酯为衍生化试剂,清开灵注射液衍生化反应后,进行HPLC分析.色谱柱为Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A为0.1 mol/L醋酸钠-乙腈(pH 6.5) (93∶7),流动相B为乙腈-水(4∶1),梯度洗脱,流速为1 mL/min;检测波长为254 nm.结果 该方法可以对清开灵注射液中20种氨基酸准确定量,其浓度在0.019 ～24.855 g/L范围内,线性关系良好(r=0.999 7～0.999 9).方法重复性的RSD(％)在0.766％ ～4.49％之间;20种氨基酸的加样回收率在92.2％ ～ 106.8％之间.结论 该方法准确、可靠、灵敏,可用于清开灵注射液中氨基酸的含量测定.     

邻苯二甲醛-9-氯甲酸芴甲酯柱前衍生HPLC法测定血必净注射液中氨基酸

摘 要：目的 通过建立HPLC分析法测定血必净注射液中氨基酸,为提高中药注射液质量标准提供依据。方法 通过 OPA-FMOC柱前衍生化法,建立同时检测血必净注射液中18种常见氨基酸的液相色谱法。色谱柱为Agilent SB-C18柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相A为0.02 mol/L醋酸钠溶液（含200 μL/L三乙胺和3.5 mL/L四氢呋喃,2%醋酸溶液调pH 7.2±0.05）,流动相B为0.02 mol/L醋酸钠溶液–甲醇–乙腈（200∶400∶400）（pH 7.2±0.05）,梯度洗脱;体积流量：0～38 min为1.0 mL/min;柱温40 ℃;检测波长0～32.5 min为338 nm,32.5 min以后为262 nm。结果 所测18种氨基酸在各自的高、低质量浓度范围内线性关系良好;3个批次血必净注射液中,游离氨基酸测定平均值为1.320 mg/mL,总氨基酸测定平均值为2.027 mg/mL。结论 所建立的氨基酸定量方法结果准确可靠,重现性好,有助于血必净注射液的质量控制,对中药注射剂安全评价标准的提高具有指导意义。     

柱前衍生HPLC法测定大鼠肾组织中羟脯氨酸的含量

目的:建立一种测定大鼠肾组织中羟脯氨酸(Hyp)含量的柱前衍生HPLC法.方法:将大鼠肾组织以6 mol · L-1盐酸于110℃水解24 h,加入9-芴甲氧基羰酰氯(FMOC)衍生后,进行HPLC分析.HPLC分析条件为:Phenomenex C18色谱柱(4.60 mm× 150 mm,5(m);流动相:醋酸钠缓冲液( pH3.78)-甲醇-乙腈(梯度洗脱);流速:1.0 ml·min-l;柱温:40C;检测波长:265 nm.结果:羟脯氨酸在浓度范围为15.30～612.00 mg·L-1内线性良好(r =0.9999);回收率为97.4％～103.9％.结论:该方法简单、准确、灵敏,可用于测定大鼠肾组织中羟脯氨酸的含量.     

HPLC法测定麝香止痛贴膏药材浸膏中欧前胡素的含量

目的建立HPLC法测定麝香止痛贴膏的药材浸膏中欧前胡素含量的方法。方法采用高效液相色谱法,COSMOSIL MS-Ⅱ柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-水(54∶46);流速:1.0mL.min-1;检测波长:300nm;柱温:40℃。结果欧前胡素在25.12~226.1ng范围内呈良好的线性关系,回收率为99.95%,RSD为1.84%。结论本方法简便、快速、准确,可用于测定麝香止痛贴膏药材浸膏中欧前胡素的含量。     

利用酸水解氨基酸法测定脑蛋白水解物片中肽的含量

目的：探讨脑蛋白水解物片中肽含量的测定方法。方法：采用盐酸水解多肽方法,利用WatersAccQ-Tag氨基酸衍生技术,使用Kromasil100-5C,8色谱柱（250．0mmX4．6mm,5μm）进行液相色谱分析,以乙酸钠（pH=5．00）缓冲液为流动相A,60％乙腈为流动相B进行梯度洗脱,检测波长为248nm,柱温为37℃,进样量为5肛l。水解后游离氨基酸总量扣除水解前氨基酸总量即为肽含量。结果：各氨基酸测定结果具有良好线性（r=-0．999 1-0．9999,n=5）,未水解氨基酸平均回收率为100．6％（RSD为0．7％,n=9）,肽含量平均回收率为100．4％（RSD为1。1％,n=9）。结论：本方法准确可行,可作为药品中肽含量测定的方法补充和完善。     

柱前衍生HPLC法测定大鼠肾组织中羟脯氨酸的含量

目的:建立一种测定大鼠肾组织中羟脯氨酸(Hyp)含量的柱前衍生HPLC法。方法:将大鼠肾组织以6 mol·L-1盐酸于110℃水解24 h,加入9-芴甲氧基羰酰氯(FMOC)衍生后,进行HPLC分析。HPLC分析条件为:Phenomenex C18色谱柱(4.60 mm×150 mm,5(m);流动相:醋酸钠缓冲液(pH3.78)-甲醇-乙腈(梯度洗脱);流速:1.0 ml·min-1;柱温:40℃;检测波长:265 nm。结果:羟脯氨酸在浓度范围为15.30～612.00 mg.L-1内线性良好(r=0.9999);回收率为97.4%～103.9%。结论:该方法简单、准确、灵敏,可用于测定大鼠肾组织中羟脯氨酸的含量。