转染bcl—1基因抑制足叶乙甙诱导的K562细胞凋亡

观察ｂｃｌ－２对Ｋ５６２细胞凋亡的影响。方法：用真核表达质粒ｐ２９０－ｂｃｌ－２转染Ｋ５６２细胞，用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ和蛋白表达；用ＭＴＴ实验检测Ｋ５６２细胞对化疗药物足叶乙甙的敏感性变化；用ＤＮＡ“ｌａｄｄｅｒ”检测ｂｃｌ－２对凋亡的影响。     

低表达bcl-2对神经酰胺诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的观察无血清条件下bcl-2对神经酰胺诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法通过脂质体介导的基因转染，建立稳定转染表达反义bcl-2 mRNA的cDNA片段的真核表达质粒的人肝癌细胞HepG2（HepG2—anti-bcl-2）并鉴定，采用AO-EB荧光染色、流式细胞术DNA倍体分析和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡，分光光度法测定Caspase-3活性。结果终浓度50μmol／L C2-神经酰胺作用24h，可诱导无血清培养的HepG2细胞、HepG2-vector细胞及HepG2-anti—bcl-2细胞发生凋亡。AO-EB染色可见典型的细胞凋亡表现。流式细胞仪检测显示C2-神经酰胺作用12，18，24h，HepG2—anti—bcl-2细胞凋亡率较同时间HepG2细胞及HepG2—vector细胞凋亡率显著增加（P〈0．05）。终浓度50μmol／L C2-神经酰胺作用12h，HepG2—anti—bcl-2细胞DNA凝胶电泳呈现梯状条带，而HepG2细胞及HepG2—vector细胞作用24h出现DNA梯状条带。HepG2细胞和HepG2-vector细胞Caspase-3活性随C2-神经酰胺（50μmol／L）作用时间延长而增强，HepG2-anti—bcl-2细胞Caspase-3活性始终维持较高水平。结论低表达bcl-2可通过增加Caspase-3活性从而促进C2-神经酰胺诱导的HepG2细胞凋亡。     

反义BCR/ABL寡核苷酸体外抑制K562细胞的研究

目的：探讨反义ＢＣＲ和ＡＢＬ融合基因（ＢＣＲ／ＡＢＬ融合基因）寡核苷酸体外抑制Ｋ５６２细胞的作用及机制。方法：采用Ｋ５６２细胞培养,观察反义ＢＣＲ／ＡＢＬ寡核苷酸体外对Ｋ５６２细胞数、台盼蓝拒染率及克隆形成等的影响。结果：经反义ＢＣＲ／ＡＢＬ寡核苷酸ｂ３ａ２（ＡＳｂ３ａ２）处理后培养８ｄ的Ｋ５６２克隆抑制率达６０６９％,液体培养中细胞数从２４ｈ开始较对照组减少,细胞存活率从８ｈ开始即较对照组明显下降,ＢＣＲ／ＡＢＬ寡核苷酸ｂ２ａ２（ＡＳｂ２ａ２）及无义寡核苷酸对Ｋ５６２细胞数和存活率无明显影响;３种寡核苷酸对ＨＬ６０细胞数和存活率也无影响。结论：ＡＳｂ３ａ２对Ｋ５６２细胞有序列特异性的抑制作用。ＡＳｂ３ａ２的这种抑制作用可能在于它诱导Ｋ５６２细胞的凋亡。     

转染的FasL基因诱导HCC9204细胞凋亡的形态学研究

目的 构建含FasL基因的腺病毒载体，转染肝癌9204细胞株，观察FasL基因对9204细胞株的影响。方法 以腺病毒作载体，把FasL基因克隆入腺病毒载体，构建成含FasL基因的转基因载体并酶切鉴定，用脂质体包裹法把含FasL的腺病毒载体转染HCC9204细胞株，用RT－PCR方法证实转染后有无FasL基因表达，采用电镜观察9204细胞形态学变化。结果 酶切鉴定证实含FasL基因的转基因载体构建成功；RT－PCR显示转染后9204细胞株FasL基因表达水平显高于未转染细胞株（P＜0.01）；肝癌细胞株9204转染FasL基因72h后，在光镜下可见调亡细胞体积缩小，生长不良，染色质浓度，密度增高，胞核中出现颗粒样物质，电镜下可见调亡小体。结论 成功地构建了FasL基因的转基因载体；转染FasL基因可诱导肝癌9204细胞株出现凋亡。     

高三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡中bcl-2家族基因的表达

目的探讨在高三尖杉酯碱(HHT)诱导K562细胞凋亡时,bcl-2家族部分基因在mRNA水平表达的改变.方法细胞形态(光镜和电镜)、DNA凝胶电泳、流式细胞仪等方法证实凋亡,进一步用RT-PCR方法研究凋亡过程中bcl-2家族中部分基因表达的改变. 结果超过一定"阈浓度”HHT可诱导K562细胞凋亡;RT-PCR方法发现bax基因和bfl-1基因在加药6h开始上调,家族其它基因bcl-2、bcl-xL的表达未见明显改变.结论 HHT可诱导K562细胞凋亡;其机制可能与HHT在mRNA水平上调bax基因有关;而bfl-1基因的上调可能是K562细胞抗HHT诱导其进一步凋亡的原因.     

脐血CD3AK细胞诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的 :探讨脐血CD3AK细胞诱导K5 6 2、HL 6 0细胞凋亡的作用。方法 :用细胞形态学观察、DNA琼脂糖电泳、原位末端标记法检测K5 6 2、HL 6 0细胞。结果 :K5 6 2细胞自然凋亡率 (3.5 0± 0 .97) % ,脐血CD3AK诱导的K5 6 2细胞凋亡率 (2 7.40± 4.6 4) % ;HL 6 0细胞自然凋亡率 (4.10± 1.10 ) % ,脐血CD3AK诱导的HL 6 0细胞凋亡率(2 1.10± 3 .82 ) % ,均有显著性差异。结论 :脐血CD3AK细胞能诱导K5 6 2、HL 6 0细胞凋亡 ,而且诱导K5 6 2凋亡的能力更强。     

PTEN基因诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡及bcl-2表达下调

目的 探讨PTEN基因对人脑胶质瘤SHG－44细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2表达的影响，阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法PTEN基因体外转染SHG－44细胞，筛选阳性细胞克隆，以原位杂、免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况；采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况；以免疫荧光法检测bcl-2基因的表达。结果 PTEN基因转染的SHG－44细胞有PTEN蛋白的表达。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞质浓缩、核破裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现；流式细胞仪显示细胞周期从G1期到S期发生抑制，并且在G1期峰前出现一明显的凋亡峰（15．9％）；细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带；bcl-2的表达也显著下调。结论 PTEN基因可诱导SHG－44细胞凋亡，并下调bcl-2蛋白的表达，这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制之一。     

反义p21WAF1/CIP1基因转染对肾癌细胞凋亡抑制作用的影响

目的 探讨p21^WAF1/CIP1基因在顺铂诱导的GRC-1肾癌细胞凋亡过程中的作用。方法 使用脂质体转染方法将正义p21^WAF1/CIP1基因及反义p21^WAF1/CIP1基因基因分别导入GRC-1肾癌细胞系中，对所获转染细胞进行形态学观察和流式细胞仪检测。结果 在正义p21^WAF1/CIP1基因基因转染后GRC-1肾癌细胞中，顺铂诱导细胞凋亡的作用增强；在反义p21^WAF1/CIP1基因基因转染后GRC-1肾癌细胞中，顺铂诱导细胞凋亡的作用受到抑制。结论 在GRC-1肾癌细胞中，顺铂诱导的细胞凋亡至少部分是通过p21^WAF1/CIP1基因基因发挥作用。p21^WAF1/CIP1基因基因作为一个与细胞凋亡的相关基因可能参与肾癌细胞凋亡的调控。     

转染p53抑癌基因体外抑制K562细胞克隆的形成

目的：构建ｐ５３表达质粒，研究ｐ５３基因对白血病细胞Ｋ５６２细胞生长的抑制作用。方法：以Ｔ４连接酶把２１６０ｂｐ的ｐ５３ｃＤＮＡ片段插入ｐＲｃ／ＣＭＶ质粒，重组构建ｐＲｃ／ｐ５３表达质粒，以Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导ｐＲｃ／ｐ５３质粒转染Ｋ５６２细胞，以甲基纤维素半固体培养方法作Ｋ５６２细胞体外克隆培养，观察转染ｐ５３基因后Ｋ５６２细胞克隆形成改变。结果：ｐ５３ｃＤＮＡ质粒转染的Ｋ５６２细胞，体外培养克隆形成能力明显减低。在接种１×１０４细胞时，未转染的空白对照组及空质粒对照组白血病细胞集落数分别是２７９７±２６４和２７２５±２６１；而ｐ５３质粒转染组细胞集落数是１０６１±１６０；与空质粒转染组及未转染的Ｋ５６２细胞组比较有非常显著性差异（Ｐ＜０００１，ｎ＝１０）。结论：转染ｐ５３基因能抑制Ｋ５６２细胞的生长。     

VP-16诱导HL-60细胞凋亡的研究

探讨topoⅡ抑制剂的抗瘤机制。方法选择人急性早幼粒细胞白血病细胞株HL－60为实验模型,以VP－16为诱导剂,用形态学观察、DNA电泳及流式细胞术(FCM)等方法对其凋亡情况进行了研究。 结果经VP－16处理的HL－60细胞呈典型凋亡形态学改变,出现梯状DNA条带(DNA ladder),FCM DNA直方图上G 0／G t峰前有明显的亚二倍体凋亡峰。表明经VP-16处理的HL-60细胞的确发生了凋亡,这种调亡作用对药物有浓度依赖性,但无严格时间依赖性,不需药物的持续作用,并与S期细胞降低有关。而缺乏topoⅡ的HPBL则无此作用,不受VP－16诱导而凋亡。结论诱导细胞凋亡是VP－16的抗瘤机制之一,且这种作用是由topoⅡ介导的。     

参与缺血缺氧性血管内皮细胞凋亡的因素

缺血缺氧 (IH)可导致血管内皮细胞 (VEC)发生凋亡 ,但对其发生机制的阐明还缺乏有力佐证。目前研究表明 ,Caspases家族和 Bc1 -2家族的部分成员及活性氧都与缺血性内皮细胞凋亡有关 ;Ca2 、兴奋性氨基酸受体、核因子 NF-k B、Fas及 TNF-α等的作用还需进一步探讨。研究细胞凋亡的发生机制 ,可为疾病治疗提供有力的理论参考     

bcl-2/bax基因在铁诱导肝细胞凋亡中的作用

目的：研究bcl-2,bax基因在铁负荷诱导肝细胞凋亡中的作用。方法：右旋糖酐铁复制大鼠高铁负荷模型，以CCl4攻击，观察各实验组（高铁组，CCl4组，CCl4 高铁组）和空白对照组的血清铁（serum iron ,SI)，肝组织铁及丙二醛（malondialdehyde,MDA)含量变化，流式细胞仪检测肝细胞DNA含量，bcl-2,bax表达量，计算凋亡指数（apoptotic index,AI)和增殖指数（poliferation index,PI)，结果：高铁组不仅大鼠SI，肝组织铁及MDA含量增加，而且AI升,.bax水平上调，PI无明显变化，CCl4 高铁组与高铁组相比，MDA，AI,bax均有显著增加。结论：高铁负荷诱导肝细胞亡的机制可能为：上调促凋亡基因bax水平，催化脂质过氧化反应，促进氧自由基产生，铁负荷与CCl4有引起肝细胞凋亡的作用。     

丝裂霉素诱导人膀胱癌细胞凋亡的研究

为进一步探讨丝裂霉素膀胱内灌注治疗膀胱肿瘤的机制，研究了丝裂霉素诱导人膀胱癌 Ｂ Ｉ Ｕ８７ 细胞凋亡的规律。形态学观察具有典型凋亡征象，胞浆浓缩，染色质凝集，核固缩、裂解及凋亡小体。凋亡指数与诱导时间呈正相关（ Ｐ＜ ０．０１）；流式细胞仪 Ｄ Ｎ Ａ 直方图上出现特征性的亚二倍体（亚 Ｇ１ ）峰；凋亡过程中伴 Ｂｃｌ２ 基因的下调，且与诱导时间呈负相关 （ Ｐ＜ ００１）。提示丝裂霉素诱导癌细胞凋亡是腔内化疗的重要机制，降低 Ｂｃｌ２ 的表达可提高膀胱癌腔内化疗的疗效。     

iNOS转基因诱导裸鼠移植瘤细胞凋亡及其与p53表达相关性的实验研究

目的观察诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)基因转染对人喉鳞癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响,研究在体人喉鳞癌细胞中iNOS与突变型p53基因的表达,探讨二者的相关性及促进肿瘤细胞凋亡的机制。方法将iNOS基因转染人喉鳞癌Hep-2细胞并筛选出阳性克隆细胞进行扩增,制备荷瘤细胞小鼠模型,致瘤小鼠随机分为3组,转染组,转染空载体组,未转染组。应用逆转录-聚合酶链反应检测各组喉鳞癌组织中iNOS与p53 mRNA的表达,免疫组织化学检测各组喉鳞癌组织中iNOS与p53蛋白的表达,流式细胞术检测各组喉鳞癌组织中iNOS与p53蛋白、细胞凋亡及细胞周期的变化。结果转染组iNOS与p53蛋白及其mRNA的表达明显高于转染空载体组和未转染组,且iNOS与p53的表达呈明显的正相关(P<0.01)。转染空载体组和未转染组iNOS与p53蛋白及其mRNA的表达无明显差别。同转染空载体组和未转染组相比,转染组喉癌细胞发生了明显的G0/G1期阻滞,同时出现了明显的凋亡峰,瘤体积出现了明显的减小,转移发生率明显降低。结论iNOS基因转染能明显增加iNOS mRNA的表达从而增加了iNOS蛋白的表达,iNOS蛋白的表达使瘤细胞内合成大量的一氧化氮,从而诱导p53基因的大量表达,促进了肿瘤细胞凋亡,推测p53基因诱导肿瘤细胞凋亡的机制可能同细胞发生G0/G1期周期阻滞有关。     

THE EFFECTS OF LOW CONCENTRATIONS OF ZINC ON ETOPOSIDE INDUCED HL-60 CELLS APOPTOSIS

ffeStlln Mif Etudier leS effets du zinc d faible concntration (20 -- 4W/L, tw d lacoeatration Phwtque) sur I' ewbe des celluleS ffe60 induite per I' e~. bo Cytcrndtris au fias, extractthe et dlect-- de l' ADN, fortha mOWque por mimp d fiuons-ceme. Wlfots II eSt theontrd que le zinc d concentration faible peut infiuencer l' awrbe nd celIules.Si le zinc est ajoutd tris t6t, W une concentratthe de W/L, arrve d inhiler comPlebet en 4 heuresl'M des celluleS ffe60 induite per Who. Miis d c…     

VP-16诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡的研究

为研究ＶＰ－１６对雄激素非依赖性前列腺癌细胞ＰＣ－３凋亡的诱导作用,应用ＨＥ染色观察细胞的形态学改变,以ＤＮＡ凝胶电泳和流式细胞术（ＦＣＭ）分析细胞凋亡和细胞周期分布,同时应用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法研究ＶＰ－１６对ＰＣ－３细胞ＤＮＡ合成的影响。结果表明,（１）凋亡的ＰＣ－３细胞呈明显的形态学改变;（２）ＤＮＡ断裂呈梯形变化;（３）ＰＣ－３细胞凋亡率随ＶＰ－１６作用浓度增加和时间延长逐渐增高;（４）ＶＰ－１６能够明显抑制ＰＣ－３细胞ＤＮＡ的合成。提示ＶＰ－１６可诱导前列腺肿瘤细胞凋亡。     

紫杉醇诱导9L胶质瘤细胞凋亡的体外实验研究

目的：通过体外实验探讨紫杉醇对恶性胶质瘤９Ｌ细胞株有否凋亡诱导作用。方法：在经ＭＴＴ比色法测试到紫杉醇对９Ｌ细胞具有细胞毒作用的前提下,进一步通过形态学观察,ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪来检测其细胞毒作用是否与诱导细胞凋亡有关。结果：紫杉醇对９Ｌ细胞具显著细胞毒作用;０１μｍｏｌ／Ｌ紫杉醇作用下９Ｌ细胞分裂主要被阻滞在Ｇ２／Ｍ期,并在第７２ｈ出现凋亡细胞峰,此时培养细胞ＨＥ染色表现出典型的凋亡细胞形态特征,抽提其ＤＮＡ做琼脂糖凝胶电泳显示凋亡特有的ＤＮＡ“阶梯”。结论：紫杉醇具有抗胶质瘤作用,其机制与诱导细胞凋亡有关,通过进一步的体内实验,可为其最终广泛应用于临床脑胶质瘤病人提供充分的理论依据。     

再生障碍性贫血血清抑制物诱导脐血造血细胞凋亡

目的研究再生障碍性贫血血清抑制物诱导人脐血造血细胞凋亡作用。方法提纯的再障血清抑制物加到人脐血造血细胞培养体系中,采用形态学观察及TUNNL法测定细胞凋亡。结果20例脐血造血细胞与0．1μ／ml,1μg／ml,10μg／ml的再障血清抑制蛋白组分共同培养后,凋亡细胞发现率分别为3．5±1.6％（P＞0.06）,41±9．8％（P＜0.01）,60.3。18.2％（P＜0.01）而对照组为2.6±1.5％。结论再降血清抑制蛋白组分量与脐血造血凋亡细胞数量呈正相关。证明再障血清抑制蛋白组分与造成血细胞凋亡有一定的量效关系,推测造血细胞凋亡增加可能是再障发病的主要机制。     

高糖诱导人肾小管上皮细胞凋亡的机制研究

目的探讨高血糖对人肾小管上皮细胞活性氧（ROS）产生及凋亡的影响。方法将人近端肾小管上皮细胞（HKC）分别以不同时间在含有5.5 mM D（右旋）-葡萄糖（正常糖对照组）、25 mMD-葡萄糖（高糖组）和20 mML（左旋）-葡萄糖＋5.5 mMD-葡萄糖（渗透压对照组）的DMEM培养基中培养。用化学发光法特异性检测细胞内H2O2水平。将细胞用荧光染料CM-H2DCFDA标记后用激光共聚焦显微镜检测活细胞中总ROS水平。用荧光染料Hoechst33258对细胞染色后在荧光显微镜下计数细胞凋亡率。用AnnexinV-FITC/碘化丙锭双染后用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。在高糖组中同时加入30 mM的抗氧化剂牛磺酸,观察其对细胞凋亡的影响。结果化学发光法检测和共聚焦显微镜检测显示高糖可明显促进肾小管上皮细胞内活性氧的产生,与其他两对照组比较有显著差异（P〈0.01）;Hoechst33258染色法检测和流式细胞仪检测分析显示高糖可明显诱导肾小管上皮细胞的凋亡发生,与其他两对照组比较有显著差异（P〈0.01）;流式细胞仪检测分析显示抗氧化剂牛磺酸可明显抑制高糖诱导的肾小管细胞凋亡,与高糖组比较有显著差异（P〈0.01）。结论高糖可通过促进细胞内生成过量ROS而诱导肾小管细胞凋亡发生,抗氧化剂可阻断高糖诱导的肾小管细胞凋亡。